QuEChERS-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肝中氯丙嗪殘留量

周青 周宏霞 姜華軍 張玉潔

摘 要：建立了QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肝中氯丙嗪殘留量的檢測方法。豬肝樣品經(jīng)過乙腈提取、QuEChERS凈化后，通過C18色譜柱分離，在ESI正離子模式下，以質(zhì)譜多反應（Multiple Reaction Monitoring，MRM）監(jiān)測、外標法定量。結(jié)果表明，在0.5～100.0 ng/mL，氯丙嗪的線性相關(guān)系數(shù)在0.99以上，方法檢出限為0.5 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg;在3個濃度添加水平下，氯丙嗪的平均回收率在80.9%～95.1%，相對標準偏差在0.8%～1.9%。該方法準確、快速、高效，能夠滿足豬肝中氯丙嗪殘留量的分析要求。

關(guān)鍵詞：氯丙嗪;豬肝;QuEChERS;高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

Determination of Chlorpromazine Residue in Swine Liver by QuEChERS-High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry

ZHOU Qing， ZHOU Hongxia， JIANG Huajun， ZHANG Yujie

（Weihai Institute for Food and Drug Inspection and Testing， Weihai 264209， China）

Abstract： An efficient method was developed for the determination of chlorpromazine residues in swine liver by QuEChERS combined with high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The sample was extracted by acetonitrile， purified by QuEChERS， separated on C18 column， analyzed in positive electronic spay ionization （ESI+） mode with dynamic reaction mointoring（MRM）， and quantified by the external standard method. The results showed that the calibration curves are linear （R2>0.99） over concentration range of 0.5～100.0 ng/mL. The limit of detection was 0.5 μg/kg， and the limit of quantification was 1.0 μg/kg. The recoveries of chlorpromazine at three spiked levels ranged from 80.9%～95.1%， with the relative standard deviations of 0.8%～1.9%. The method is accurate， rapid and efficient， which is suitable for analysis of chlorpromazine residues in swine liver.

Keywords： chlorpromazine; swine liver; QuEChERS; high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

氯丙嗪（Chlorpromazine，CPZ）是一種吩噻嗪類藥物，具有安眠、鎮(zhèn)靜等作用。但是一些不法商販在飼料中添加氯丙嗪，對動物間接催肥或減少運輸中的質(zhì)量損失和死亡率，導致氯丙嗪在畜禽產(chǎn)品中存在殘留[1]。氯丙嗪在動物體內(nèi)的肝臟代謝過程中易引起藥物殘留，經(jīng)食物鏈傳遞到人體后，能引起白細胞減少等不良反應，甚至導致人體肝腎的病變[2]。目前，《食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）明確指出，氯丙嗪允許做治療用，但在動物性食品中不得檢出[3]。

近年來，氯丙嗪的檢測方法有氣相色譜法[4]、液相色譜法[5]、氣質(zhì)聯(lián)用法[6]和液質(zhì)聯(lián)用法[7]。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法以其高靈敏度和高準確性，在氯丙嗪的檢測中具有明顯的優(yōu)勢。本研究采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，在現(xiàn)有研究基礎(chǔ)上，重點研究了QuEChERS法對豬肝樣品的前處理方法優(yōu)化，建立了乙腈提取、QuEChERS凈化、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定氯丙嗪殘留量的分析方法，為豬肝中氯丙嗪的測定提供了科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

Qtrap 6500液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國AB SCIEX公司;SQP電子天平，美國Sartorius公司;GM200刀式研磨儀，德國Retsch公司;超純水機，法國Millipore公司;移液槍，美國Sartorius公司;超聲波清洗器，昆山美美超聲儀器有限公司;渦旋混合器，德國IKA公司;高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司;TurboVAP全自動氮吹濃縮儀，瑞典Biotage公司。

1.2 試劑

鹽酸氯丙嗪（99%，中國食品藥品檢定研究院）;乙腈、乙酸乙酯、甲醇（色譜純、美國FISHER公司）;甲酸（色譜純，上海麥克林生化科技有限公司）;無水硫酸鈉、無水硫酸鎂（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司）;PSA、C18（天津博納艾杰爾科技有限公司）。

1.3 試驗方法87802F42-BF74-432F-92D9-02027006B9AA

1.3.1 標準溶液的配制

準確稱取氯丙嗪標準品，用甲醇配制成100 μg/mL的標準儲備液，-18 ℃避光儲存?zhèn)溆?。量取適量標準儲備液，用甲醇稀釋成1 μg/mL的標準中間液，4 ℃避光保存。分別量取適量標準中間液，用空白基質(zhì)提取液稀釋，配制成0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL和100.0 ng/mL的系列標準工作溶液。氯丙嗪標準品的離子色譜圖見圖1。

