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    硫酸化黨參多糖對H2O2致RAW264.7細胞損傷和小鼠急性酒精損傷的保護作用

    2022-07-07 09:27:36孫嘉琪楊詩靖郭世寧石達友
    畜牧獸醫(yī)學報 2022年6期
    關(guān)鍵詞:小鼠急性血清

    孫嘉琪,楊詩靖,譚 盈,白 霖,郭世寧,2,石達友,2*,劉 翠*

    (1.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院,廣州 510642; 2.廣東省獸用中藥與天然藥物工程技術(shù)研究中心,廣州 510642)

    酗酒是一個重要的全球健康問題,酒精攝入過多會引起機體肝損傷、免疫功能及脂質(zhì)代謝紊亂,其中免疫功能失調(diào)在急性酒精損傷的發(fā)展中扮演著重要角色。研究表明,酒精誘導的急性損傷模型中,小鼠體內(nèi)炎性細胞因子、趨化因子增加,激活體內(nèi)免疫系統(tǒng)。在中醫(yī)理論中,酒性濕熱,過量飲酒之后,濕熱毒邪蘊結(jié)體內(nèi),損傷及脾,致脾之運化功能失司,機體免疫力下降。黨參(())作為我國傳統(tǒng)藥物,具有健脾益氣、養(yǎng)血生津之功效,常用于脾肺氣虛、食少倦怠、咳嗽虛喘等方面的治療?,F(xiàn)代研究表明,黨參含有多種天然藥理活性成分,如多糖、皂苷、生物堿、黃酮類等,其中黨參多糖(polysaccharide,CP)具有包括免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤等廣泛的藥理作用。研究表明,CP可改善由環(huán)磷酰胺所致免疫抑制大鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù),提高血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、補體C3、補體C4水平,增強大鼠的免疫功能。近年來,利用硫酸化修飾獲得的硫酸化多糖具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用。本研究旨在探究硫酸化黨參多糖(sulphatedpolysaccharide,SCP)對小鼠急性酒精損傷的保護作用,篩選出對急性損傷具有良好保護作用的中草藥活性成分,為研制新型中獸藥提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 細胞

    RAW 264.7細胞,來源于ATCC細胞庫。

    1.2 試驗動物

    四周齡雄性昆明小鼠,體重20~25 g,購自濟南朋悅實驗動物繁殖有限公司,實驗單位使用許可證編號:SYXK(粵)2014-0136,合格證號:37009200008032。試驗期間飼喂小鼠全價飼料,自由飲水及采食,室溫控制在19~25 ℃,相對濕度為30%~70%。

    1.3 主要儀器與試劑

    BDS系列倒置生物顯微鏡購自重慶奧特光學儀器責任有限責任公司;Thermo 3111CO培養(yǎng)箱購自美國Thermo Fisher Scientific;MK3型酶標儀購自賽默飛(上海)儀器有限公司;DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清購自Gibco公司;磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、青鏈霉素雙抗購自北京鼎國生物技術(shù)有限公司;二甲基亞砜(DMSO)購自天津市灝洋生物制品科技責任有限公司;噻唑藍(MTT)購自索萊寶生物科技有限公司;30% HO試劑購自廣州化學試劑廠,批號:20160401-1;ELISA檢測試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司,批號:201709。

    1.4 制備CP與SCP

    用水煎醇沉法從黨參飲片中提取總多糖,選用sevage法去除蛋白,以DEAE-52纖維柱分離純化,制備CP。采用氯磺酸-吡啶法,以氯磺酸-吡啶(1∶6)制備酯化試劑,將CP在80 ℃下震蕩反應(yīng)3 h,乙醇沉淀后制備SCP。SCP的制備方法參照文獻[11];采用苯酚-硫酸法,測定CP糖含量為81.20%,SCP糖含量為66.30%。

