• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    水力空化對大豆分離蛋白谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶促凝膠行為的影響

    2022-07-02 03:49:18李曉惠任仙娥黃永春黃承都張昆明劉純友
    食品科學(xué) 2022年11期
    關(guān)鍵詞:空化水性水力

    李曉惠,任仙娥*,楊 鋒,黃永春,黃承都,張昆明,劉純友

    (廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院,廣西糖資源綠色加工重點實驗室,廣西高校糖資源加工重點實驗室,廣西 柳州 545006)

    大豆分離蛋白(soy protein isolate,SPI)是從低溫脫脂豆粕中除去碳水化合物和灰分等,得到的蛋白質(zhì)量分數(shù)大于90%(干基)的全價蛋白。具有來源廣泛、價格低廉、營養(yǎng)價值高等特點,是一種應(yīng)用廣泛的食品基料。SPI具有良好的凝膠性、乳化性和持水性等功能特性,尤其凝膠性受到廣泛關(guān)注,利用這一特性可以改善豆腐、豆干和豆腐腦等傳統(tǒng)豆制品的感官和質(zhì)構(gòu),將其應(yīng)用到火腿腸和香腸等肉制品中,能夠起到保水和穩(wěn)定脂肪的重要作用。

    谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(transglutaminase,TG)是一種細胞外催化轉(zhuǎn)移酶,可催化蛋白質(zhì)分子間和分子內(nèi)的谷氨酰胺和賴氨酸殘基發(fā)生催化?;D(zhuǎn)移反應(yīng)、脫酰胺反應(yīng)和交聯(lián)聚合反應(yīng)。酶促反應(yīng)可使食品中蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,改善凝膠性能,提高凝膠強度。酶促反應(yīng)條件溫和,還可以通過誘導(dǎo)含有互補限制性氨基酸結(jié)構(gòu)的異源蛋白間的交聯(lián)來生產(chǎn)具有更高營養(yǎng)價值的蛋白產(chǎn)品。

    空化技術(shù)作為新興的物理改性技術(shù),受到了國內(nèi)外研究學(xué)者的關(guān)注,主要方式為超聲空化和水力空化兩種。相比較于超聲空化,水力空化的能量利用率更高,產(chǎn)生的空化場更均勻,更具有工業(yè)化優(yōu)勢。在空化過程中空化泡的潰滅產(chǎn)生瞬時的局部高溫高壓,并伴隨著高速剪切力、強沖擊波、高速湍流等,可以促進一些化學(xué)反應(yīng)的發(fā)生。白銀等研究發(fā)現(xiàn)隨射流空化處理時間的延長,SPI溶解性、乳化性、持油性以及表面疏水性均顯著提高。Li等研究發(fā)現(xiàn)水力空化處理可以使?jié)饪s乳蛋白的流變性質(zhì)得到改善,降低濃縮乳蛋白的黏度,提高乳粉噴霧干燥的效率。Meletharayil等研究發(fā)現(xiàn)水力空化可改善希臘酸奶的流變特性和微觀結(jié)構(gòu)。課題組前期研究結(jié)果表明,水力空化處理能改變SPI的理化和結(jié)構(gòu)性質(zhì),如溶解性增加、表面疏水性增加,還會改變其二級結(jié)構(gòu)。這些理化和結(jié)構(gòu)性質(zhì)的改變可能會使其凝膠行為發(fā)生改變,但是關(guān)于水力空化對蛋白質(zhì)凝膠行為的影響研究還鮮有報道。基于此,本實驗采用基于渦流的水力空化來處理SPI,再在TG的催化作用下制備凝膠,分析SPI經(jīng)水力空化處理后其酶促凝膠行為的變化規(guī)律和機理,為有效調(diào)控大豆蛋白凝膠制品的品質(zhì)提供理論依據(jù),同時為將水力空化應(yīng)用到食品工業(yè)提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    SPI(蛋白質(zhì)量分數(shù)≥90%) 山東禹王生態(tài)食品有限公司;TG(酶活力為100 U/g) 江蘇泰興市東圣生物科技有限公司;其他化學(xué)試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    JXN-26冷凍高速離心機 美國貝克曼庫爾特股份有限公司;DF-101S恒溫加熱磁力攪拌器 河南予華儀器有限公司;MCR 72流變儀 奧地利Anton Paar有限公司;GSL-1010全自動激光顆粒分布測量儀 遼寧儀表研究所有有限責(zé)任公司;TA-XT plus質(zhì)構(gòu)分析儀 英國Stable Micro System公司;UV-2600紫外-可見分光光度計 島津儀器(蘇州)有限公司;AE2204電子分析天平 湘儀天平儀器設(shè)備有限公司;HY-4調(diào)速振蕩器長沙創(chuàng)滿電子科技有限公司;AlpHal-4LDpus真空冷凍干燥機 德國CHRIST公司;Phenom ProX掃描電子顯微鏡上海復(fù)納科學(xué)儀器有限公司;iS10紅外光譜儀 美國尼力高儀器公司;水力(渦流)空化裝置 實驗室自制。