1.3.2 樣品前處理

將樣品粉碎，稱取5.00 g樣品，置于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入10 mL乙腈，2.0 g無水硫酸鈉，渦旋混合1 min，超聲提取5 min，4 000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液，殘渣用10 mL乙腈重復提取一次。合并兩次提取液。取上清液4 mL于100 mg C18、150 mg PSA、500 mg無水硫酸鎂的10 mL離心管中，渦旋混合1 min，8 000 r/min離心5 min。將上清液在40 ℃氮吹至近干，加1 mL初始流動相溶液溶解，過0.22 μm有機濾膜，待測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Kinetex C18，100 mm×2.1 mm，2.6 μm;流動相A：0.1%甲酸溶液，流動相B：乙腈;梯度洗脫程序：0～2 min，90% A;2～8 min，90%～10% A;8.1～10.0 min，10%～90% A;流速：0.3 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：5 μL。

1.3.4 質(zhì)譜條件

電離方式：ESI+;監(jiān)測模式：MRM;離子源溫度：500 ℃;噴霧電壓：4 500 V;氣簾氣壓力（CUR）35 psi;霧化器壓力（GS1）55 psi;輔助霧化氣壓力（GS2）55 psi。氯丙嗪的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

氯丙嗪是脂溶性化合物，易溶于乙腈、甲醇、乙酸乙酯等，實驗分別采用乙腈、甲醇、乙酸乙酯、乙腈∶水溶液（1∶1）（V/V）等溶劑進行提取，凈化條件選擇QuEChERS法，進行加標回收實驗[2，7]。結(jié)果表明，采用甲醇、乙酸乙酯作為提取溶劑時會提取出部分脂類等基質(zhì)干擾物質(zhì)，影響后續(xù)的凈化和分析檢測;乙腈-水溶液提取時，提取液較為混濁，而乙腈的提取效果好、干擾較小，且具有沉淀蛋白質(zhì)的作用[8]。因此，本研究采用乙腈進行樣品的提取處理。

2.2 前處理條件的優(yōu)化

在樣品凈化過程中，本研究比較了HLB固相萃取柱[9]、QuEChERS法等凈化方法。由于氯丙嗪屬于脂溶性化合物，因此并不適合液液萃取的凈化方法[1]。采用HLB固相萃取柱凈化時，氯丙嗪的回收率較低，回收率在45.1%～66.7%;采用QuEChERS法進行凈化時，PSA對樣品中的脂肪、蛋白質(zhì)類化合物具有較好的吸附作用，C18可以有效吸附色素類物質(zhì)，此時氯丙嗪的回收率均在80%以上。因此，選擇QuEChERS法進行樣品提取液的凈化。

2.3 方法的線性范圍和檢出限

本方法采用空白樣品基質(zhì)提取液配制基質(zhì)標準工作溶液，在0.5～100.0 ng/mL的濃度下，以樣品濃度對應的峰面積繪制標準曲線。氯丙嗪標準曲線的回歸方程為：y=7 022.970 18x-1 453.511 59，相關(guān)系數(shù)r為0.997 2，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。以3倍信噪比為檢出限，10倍信噪比為定量限，氯丙嗪的檢出限為0.5 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg。

2.4 方法回收率與精密度

在空白豬肝樣品中添加1.0 μg/kg、2.5 μg/kg、10.0 μg/kg 3個水平的標準工作溶液，按照1.3.2的方法進行前處理，每個水平平行測定6次，結(jié)果表明氯丙嗪的加標回收率為80.9%～95.1%，RSD為0.8%～1.9%，見表2，回收率與精密度均能滿足檢測要求。

2.5 實際樣品測定

采用該方法對15批次市售豬肝樣品進行測定，結(jié)果表明所購買的豬肝樣品中均未檢出氯丙嗪殘留。

3 結(jié)論

本研究采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立了豬肝中氯丙嗪殘留的快速檢測方法，采用基質(zhì)標準溶液校準，外標法定量。該方法檢出限為0.5 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，具有較好的線性范圍、精密度和回收率。結(jié)果表明該方法檢測靈敏度高、重現(xiàn)性好，可為豬肝中氯丙嗪殘留量的檢測提供參考依據(jù)。

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