    1.5 體外試驗

    1.5.1 RAW 264.7細胞急性損傷模型建立 以10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)RAW 264.7細胞,待其生長至對數(shù)生長期時用于試驗。將細胞濃度調(diào)整至5×10個·mL加入96孔板,每孔100 μL,37 ℃、5% CO培養(yǎng)17 h后,在每孔分別加入不同濃度的HO,從濃度為200 mmol·L倍比稀釋11個濃度,分別于0.5、1 h后,用PBS漂洗2次,DMEM培養(yǎng)液換液,加入MTT 30 μL,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,加入DMSO 100 μL,搖勻,酶聯(lián)免疫儀檢測570 nm處吸光值(A值),計算RAW 264.7細胞經(jīng)HO氧化損傷刺激的抑制率:細胞抑制率(%)=(空白組OD組-HO組OD值/空白組OD值)×100。

    1.5.2 SCP對HO誘導細胞的生長狀態(tài)的影響 將處于對數(shù)生長期的RAW 264.7細胞濃度調(diào)至5×10個·mL,加入96孔板中,每孔100 μL,37 ℃、5% CO培養(yǎng)24 h后,分別加入不同濃度的CP與SCP,加入的CP和SCP濃度根據(jù)前期預(yù)試驗結(jié)果篩選得出,CP濃度為2、2、2mg·mL,SCP濃度為2、2及2mg·mL。另設(shè)空白對照組(加含10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液)及陽性對照組(10 μg·mL),繼續(xù)培養(yǎng)24 h后,加入終濃度為12.5 mmol·L的HO培養(yǎng)1 h,建立HO氧化損傷;應(yīng)用倒置顯微鏡觀察HO刺激下各組RAW 264.7細胞生長狀態(tài)。

    1.5.3 SCP對HO誘導細胞的吞噬功能的影響 如“1.5.2”所述建立HO氧化損傷后,收集細胞,PBS洗滌細胞2次,各組分別加入FITC-葡聚糖,37 ℃避光孵育30、60、90 min,另設(shè)4 ℃對照組;孵育后各組加入PBS,2 000 r·min離心10 min,棄去上清,重復洗滌2次,除去未吸附的FITC-葡聚糖;PBS重懸細胞,配成1×10個·mL懸浮液,以未加FITC-葡聚糖的RAW 264.7作為陰性對照,流式細胞儀檢測染色細胞熒光。

    1.5.4 SCP對HO誘導細胞的細胞因子釋放的影響 如“1.5.2”所述建立HO氧化損傷后,收集各組細胞上清液,采用ELISA法分別測定上清液白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、干擾素-γ(IFN-γ)的含量。

    1.6 體內(nèi)試驗

    1.6.1 試驗分組與處理 90只雄性昆明小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d,隨機分成9組,分別為空白對照組(B),模型對照組(MO),VC對照組(VC),CP低、中、高劑量組(CPL、CPM、CPH),SCP低、中、高劑量組(SCPL、SCPM、SCPH)。CP與SCP的3個劑量組分別按100、200、300 mg·kg小鼠體重每天進行灌胃維生素C,VC組按100 mg·kg小鼠體重每天進行灌胃,B和MO組給予同體積雙蒸水,連續(xù)灌胃30 d,末次灌胃后,禁食16 h,除B組外其余組小鼠灌胃50%乙醇12 mL·kg建立小鼠急性酒精損傷模型。

    1.6.2 生長情況 試驗期間觀察各組小鼠生長情況。分別于給藥前(D)和給藥后第7(D)、14(D)、21(D)及30(D)天稱量各組小鼠體重,計算平均體重,并計算平均日增重(ADG)=(終末體重-初始體重)/天數(shù)。

    1.6.3 血液生理學檢測 灌服乙醇6 h后,每組隨機抽取5只小鼠,摘眼球采抗凝血,用全自動血細胞分析儀測定血液中白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)、淋巴細胞(LYM)和紅細胞比容(HCT)的含量變化。

    1.6.4 血清生化學檢測 灌服乙醇6 h后,每組隨機抽取5只小鼠,摘眼球采血,析出血清,用全自動血生化分析儀測定血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、乳酸脫氫酶(LDH)的含量變化。

