重組禽流感病毒滅活疫苗（細胞源）保存期試驗的研究

付春杰，杜 鑫，楊 柳，高曉慶，蘇 操，張 丹，趙海源

吉林冠界生物技術(shù)有限公司，吉林梅河口 135000

禽流感病毒是由A 型禽流感病毒所引起禽類的一種急性高度致死性、傳染性病毒。禽流感被列為A 類傳染病，不僅是雞，其它一些家禽如鴨和野鳥都能感染禽流感。高致病性禽流感在全國范圍內(nèi)的突擊爆發(fā)和大面積的流行引起了世界各國的高度關(guān)注和重視[1]。為有效控制疫情爆發(fā)，國際上主要采取隔離補殺，但當(dāng)大面積流行性爆發(fā)擴散時，對養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟損失難以估量，養(yǎng)殖戶也難以承擔(dān)。因此免疫接種就成了控制及預(yù)防疫情的關(guān)鍵措施之一，成為養(yǎng)殖的重中之重[2]。

本研究通過監(jiān)測重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（細胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）在2 ～8 ℃保存不同時間的質(zhì)量情況，為疫苗在有效期內(nèi)的有效使用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 疫苗

3 批重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（細胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）由吉林冠界生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號分別為2019001-s、2019002-s、2019003-s。

1.2 SPF 雞

購自北京某實驗動物技術(shù)有限公司。

1.3 抗原及血清

重組禽流感病毒H5 亞型Re-11 株、Re-12 株和H7 亞型H7-Re2 株血凝抑制試驗抗原及陽性血清，均購自哈爾濱某生物技術(shù)有限公司。

2 方法

將3 批重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（細胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）置2 ～8 ℃保存，分別于保存0、4、8、12、15 個月時進行性狀檢驗、效力檢驗及甲醛殘留量測定。

2.1 性狀檢驗

2.1.1 劑型：取一清潔吸管，吸取少量疫苗滴于清潔冷水中，觀察液滴擴散情況。

2.1.2 穩(wěn)定性：吸取疫苗10 mL 加入離心管中，以3 000 r/min離心15 min，觀察管底析出的水相體積。

2.1.3 黏度：按《中國獸藥典》[3]2015 年版三部附錄進行測定。

2.2 效力檢驗

每組、每個保存時間段的疫苗需用3 ～4 周齡SPF 雞10 只，每只胸部肌肉注射疫苗0.3 mL。21 d后，連同對照雞5 只，分別采血，分離血清，分別用H5 亞型Re-11 株、Re-12 株和H7 亞型H7-Re2株抗原測定HI 抗體效價。

2.3 甲醛殘留量測定

按《中國獸藥典》2015 年版三部附錄進行測定。

3 結(jié)果

3.1 性狀檢驗

疫苗在2 ～8 ℃保存至15 個月，每批疫苗、每個保存時間段的劑型、黏度和穩(wěn)定性均符合要求。結(jié)果見表1。

表1 3 批疫苗不同保存時間的性狀檢驗結(jié)果

3.2 效力檢驗

將在2 ～8 ℃保存不同時間的3 批疫苗免疫SPF 雞，每次均于免疫后21 d 采血，分離血清，測定H5 亞型Re-11 株、Re-12 株和H7 亞型H7-Re2株HI 抗體效價，結(jié)果表明，疫苗的免疫效力未發(fā)生明顯變化，具體實驗數(shù)據(jù)見表2。

表2 3 批疫苗不同保存時間的效力檢驗結(jié)果（log2）

3.3 甲醛殘留量

疫苗在2 ～8 ℃保存至15 個月，每批疫苗、每個保存時間段的甲醛殘留量維持在穩(wěn)定的數(shù)值范圍內(nèi)，結(jié)果見表3。

表3 3 批疫苗不同保存時間的甲醛殘留量測定結(jié)果

4 討論

3 批重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（細胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）在2 ～8 ℃保存至15 個月，分別于保存0、4、8、12、15 個月時測定相關(guān)參數(shù)，結(jié)果表明保存15 個月時，劑型、黏度和穩(wěn)定性均符合要求，未出現(xiàn)分層或破乳；免疫效力無明顯變化；甲醛殘留量也未發(fā)生明顯變化。這些檢測結(jié)果也間接驗證了疫苗生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。

在實際應(yīng)用中，疫苗按規(guī)定保存條件2 ～8 ℃儲存[4]，在有效期12 個月內(nèi)使用無任何質(zhì)量問題，可放心使用。