采用HPLC-MS/MS法測定黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留的研究

段愛莉 郭鳳春 張娜杰

摘 要：目的：建立一種同時(shí)檢測黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的分析檢測方法。方法：采用0.1%甲酸-乙腈為提取液，經(jīng)C18 150 mg、PSA 200 mg、MgSO4 1 000 mg凈化包凈化，C18色譜柱分離，乙腈和0.1%甲酸水流動(dòng)相體系梯度洗脫，在電噴霧正離子化模式下，采用多反應(yīng)監(jiān)測（Multi Reaction Monitoring，MRM）檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果：31種農(nóng)藥在0.001～0.200 μg/mL線性關(guān)系良好（R2>0.991 5），方法檢出限為0.000 25～0.025 00 mg/kg，回收率為75.0%～111.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～6.70%，并測定了武威市產(chǎn)地黃冠梨樣品30批，共檢出農(nóng)藥殘留8種，其中克百威檢出率達(dá)67%。結(jié)論：該方法處理過程快速、簡便、準(zhǔn)確及可靠，適用于黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留的同時(shí)檢測。

關(guān)鍵詞：黃冠梨;高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;農(nóng)藥殘留

Determination of 31 Pesticide Residues in Huangguan Pear by HPLC-MS/MS

DUAN Aili， GUO Fengchun， ZHANG Najie

（Wuwei Food Inspection and Testing Center， Wuwei 733000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for simultaneous determination of 31 pesticide residue in Huangguan pear by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. Method： The samples were extracted with 0.1% formic acid and acetonitrile， purified up with C18 150 mg， PSA 200 mg， MgSO4 1 000 mg purification package， separated by a C18 column with acetonitrile and 0.1% formic acid gradient elution in water mobile phase system， detected by multiple reaction monitoring （MRM） in electrospray ionization mode. External standard method for quantification. Result： The pesticide of 31 kinds was in the range of 0.001～0.200 μg/mL（R2>0.991 5）， and the detection limits were in the range of 0.000 25～0.025 00 mg/mL. The recoveries ranged from 75.0% to 111.5% and RSD in the range of 0.85%～6.70%.Thirty batches of Huangguan pear samples from three producing areas in Wuwei city were detected， and 8 kinds of pesticide residues were detected， among which the detection rate of Carburyl was 67%. Conclusion： The method is rapid， simple， accurate and reliable， and suitable for simultaneous determination of 31 pesticide residues in Huangguan pear.

Keywords： Huangguan pear; high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry; pesticide residues

黃冠梨是梨中的早熟品種，具有抗病性強(qiáng)、早果早產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。其營養(yǎng)價(jià)值豐富，主要含有多糖、蛋白質(zhì)、維生素B1和維生素B2等人體必需的營養(yǎng)元素，深受消費(fèi)者喜愛[1-2]。目前，黃冠梨主要分布在我國甘肅省、陜西省、河北省等地區(qū)。由于其營養(yǎng)豐富、含糖量高，受病蟲害影響較大。種植戶為提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量、增加收入，常采用化學(xué)藥物進(jìn)行病蟲害防治，不僅對生態(tài)環(huán)境造成污染，也出現(xiàn)農(nóng)藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象[3-6]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過對武威市常用農(nóng)藥品種調(diào)查，確定采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合QuEChERS凈化技術(shù)，建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）法同時(shí)測定黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留，為保障黃冠梨食用安全性提供科學(xué)的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品來自武威市黃冠梨種植基地。

氯唑磷、三唑磷、甲拌磷、毒死蜱、對硫磷、氧樂果、殺撲磷、甲胺磷、噠螨靈、敵敵畏、水胺硫磷、丙溴磷、腈苯唑、甲霜靈、煙堿、滅多威、克百威、敵百蟲、硫線磷、啶蟲脒、吡蟲啉、多菌靈、滅蠅胺、烯酰嗎啉、噻蟲嗪、速滅威、乙酰甲胺磷、甲基毒死蜱、苯醚甲環(huán)唑、苯磺隆和涕滅威標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為100 μg/mL，均來自中國農(nóng)業(yè)部;乙腈、甲醇、甲酸均為色譜純，賽默飛世爾公司;甲酸銨為色譜純，默克生命科學(xué)技術(shù)公司;丙酮為色譜純，天津大茂化學(xué)試劑廠;乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（Primary-secondary Amine，PSA）40～60 μm、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）40～60 μm，均為Agilent公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1290-6470 HPLC-MS/MS三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，美國Agilent公司;3K15臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf公司;A11BC025分析研磨機(jī)，德國IKA公司;JEA502電子天平，上海浦春計(jì)量儀器有限公司;SQP 10 mg電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;AutoEVA-08IR全自動(dòng)定量濃縮儀，?？苾x器有限公司;YMT-2500PULS多管渦旋混勻儀，上海熙揚(yáng)儀器儀器有限公司;Milli-Q超純水機(jī)，美國Millipore公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確吸取一定量的濃度為100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成0.001 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL、0.050 μg/mL、0.100 μg/mL和0.200 μg/mL系列的31種混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.2 樣品制備