    1.6.5 血清免疫因子測定 灌服乙醇6 h后,每組隨機抽取5只小鼠,摘眼球采血,分離血清,用ELISA法測定IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的含量。

    1.6.6 臟器指數(shù) 造模6 h后,分別對每組小鼠稱量體重,剖檢,取心、肝、脾、肺、腎,稱重,計算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)=臟器重量(mg)/體重(g)。

    1.7 數(shù)據(jù)處理

    試驗數(shù)據(jù)用SPSS 22.0統(tǒng)計分析軟件單因素ANOVA分析各組間的差異顯著性,通過Duncan’s新復極差檢驗法進行各組間的多重比較,結(jié)果以“平均數(shù)±標準誤”表示。采用GraphPad Prism 5軟件制作柱狀圖。

    2 結(jié) 果

    2.1 RAW 264.7細胞急性損傷模型建立

    不同濃度、不同作用時間下HO刺激RAW 264.7細胞的抑制率如圖1所示,200 mmol·L的HO對RAW 264.7的抑制率均最高,隨著HO濃度的降低對RAW 264.7細胞的抑制作用呈下降趨勢,25~200 mmol·L的HO作用0.5 h下對RAW 264.7細胞的抑制率>50%;12.5~200 mmol·LHO作用1 h對RAW 264.7細胞的抑制率>50%,且12.5與25、50 mmol·LHO作用1 h的抑制率無顯著差異(>0.05)。因此,選擇12.5 mmol·LHO作用1 h建立RAW 264.7細胞急性損傷模型。

    A. H2O2刺激0.5 h;B. H2O2刺激1 h。柱上不同字母表示差異顯著(P<0.05)A. H2O2 stimulate 0.5 h; B. H2O2 stimulate 1 h. Different letters on the colum indicate significant difference (P<0.05)圖1 不同濃度H2O2對RAW 264.7細胞的抑制率Fig.1 Inhibition rate of different concentrations of H2O2 on RAW 264.7 cells

    2.2 SCP對H2O2誘導細胞的生長狀態(tài)的影響

    各組RAW 264.7細胞生長狀態(tài)如表1所示,B組 細胞生長狀態(tài)良好,貼壁性好,個別細胞有輕微分化,細胞密度大,局部細胞發(fā)生復層;MO組細胞貼壁不良,大部分細胞發(fā)生完全分化,細胞較為稀疏,密度較B組低,培養(yǎng)液中略微存在細胞碎片。除CPL組細胞密度較低外,其余各給藥組細胞生長狀態(tài)良好,密度較大,局部細胞出現(xiàn)復層,與B組相似。其中SCP各組的細胞密度、生長狀態(tài)較佳,與B組及VC組相似。

    2.3 SCP對H2O2刺激下RAW 264.7細胞的吞噬功能影響

    由表2可知,4 ℃條件下,除SCPL組外,各組細胞的吞噬率均最低;37 ℃條件下,隨作用時間的延長,各組細胞的吞噬率呈上升趨勢。不同溫度與作用時間下MO組的細胞吞噬率均最低,37 ℃時顯著低于B組。4 ℃條件下,SCPL、SCPM、CPL組顯著高于MO組(<0.05),且SCPL、SCPM、CPL組吞噬率與VC組差異不顯著(>0.05);37 ℃下作用30 min,除SCPL組外,其余各組吞噬率均顯著高于MO組(<0.05),其中SCPH、CPM組與VC組差異不顯著(>0.05);作用60 min,SCPL、CPL組與VC組差異不顯著(>0.05),SCPM組顯著高于VC組(<0.05);作用90 min,除CPM組外,各組吞噬率均顯著高于MO組(<0.05),其中SCPL、SCPM組與VC組差異不顯著(>0.05)。SCP對HO刺激下RAW 264.7細胞的吞噬作用優(yōu)于CP,尤其是SCPL、SCPM組。