    1.3 方法

    1.3.1 水力空化處理SPI

    用去離子水配制質(zhì)量濃度分別為60、80、100 g/L的SPI分散液,磁力攪拌2 h使其充分溶解。將不同質(zhì)量濃度的SPI分散液倒入水力(渦流)空化裝置的分散液貯箱中,開啟冷凝水,控制整個處理過程中SPI分散液的溫度不超過40 ℃,開啟渦流泵,調(diào)節(jié)壓力為0.4 MPa,分別處理10、20、30、60 min后取樣測定其粒徑、黏度并進行酶促凝膠制備。

    1.3.2 SPI分散液粒徑的測定

    參考文獻[13]的方法,使用GSL-1010全自動激光顆粒分布測量儀測定SPI樣品的粒徑。SPI樣品的折射率和吸收參數(shù)分別為1.450和0.001。將SPI樣品加入去離子水中,調(diào)整遮光率為20%~25%,測量樣品的粒徑分布情況和體積平均粒徑()。

    1.3.3 SPI分散液黏度的測定

    參考文獻[14]的方法,使用MCR 72流變儀進行SPI黏度的測定,選擇直徑50 mm的平板進行SPI樣品剪切速率掃描。設(shè)定剪切速率范圍為10~1 000 s,記錄黏度隨剪切速率的變化情況。

    1.3.4 酶促凝膠的制備

    參考文獻[15]的方法向1.3.1節(jié)制得的樣品以及未經(jīng)過水力空化處理的SPI樣品中加入TG(添加量為3 g/L),于37 ℃水浴中保溫2 h后,取出置于4 ℃冰箱中,靜置8~12 h,測定樣品的凝膠性質(zhì)。

    1.3.5 凝膠強度的測定

    參考文獻[16]的方法,使用質(zhì)構(gòu)分析儀對1.3.4節(jié)制得的凝膠樣品進行凝膠強度的測定。使用P/0.5探頭,設(shè)定測前速度為5 mm/s,穿刺和測后速度為1 mm/s,壓縮距離為10 mm,觸發(fā)力為5.0 g。凝膠強度為下壓至10 mm時的最大力。

    1.3.6 凝膠持水性的測定

    參考文獻[17]的測定方法,分別準確稱取5 g 1.3.4節(jié)制得的凝膠樣品于離心管中,記錄離心管和凝膠樣品的總質(zhì)量,8 000 r/min離心20 min,取出離心管,將其倒置使水分排干,用濾紙擦干離心管內(nèi)外的殘留液體,記錄此時的總質(zhì)量,按下式計算持水性。

