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    端粒酶相關蛋白1在宮頸鱗狀上皮病變中的表達*

    2022-07-05 09:45:16馮俊明李明松
    重慶醫(yī)學 2022年12期
    關鍵詞:端粒酶高級別宮頸炎

    陳 娟,馮俊明,李明松,雷 雪,黃 鄂

    (重慶市璧山區(qū)人民醫(yī)院病理科 402760)

    端粒酶是一種具有反轉錄酶活性的核糖核蛋白,由人端粒酶RNA組分(human telomeric RNA component,hTERC)、人端粒酶反轉錄酶(human telomeric reverse transcriptase,hTERT)及端粒酶相關蛋白 (telomeraseassociated protein,TP)3部分亞基構成[1-2]。該三組分可調節(jié)端粒酶活性,其中任一組分發(fā)生改變便會影響端粒酶活性[2-3]。研究證明,在正常人體組織中端粒酶活性受到抑制,在惡性腫瘤中卻被激活。而端粒酶的活化直接影響細胞的分裂、增殖,端粒酶活性的增強可使細胞獲得無限增殖能力,最終導致細胞的病變,乃至癌變[3-4]。現(xiàn)已有文獻報道,端粒酶活性的增強會加快肺癌[5-6]、腦膠質母細胞瘤[7-9]及胰腺癌[10]的發(fā)展,并提示一個不理想的預后。

    宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一,現(xiàn)已有文獻報道宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與hTERC及hTERT的激活呈正相關,宮頸鱗狀上皮內病變級別越高,其活性越強[11-12]。而端粒酶相關蛋白(TP1)在宮頸鱗狀上皮病變的作用尚少見相關研究。本研究旨在探索TP1在不同級別宮頸鱗狀上皮病變中(慢性宮頸炎、低級別鱗狀上皮內病變及高級別鱗狀上皮內病變)的表達情況及其與端粒酶活性的關系,探討其在宮頸鱗狀上皮病變中的可能作用及臨床意義。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    采用回顧性研究的方法,收集2019年1-12月在本院行宮頸活檢的100例女性患者為研究對象,年齡22~77歲,平均(43.26±10.09)歲。以組織病理檢查結果為標準將其分為3組:慢性宮頸炎組29例、低級別鱗狀上皮內病變組34例、高級別鱗狀上皮內病變組37例,對3組患者的組織活檢標本進行TP1免疫組織化學染色及端粒酶活性檢測。納入標準:在本院已行宮頸組織活檢,且活檢組織標本最大徑≥2 mm;排除標準:宮頸活檢組織標本最大徑<2 mm或富含大量黏液的活檢標本。本研究經(jīng)本院倫理委員會審核并通過(2019-KY-07)。

    1.2 方法

    1.2.1TP1免疫組織化學染色

    TP1免疫組織化學試劑一抗購自美國Santa Cruz公司,濃度為1.0 mg/μL,無核水稀釋到10 ng/μL,采用SP免疫組織化學染色法,通用型二抗購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。操作步驟嚴格按說明書執(zhí)行。結果判讀:TP1陽性表達于核漿,棕色顆粒狀。無陽性細胞判為-,陽性細胞數(shù)≤25%判為+,陽性細胞數(shù)>25%~50%判為++,陽性細胞數(shù)>50%陽性為+++。細胞陽性率=20個高倍鏡下(400倍)陽性細胞數(shù)/20個高倍鏡下細胞總數(shù)×100%。

    1.2.2端粒酶活性檢測

    端粒重復序列擴增-ELISA(TRAP-PCR-ELISA)檢測3組標本中端粒酶活性,試劑盒購自美國Bochringer mannheim公司,按說明書操作。測定波長450 nm(A450)和630 nm(A630)處吸光度值,吸光度差值(△A)=A450-A630,△A值代表細胞端粒酶活性。陽性對照由試劑盒提供,陰性對照為端粒酶提取物加1 mg/L RNaseA,37 ℃孵育20 min。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    2 結 果

    2.1 TP1在宮頸鱗狀上皮病變中的陽性率比較

    不同組別宮頸鱗狀上皮病變的TP1陽性率比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=30.328,P<0.001);兩兩比較顯示,低級別鱗狀上皮內病變組及高級別鱗狀上皮內病變組TP1陽性率均高于慢性宮頸炎組,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=10.343,P校正=0.002;χ2=34.545,P校正<0.001);低級別鱗狀上皮內病變組與高級別鱗狀上皮內病變組TP1陽性率比較,差異無統(tǒng)計學意義(χ2=4.870,P校正=0.085),見表1。