    表1 各組對H2O2刺激下RAW 264.7細胞生長狀態(tài)的影響

    表2 各組對H2O2刺激下RAW 264.7細胞的吞噬率影響

    2.4 SCP對H2O2刺激下RAW 264.7細胞的細胞因子水平影響

    由表3可知,各組IL-2水平,與B組相比,MO組顯著降低(<0.05),各SCP與CP組的IL-2水平均升高,與B組無顯著差異(>0.05);IL-4水平,與B組相比,MO組IL-4水平顯著升高(<0.05),SCPL、SCPM、SCPH及CPH組IL-4水平顯著低于VC組(<0.05);IL-10水平,與B組相比,MO組IL-10水平降低,VC、CPL、SCPH和SCPL組IL-10水平高于MO組,且SCPH組IL-10水平高于VC組,但各組之間差異不顯著(>0.05);IFN-γ水平,與B組相比,MO組IFN-γ水平顯著降低(<0.05),各SCP與CP組的IFN-γ含量顯著高于MO組(<0.05),其中SCPL、CPL組與B組、VC組差異不顯著(>0.05)。SCP各組對IL-4分泌的抑制作用以及對IFN-γ、IL-10分泌的促進作用優(yōu)于CP各組,對IL-2分泌的促進作用與CP各組無顯著差異,因此SCP對急性損傷細胞分泌細胞因子的調(diào)節(jié)作用效果優(yōu)于CP。

    表3 各組對RAW 264.7細胞分泌細胞因子水平影響(n=5)

    2.5 SCP對小鼠生長情況的影響

    觀察各組小鼠30 d內(nèi)的生長情況,各組小鼠均精神正常、飲食正常,被毛順滑,無脫毛或毛發(fā)雜亂現(xiàn)象。如表4所示,在D,各組小鼠體重無顯著差異(>0.05);在D,SCPH組小鼠體重顯著高于B組與MO組體重(<0.05);D,SCPH組小鼠體重顯著高于B組(<0.05);在D,SCPH、CPM組小鼠較其他組高,但無顯著差異(>0.05);在D,SCPH、CPL組小鼠體重較其余組高,但無顯著差異(>0.05);各組小鼠平均日增重無顯著差異(>0.05)。

    表4 各組小鼠的生長情況(n=10)

    2.6 SCP對酒精損傷小鼠血液生理學指標影響

    根據(jù)表5,各組WBC結(jié)果顯示,與B組相比,MO組WBC數(shù)量升高,且高于正常范圍4.63×10~7.63×10個·L,SCPL、SCPM、CPL和CPH組能夠使WBC恢復至正常水平(<0.05);RBC結(jié)果顯示,MO組處于正常范圍9.11×10~13.17×10個·L,但與B組相比顯著下降(<0.05),各給藥組RBC數(shù)量均較MO組上升,其中SCPH以及CP各組顯著升高(<0.05);小鼠PLT正常范圍為762.93×10~1 189.91×10個·L,而本研究中VC組PLT以及各給藥組均高于正常范圍,這可能是因為雄性小鼠PLT水平會隨著年齡的增長而增加;HGB正常范圍為141.69~173.81 g·L,MO組HGB低于正常范圍,除SCPM組外,各給藥組可升高HGB至正常范圍;LYM的正常范圍為57%~85%,MO組LYM在正常范圍內(nèi),但有升高趨勢,SCPM以及CP各組LYM較MO組顯著下降(<0.05);HCT的正常范圍為44%~56%,MO組HCT處于正常范圍,但存在下降趨勢,SCPH組以及CP各組HCT較MO組顯著上升(<0.05)。 SCP能夠恢復小鼠血液中WBC、HGB至正常水平,一定程度上改善酒精損傷小鼠的血液生理學指標。

    表5 各組小鼠的血液生理指標(n=5)