準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的樣品10 g（精確至0.001 g），置于50 mL具塞離心管中，加入10 mL 0.1%甲酸-乙腈提取液，渦旋混勻5 min，振蕩25 min，在4 ℃下5 000 r/min離心10 min。準(zhǔn)確移取5.0 mL上清液加入含有C18 150 mg、PSA 200 mg、MgSO4 1 000 mg的15 mL離心管中，渦旋混勻1 min，4 000 r/min離心10 min，吸取上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜后待測。

1.3.3 儀器條件

（1）液相色譜條件。Agilent technologeies C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量2 μL;流速0.3 mL/min;后運(yùn)行時(shí)間5 min。梯度洗脫程序見表1。

（2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子源ESI+，霧化氣壓力0.35 MPa，離子源溫度350 ℃，干燥氣流速10 L/min，毛細(xì)管電壓4 000 V。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理

采用Quantitative Analysis（Quant-My-Way）軟件處理數(shù)據(jù)，以MicrosoftExcel 2007和MassHunter Quanlitative?Analysis軟件分析并繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法的確定

同時(shí)檢測31種農(nóng)藥殘留時(shí)，為避免基質(zhì)中干擾組分被提取，本實(shí)驗(yàn)選用0.1%甲酸水-乙腈作為提取劑，采用QuEChERS方法提取，濃縮后用0.1%甲酸水-乙腈定容，目標(biāo)分析體系中去除色素效果明顯，體系溶液透明清澈。

2.2 儀器測定參數(shù)優(yōu)化

2.2.1 流動(dòng)相梯度洗脫條件的確定

比較方案A（0～3.0 min，90%a;3.1～6.0 min，90%a→55%a;6.1～18.0 min，30%a;18.1～22.0 min，10%a;22.1～25.0 min，90%a）和方案B（見表1）兩種梯度條件下用0.1%甲酸水（a）和乙腈（b）為流動(dòng)相采集的31種農(nóng)藥的色譜圖，見圖1。根據(jù)各個(gè)目標(biāo)化合物的分離效果，確定方案B為本實(shí)驗(yàn)梯度洗脫條件。

2.2.2 流動(dòng)相體系的確定

比較3種流動(dòng)相乙腈-水、0.1%甲酸水乙腈-0.1%甲酸銨水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液體系下的色譜圖，同等測定條件下，考慮色譜峰的分離效果和響應(yīng)情況，確定乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相體系，見圖2。

2.2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將31種農(nóng)藥的單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.050 μg/mL）采用儀器自動(dòng)優(yōu)化的方式確定出動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測模式（Multiple Reaction Monitoring，MRM）條件，使其具有較高的靈敏度和選擇性。因此，本文以MRM方式建立了31種農(nóng)藥的質(zhì)譜條件，見表2。

2.3 線性關(guān)系、檢出限及定量限

將系列標(biāo)準(zhǔn)工作液按優(yōu)化后條件進(jìn)樣測定，以濃度為橫坐標(biāo)x，峰面積y為縱坐標(biāo)，建立線性回歸方程，以儀器的3倍和10倍信噪比（S/N）為方法的檢出限和定量限。31種農(nóng)藥在0.001～0.200 μg/mL線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.991 5～0.999 9，檢出限為0.000 25～0.025 00 mg/kg，定量限為0.001～0.075 mg/kg，基本滿足農(nóng)藥殘留檢測要求，結(jié)果見表3。

2.4 回收率和精密度試驗(yàn)

在黃冠梨空白樣品中添加3個(gè)水平（0.05 mg/kg、0.10 mg/kg、0.20 mg/kg），每個(gè)水平做6個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，其平均回收率為75.0%～111.5%，測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～6.70%，表明該方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能夠滿足日常檢測需求。

2.5 樣品的測定

隨機(jī)采集武威市黃冠梨基地樣品共30批，檢出農(nóng)藥8種，見表4。其中克百威檢出率較高，為67.0%;毒死蜱次之，檢出率為33.0%。測定結(jié)果顯示，7種農(nóng)藥的殘留水平值較低，均低于GB 2763—2021規(guī)定的最大殘留限量值，農(nóng)藥三唑磷有檢出，但殘留量明顯低于定量限。

3 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合QuEChERS技術(shù)測定黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留的分析檢測方法。結(jié)果顯示，31種農(nóng)藥在0.001～0.200 μg/mL線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.991 5～0.999 9，檢出限為0.000 25～0.025 00 mg/kg，回收率為75.0%～111.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～6.70%。該方法前處理操作簡單，凈化效果好，準(zhǔn)確度和精密度高，適合黃冠梨中多種農(nóng)藥殘留的定性和定量測定，可為今后黃冠梨中農(nóng)藥殘留的監(jiān)測和風(fēng)險(xiǎn)評估提供一定的技術(shù)支撐。

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