    1.3.7 凝膠形成過程的流變學(xué)特性測定

    參考文獻[18]的方法并稍作修改。使用流變儀進行模擬凝膠形成實驗,選擇直徑為50 mm的平板,設(shè)置間隙為1 mm,應(yīng)變?yōu)?.5%,角頻率為1 Hz。平板間充滿樣品后刮去多余的樣品,為了防止水分蒸發(fā),在樣品周圍滴2~3 滴植物油。實驗中的溫度掃描由加熱階段、恒溫階段和降溫階段組成,即由2 ℃/min的速率從25 ℃升溫至37 ℃并保溫2 h,再以2 ℃/min的速率從37 ℃降溫至25 ℃,測定儲能模量(′)和損耗模量(″)隨溫度和時間的變化。

    1.3.8 凝膠分子間作用力的測定

    參照文獻[19-20]的方法,通過不同溶劑破壞SPI凝膠形成過程中的分子作用力,NaCl溶液(0.6 mol/L)可破壞離子鍵,低濃度(1.5 mol/L)尿素可破壞氫鍵,高濃度(8 mol/L)尿素可破壞疏水相互作用,而-巰基乙醇(0.5 mol/L)會破壞二硫鍵。將1.3.4節(jié)制得的凝膠樣品用大蒜壓制器壓碎后,采用逐級溶解法測定4種不同溶劑(S1:0.6 mol/L NaCl;S2:1.5 mol/L尿素+0.6 mol/L NaCl;S3:8 mol/L尿素+0.6 mol/L NaCl;S4:0.5 mol/L-巰基乙醇+8 mol/L尿素+0.6 mol/L NaCl)中溶解的凝膠的蛋白質(zhì)含量,分別以溶解于S1~S4的蛋白質(zhì)含量占總蛋白質(zhì)含量的比例來表征凝膠中離子鍵、氫鍵、疏水相互作用和二硫鍵的相對含量,經(jīng)S4提取后最終所得沉淀的蛋白質(zhì)含量占總蛋白質(zhì)含量的比例表示非二硫共價鍵的相對含量。具體操作步驟和計算方法參考文獻[12]。

    1.3.9 掃描電子顯微鏡觀察

    參考文獻[21]的方法,將1.3.4節(jié)制得的80 g/L SPI酶促凝膠樣品冷凍干燥后進行噴金,電壓為10 kV,用Phenom ProX掃描電子顯微鏡進行微觀結(jié)構(gòu)觀察。

    1.3.10 傅里葉變換紅外光譜分析

    參考文獻[22]的方法,將1.3.4節(jié)制得的80 g/L SPI凝膠樣品冷凍干燥,與KBr粉末混合研磨,將混合粉末壓制成薄片,使用紅外光譜儀進行全波段掃描,設(shè)置分辨率為4 cm,掃描次數(shù)32 次,測量范圍為4 000~400 cm。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    實驗設(shè)置3個平行,結(jié)果以平均值±標準差表示。使用SPSS 26軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,采用單因素方差分析確定統(tǒng)計學(xué)差異,采用Duncan多重比較進行顯著性分析,<0.05表示差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 水力空化對SPI粒徑的影響

    水力空化對不同質(zhì)量濃度SPI分散液粒徑分布的影響如圖1所示,未經(jīng)水力空化處理的SPI樣品顯示出相對較寬的粒徑分布范圍,且具有更多更大尺寸的粒子。經(jīng)過水力空化處理后的SPI粒徑分布明顯變窄,且分布峰向較小粒徑方向移動較大。由圖2可知,水力空化處理使SPI的體積平均粒徑顯著降低(<0.05),并且在處理30 min內(nèi),平均粒徑隨著處理時間的延長而不斷降低。這說明空化過程中產(chǎn)生的剪切力或沖擊波等空化效應(yīng)能破壞蛋白分子間的相互作用,使大的聚集體解聚,粒徑降低。但是當(dāng)處理時間延長至60 min后,粒徑又有所增加,這可能是因為長時間空化處理促進蛋白發(fā)生了聚合。胡昊采用超聲波處理SPI時也觀察到類似現(xiàn)象。