    2.7 SCP對酒精損傷小鼠血清生化學指標影響

    TG正常生理范圍為1.06~2.20 mmol·L,由表6可知,MO組為(4.10±0.78)mmol·L,顯著高于正常生理范圍(<0.05),SCPL和SCPM組能夠使TG含量恢復至正常范圍(<0.05);TC正常生理范圍為2.86~3.64 mmol·L,MO組為(1.96±0.17)mmol·L,顯著低于生理范圍(<0.05), 除SCPL和VC組外,各給藥組顯著升高(<0.05),其中SCPM和SCPH組使TC恢復至正常范圍,效果最佳;LDH正常生理范圍為1 325.8~2 193.3 U·L,MO組小鼠LDH為(607.25±245.00)U·L,顯著低于生理范圍(<0.05),SCP和CP均能顯著升高LDH至正常范圍(<0.05)。SCP和CP均能恢復小鼠血清中TG、TC、LDH至正常水平,改善酒精損傷小鼠的血清生化學指標,其中SCP對TG和TC的恢復作用優(yōu)于CP。

    2.8 SCP對酒精損傷小鼠血清免疫因子指標影響

    由表7可看出,與B組相比,MO組IL-2水平顯著下降(<0.05),與MO組相比,各給藥組IL-2水平顯著升高(<0.05),與B組無明顯差異(>0.05),其中SCPL、SCPM、CPH組IL-2水平最高;在分泌IL-4水平上,MO組對比B組顯著升高(<0.05),各給藥組較MO組顯著降低(<0.05),其中SCPL、SCPM、SCPH、CPM、CPH組顯著低于VC組(<0.05),SCP各組的IL-4水平最低;IL-10水平,MO組對比B組有下降趨勢,CPL、CPM組較MO組略有升高;各組分泌IFN-γ水平中,與B組相比,MO組顯著下降(<0.05),與MO組相比,除CPH、SCPL組外,各給藥組顯著升高(<0.05),與B組無明顯差異(>0.05),其中SCPH、CPL組IFN-γ水平最高。SCP各組對IL-4分泌的抑制作用優(yōu)于CP各組,對IL-2、IFN-γ分泌的促進作用與CP各組無顯著差異。說明SCP和CP對急性損傷小鼠分泌細胞因子具有一定調(diào)節(jié)作用,且SCP對IL-4分泌的抑制作用優(yōu)于CP。

    表6 各組小鼠的血液生化指標(n=5)

    表7 各組小鼠血清細胞因子水平(n=5)

    2.9 SCP對酒精損傷小鼠臟器指數(shù)影響

    如表8所示,與B組相比,MO組小鼠肝臟指數(shù)顯著升高(<0.05),與MO組相比,各給藥組肝臟指數(shù)顯著降低(<0.05),且與B組差異不顯著(>0.05),其中SCPL、CPL、CPM組肝臟指數(shù)最低;各組小鼠心、脾、肺、腎等器官的臟器指數(shù)無顯著差異(>0.05)。SCP各組對小鼠肝臟指數(shù)恢復作用與CP無顯著差異,說明SCP與CP均能改善酒精造成的小鼠急性肝損傷。

    表8 各組小鼠的臟器指數(shù)(n=10)

    3 討 論

    3.1 SCP對H2O2刺激的巨噬細胞吞噬作用的影響

    吞噬作用是生物體內(nèi)巨噬細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞等免疫細胞識別和吞噬外來物質(zhì)的功能,是生物體的基本防御機制。其中,巨噬細胞能夠參與特異性免疫和非特異性免疫,對特定的細胞碎片及病原體進行吞噬和消化,并且分泌白介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-12(IL-12)等促炎因子,進行免疫調(diào)節(jié)。研究表明,CP可顯著提升小鼠巨噬細胞吞噬能力,且能顯著提高巨噬細胞TNF-α和IL-1β的分泌量,促進抗體產(chǎn)生,增強小鼠非特異性免疫功能。目前許多研究顯示,硫酸化修飾后的多糖免疫活性增強,如硫酸化枸杞多糖能顯著促進巨噬細胞的增殖,提高其吞噬功能,紫菜硫酸多糖可通過調(diào)節(jié)巨噬細胞、T細胞、B細胞等發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。本試驗結(jié)果顯示,不同溫度與作用時間下MO組的細胞吞噬率均最低,顯著低于B組,表明HO刺激下RAW 264.7細胞的吞噬作用降低,4 ℃條件下,SCPL、SCPM及CPL組的細胞吞噬率顯著高于MO組;37 ℃ 條件下,隨作用時間的延長,RAW 264.7細胞的吞噬率逐漸升高,SCP對HO刺激下RAW 264.7細胞的吞噬作用優(yōu)于CP,尤其是SCPL、SCPM組。因此,SCP促進細胞吞噬的效果優(yōu)于CP,這可能是由于SCP促進了巨噬細胞的增殖,并誘導其向M1型分化,故能顯著提高巨噬細胞的吞噬功能。