    表1 TP1在宮頸鱗狀上皮病變不同組別中的表達情況

    2.2 TP1與宮頸鱗狀上皮病變級別的相關性

    慢性宮頸炎組TP1-,低級別鱗狀上皮內病變組TP1+,高級別鱗狀上皮內病變組TP1++~+++。TP1的表達與宮頸鱗狀上皮病變級別呈正相關(Kendall′s tau-b=0.773,P<0.001),隨著宮頸鱗狀上皮病變級別的增高,TP1表達增強,見圖1。

    A:慢性宮頸炎組(-);B:低級別鱗狀上皮內病變組(+);C:高級別鱗狀上皮內病變組(++~+++)。

    2.3 端粒酶活性檢測結果

    端粒酶活性在陽性對照為1.37±0.04,陰性對照為0.06±0.01,在慢性宮頸炎組(0.36±0.04)、低級別鱗狀上皮內病變組(1.02±0.07)及高級別鱗狀上皮內病變組(1.75±0.05)逐漸增強,差異有統(tǒng)計學意義(F=10.863,P<0.05)。

    2.4 TP1的表達強度與端粒酶活性的相關性

    TP1表達-、+、++、+++對應的端粒酶活性分別為0.12±0.03、0.90±0.03、1.36±0.04、1.79±0.12,差異有統(tǒng)計學意義(H=10.992,P=0.028),TP1表達強度增強對應的端粒酶活性逐漸增強。

    3 討 論

    宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤,發(fā)病主要與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染有關,目前通過宮頸癌篩查基本可以做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。雖然現(xiàn)在臨床上已有宮頸癌疫苗,但仍有少部分HPV高危型感染患者病情發(fā)展迅速,或發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)到了宮頸癌晚期,其原因目前尚不清楚。有文獻報道,端粒酶hTERC及hTERT兩組分被激活,使端粒酶活性增加,從而進一步增強高危型HPV在宮頸病變中的致瘤作用[13],其可能機制為端粒酶活性增加,參與調節(jié)酪氨酸蛋白酶信號傳遞,激活HPVE6/E7癌基因,有助于在潛伏期將HPVE6/E7癌基因整合到宿主端粒中,并能有效抑制抑癌基因P53及視網(wǎng)膜母細胞瘤(RB)腫瘤抑制蛋白的活性,細胞周期失去調控從而抑制細胞凋亡,使高危型HPV病毒能在宿主中持續(xù)存活,從而導致宮頸鱗狀上皮病變[14],進一步加快癌變過程。

    端粒酶協(xié)同蛋白TP1作為端粒酶三組分之一,在腫瘤細胞形成過程中的作用尚缺乏文獻報道。趙瑞皎等[15]發(fā)現(xiàn),TP1在卵巢惡性漿液性上皮性腫瘤中的表達強于良性漿液性上皮性腫瘤,而與端粒酶活性無相關性,提示TP1可能通過某未知的途徑促進了腫瘤的發(fā)展。而在KATZENELLENBOGEN[16]的研究中發(fā)現(xiàn),HPVE6可以通過多重機制使端粒酶活性增加,如通過抑制Maz及鋅指轉錄因子Sp1的活性,從而使TP1表達上調,加快了宮頸鱗狀上皮病變的進一步發(fā)展。在本研究中,低級別鱗狀上皮內病變組及高級別鱗狀上皮內病變組TP1陽性率均明顯高于慢性宮頸炎組,而低級別鱗狀上皮內病變組及高級別鱗狀上皮內病變組TP1陽性率無明顯差異,同樣提示TP1可能通過某種途徑參與了HPV的感染途徑,而主要可能在HPV持續(xù)感染、DNA整合過程起著重要的作用[14]。TP1的表達與宮頸鱗狀上皮病變級別呈正相關,隨著宮頸鱗狀上皮病變級別的增高而表達增強,提示TP1在宮頸鱗狀上皮癌變過程中起著促進作用。

    在本研究中發(fā)現(xiàn),端粒酶活性信號在慢性宮頸炎組、低級別鱗狀上皮內病變組及高級別鱗狀上皮內病變組是逐漸增強的,并且TP1的表達與端粒酶活性呈正相關,提示TP1高表達可能增強了端粒酶的活性,從而促進或加快了宮頸鱗狀上皮病變進一步發(fā)展,異型增生,乃至癌變。

    綜上所述,TP1隨著宮頸鱗狀上皮病變級別的增高而表達上調,且與端粒酶活性存在正相關性,提示TP1高表達可能增強了端粒酶的活性,從而促進宮頸鱗狀上皮病變進一步發(fā)展,甚至永生化、癌變,但TP1可否作為宮頸鱗狀上皮病變判斷級別及預后的一個指標還需進一步探索和實驗證明。

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