    圖1 水力空化對SPI分散液粒徑分布的影響Fig.1 Effect of HC on particle size distribution of SPI

    圖2 水力空化對SPI粒徑的影響Fig.2 Effect of HC on particle sizes of SPI

    2.2 水力空化對SPI分散液黏度的影響

    由圖3可知,在10~1 000 s的剪切范圍內(nèi),所有樣品的黏度都隨著剪切速率的增加而不斷降低,表現(xiàn)出典型剪切變稀的非牛頓流體特征。在相同剪切速率下,經(jīng)水力空化處理后的SPI黏度均比未處理的低,并且在空化處理30 min內(nèi),黏度隨著處理時間的延長而降低,這主要是因為空化過程中產(chǎn)生的局部高溫、高壓、剪切或沖擊波等空化效應(yīng)使SPI中的聚集體解聚,粒徑降低,黏度減小。當(dāng)空化處理時間延長至60 min后,SPI的黏度又有所增加,這可能是因為長時間的空化處理引起了蛋白顆粒的重新聚集,使其粒徑增大,黏度增加。劉冉等使用超聲波處理SPI分散液時也發(fā)現(xiàn)超聲波能使SPI粒徑減小,黏度降低,但是SPI黏度并沒有隨著超聲功率的增加而一直降低,當(dāng)使用較大功率(400、600 W)處理時SPI重聚集,黏度反而增大。

    圖3 水力空化對SPI分散液黏度的影響Fig.3 Effect of HC on the viscosity of SPI dispersion

    2.3 水力空化對SPI酶促凝膠強度的影響

    水力空化處理對不同質(zhì)量濃度SPI酶促凝膠強度的影響如圖4所示。在相同處理時間下,凝膠強度隨著SPI質(zhì)量濃度的增加而顯著增強(<0.05),這與臧學(xué)麗等的研究結(jié)果一致。這是因為隨著蛋白質(zhì)量濃度增加,SPI與TG作用的機率增加,更多的SPI分子在TG的作用下發(fā)生交聯(lián)反應(yīng),促進了凝膠網(wǎng)絡(luò)的形成。另外,蛋白質(zhì)量濃度的增加也促進了蛋白分子之間的相互作用,也有利于凝膠網(wǎng)絡(luò)的形成。由圖4可知,水力空化處理能增加SPI酶促凝膠的強度。這是因為一方面,SPI經(jīng)水力空化處理后黏度下降,TG能更好地分散到SPI分散液中,有利于TG與蛋白分子的充分接觸,促進蛋白分子中賴氨酸殘基和谷氨酰胺殘基交聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生;另一方面,前期研究結(jié)果表明,SPI經(jīng)水力空化處理后粒徑減小,溶解性增大,表面疏水性增加,蛋白分子的結(jié)構(gòu)變得更加松散,這就使得原本埋藏在分子內(nèi)部的賴氨酸殘基和谷氨酰胺殘基暴露出來,增加了TG的作用位點,二者在TG的作用下發(fā)生交聯(lián)反應(yīng),形成了蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。Hu Hao等研究發(fā)現(xiàn)SPI經(jīng)超聲處理后,其粒徑減小、表面疏水性和游離巰基含量增加,形成的凝膠強度明顯增加。另外,當(dāng)水力空化處理時間延長至60 min時,SPI所形成的凝膠強度相比30 min有所降低,這可能是過長時間的處理使得SPI重聚集,分散液的黏度又開始增大引起的。

    圖4 水力空化對SPI酶促凝膠強度的影響Fig.4 Effect of HC on gel strength of transglutaminase-catalyzed SPI gel