    3.2 SCP對乙醇刺激小鼠臟器指數(shù)的影響

    臟器指數(shù)能夠反映出動物機體中各臟器的生長發(fā)育情況,間接體現(xiàn)出各臟器的功能強弱、損傷程度,其中肝是動物體內(nèi)重要的代謝器官之一。試驗第30天,采取乙醇灌胃的方法制造小鼠急性損傷模型。此方法對于急性損傷的研究領(lǐng)域比較常見,灌胃乙醇后小鼠肝細胞排列紊亂、出現(xiàn)水腫、炎性細胞浸潤。本試驗中,SCP和CP能夠降低肝臟指數(shù),說明SCP與CP能夠緩解乙醇造成的肝損傷。

    3.3 SCP對乙醇刺激小鼠血液生理指標的影響

    血常規(guī)檢測是診斷血液疾病的基礎(chǔ)檢查手段,可判斷體內(nèi)炎癥、貧血或凝血等問題。WBC、LYM、PLT升高常見于各種感染與炎癥性疾病,RBC、HGB、HCT的降低則表示有貧血、出血等現(xiàn)象。本試驗中MO組小鼠血液WBC、LYM水平顯著升高,其中WBC高于正常生理范圍,提示小鼠存在炎癥;RBC、HGB、HCT、PLT水平降低,其中HGB低于正常生理范圍,提示小鼠存在出血、貧血現(xiàn)象。SCP和CP則可以不同程度地改善小鼠血液生理學指標,將WBC和HGB恢復至正常水平,具有一定的抗炎、促凝作用。其作用機制可能與抑制白細胞的產(chǎn)生以及促進血小板的產(chǎn)生有關(guān),從而起到降低體內(nèi)炎癥、調(diào)節(jié)機體免疫功能的作用。

    3.4 SCP對乙醇刺激小鼠血清生化指標的影響

    血清生化檢測可反映機體各器官的代謝水平,用于內(nèi)臟疾病的診斷。TG表示血清中的血脂含量,TG過高提示肝和腎存在炎癥或損傷。本試驗中MO組小鼠TG顯著高于正常生理范圍,而SCP和CP均將其恢復至正常范圍,從而緩解肝和腎損傷。TC為血清總膽固醇,TC過低提示存在肝損傷。MO組TC顯著低于生理范圍,除SCPL組外,各給藥組升高TC至正常范圍,改善肝損傷。LDH表示乳酸脫氫酶,廣泛分布于各個器官,其中心、腎、骨骼肌中含量最豐富。因此LDH異常提示腎或心存在損傷。MO組小鼠LDH顯著低于生理范圍,SCP和CP均能升高LDH至正常范圍,改善腎損傷。本試驗中MO組小鼠血清中TG、TC、LDH含量異常,超出正常生理范圍,提示小鼠造模后出現(xiàn)肝和腎損傷,因此,本試驗中酒精誘導小鼠急性損傷模型造模成功。SCP和CP均能使TG、TC、LDH恢復至正常水平,改善急性酒精性損傷小鼠血生化指標,其中SCP對TG和TC的恢復效果優(yōu)于CP,對小鼠急性損傷具有保護作用。

    3.5 SCP對H2O2刺激的巨噬細胞以及乙醇刺激的小鼠分泌免疫因子的影響

    IL-2是一種T細胞生長因子,對T細胞的成熟、增殖、分化至關(guān)重要,還可增強NK細胞的細胞溶解活性,并促進B細胞產(chǎn)生免疫球蛋白。機體內(nèi)IL-2的表達失調(diào)與免疫疾病相關(guān),常作為治療疾病的靶點。研究表明,正常小鼠服用復方黨參口服液后血清中的-2基因的表達量顯著升高。硫酸化后的多糖能夠升高免疫抑制型雞外周血IL-2水平,從而提高免疫功能,還能夠顯著提高雛鴨體內(nèi)IL-2水平,提高其抗病毒功能。在本研究中,體外試驗結(jié)果顯示,各SCP與CP組的IL-2水平均升高,且與B組無顯著差異,表明SCP和CP能夠顯著促進細胞分泌IL-2。在體內(nèi)試驗中,SCP和CP能夠顯著提升IL-2水平,其中SCPL及CPH組效果最佳,優(yōu)于VC組。體內(nèi)試驗結(jié)果與體外試驗結(jié)果相一致。提示SCP和CP可能通過提高IL-2的分泌量,促進T細胞的增殖與分化,刺激B細胞的增殖,從而提高機體免疫功能。

    IL-4是一種來源于T細胞的B細胞生長因子,可以觸發(fā)Th2細胞分化、M2巨噬細胞極化,還能夠促進巨噬細胞表達抗原,殺死腫瘤細胞,參與MHCⅡ類抗原的調(diào)節(jié)和FcR的表達。研究顯示,黨參炮制品能夠降低免疫抑制家兔血清中過高的IL-4水平。硫酸化后的多糖降低IL-4效果更加顯著,能夠降低雞骨髓源樹突狀細胞分泌IL-4水平。在體外試驗與體內(nèi)試驗中,SCP和CP均能顯著降低IL-4水平,說明SCP和CP可能通過抑制機體分泌IL-4,降低機體特異性免疫反應(yīng),增強非特異性免疫反應(yīng),從而調(diào)節(jié)免疫功能;其中SCP各組IL-4水平顯著低于VC組(<0.05),表明SCP降低IL-4水平作用優(yōu)于CP。

    IL-10是一種炎癥與免疫抑制因子,能夠抑制Th1細胞IL-2和IFN-γ的分泌,抑制IL-22、IL-20、IL-19等促炎細胞因子、趨化因子和趨化因子受體的表達。本試驗中SCP和CP在一定程度上能夠促進IL-10水平,且SCP各組的促進效果優(yōu)于CP,與前人報道一致,說明SCP可能通過抑制促炎因子,緩解機體炎癥反應(yīng),起到免疫調(diào)節(jié)作用。

    IFN-γ能夠激活巨噬細胞,誘導巨噬細胞趨向于M1型極化,還能夠調(diào)節(jié)癌細胞和受感染細胞的免疫狀態(tài)。研究顯示,黨參多糖納米乳灌胃免疫抑制模型小鼠能夠提高其IFN-γ水平。本研究體外試驗結(jié)果顯示,SCP和CP能夠顯著促進IFN-γ分泌,與前人研究結(jié)果相一致。體內(nèi)試驗結(jié)果與體內(nèi)試驗結(jié)果相近,其中SCPH組對IFN-γ分泌的促進作用優(yōu)于CP,尤其是SCPH組。說明SCP能夠通過促進IFN-γ分泌,刺激巨噬細胞向M1型分化,增強其吞噬活功能,從而提高機體的非特異性免疫功能。

    4 結(jié) 論

    一定濃度的SCP和CP可緩解HO建立的RAW 264.7細胞急性損傷的細胞貼壁不良、密度降低、細胞死亡等現(xiàn)象,促進細胞分泌IL-2、INF-γ,在促進巨噬細胞吞噬、抑制細胞分泌IL-4方面,SCP的效果優(yōu)于CP。乙醇建立的小鼠急性損傷模型中,一定濃度的SCP和CP可升高小鼠血液中RBC、HGB、HCT、PLT含量,降低WBC、LYM含量;升高血清中TC、LDH含量,降低TG含量;提高細胞因子IL-2、INF-γ分泌水平,降低IL-4分泌水平。在改善血清中IL-4、TG和TC含量方面,SCP效果優(yōu)于CP。

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