    2.4 水力空化對SPI酶促凝膠持水性的影響

    由圖5可知,未經(jīng)水力空化處理的SPI形成的酶促凝膠持水性隨SPI質(zhì)量濃度的增加而增加,當(dāng)SPI質(zhì)量濃度分別為60、80、100 g/L時,凝膠的持水性分別為(42.15±0.87)%、(58.49±1.39)%、(70.26±1.21)%,表現(xiàn)為凝膠經(jīng)離心后均有不同量的水滲出。水力空化處理使SPI酶促凝膠的持水性顯著增加(<0.05)。經(jīng)水力空化處理20 min后的SPI酶促凝膠經(jīng)離心后基本沒有水滲出,持水性接近100%。這可能是因為經(jīng)過水力空化處理后的SPI形成的酶促凝膠強度增加,空間結(jié)構(gòu)更加致密、均一,能將水分子更好地束縛在凝膠內(nèi)部。Zhang Peipei等也發(fā)現(xiàn)超聲空化可以提高SPI酶促凝膠的持水性,超聲空化可以有助于形成更均勻、更致密的凝膠網(wǎng)絡(luò),可以緊密結(jié)合更多的水,因此導(dǎo)致持水性增加。

    圖5 水力空化對SPI酶促凝膠持水性的影響Fig.5 Effect of HC on water-holding capacity of transglutaminasecatalyzed SPI gel

    2.5 水力空化對SPI酶促凝膠流變學(xué)性質(zhì)的影響

    儲能模量(’)又稱為彈性模量,代表黏彈行為的彈性部分,描述的是樣品的固態(tài)特性;損耗模量(”)又稱黏性模量,代表黏彈行為的黏性部分,描述的是樣品的液態(tài)特性?!綠”說明樣品表現(xiàn)出黏彈性固體的特性,’<”則說明樣品表現(xiàn)黏彈性流體的特性。SPI質(zhì)量濃度為60 g/L時的凝膠曲線如圖6A所示。未經(jīng)水力空化處理和經(jīng)水力空化處理10 min的SPI在整個過程中,’一直小于”,表現(xiàn)出黏彈性流體的特性,說明凝膠未形成。經(jīng)空化處理20、30、60 min的SPI分別在7 603、4 615、4 399 s時’=”,說明凝膠網(wǎng)絡(luò)開始形成,之后’和”繼續(xù)增加,表明凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)在加強,整個過程結(jié)束后,最終形成凝膠的’分別達到2.81、11.52、7.12 Pa。SPI質(zhì)量濃度為80 g/L和100 g/L的凝膠曲線分別如圖6B、C所示,這兩個質(zhì)量濃度下未處理的SPI由于黏度大,一開始’就大于”,表現(xiàn)出黏彈性固體的特性,但是在整個過程中,’和”都沒有隨著溫度的變化和時間的延長而明顯增加。80 g/L的SPI經(jīng)水力空化處理不同時間后,黏度降低,一開始’<”,表現(xiàn)出黏彈性液體的特性,在升溫和保溫過程中’和”一直隨著溫度的變化和時間的延長而逐漸增加,經(jīng)空化處理10、20、30、60 min的SPI分別在6 847、2 383、727.5、871.5 s時’=”,說明凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)開始形成,此后’和”繼續(xù)增加,在整個過程結(jié)束后,最終形成的凝膠的’值分別為24.76、82.28、1 384.70、726.23 Pa,其中經(jīng)水力空化處理30 min的SPI形成凝膠的’值高于未處理的’值。100 g/L的SPI經(jīng)水力空化處理后凝膠形成過程中的流變學(xué)性質(zhì)與80 g/L的類似,經(jīng)空化處理10、20、30、60 min的SPI分別在1 592、1 543、205.5、439.5 s時’=”,最終形成的凝膠的’值分別為96.14、128.90、14 304.00、3 394.90 Pa,其中經(jīng)水力空化處理30 min和60 min的SPI形成凝膠的’值均高于未處理的’值。由此可見,SPI經(jīng)水力空化處理后的成膠的蛋白質(zhì)量濃度降低,成膠時間隨著蛋白質(zhì)量濃度的增加而提前,并且各個質(zhì)量濃度的SPI經(jīng)水力空化處理30 min后,所形成凝膠的’相比未處理的均明顯增加。Shen Xue等研究發(fā)現(xiàn)相對未處理樣品,超聲處理(20 KHz,20 min)的乳清蛋白在流變模擬凝膠形成過程中’和”顯著增大。Gregersen等的研究結(jié)果表明,超聲處理牛奶后導(dǎo)致開始形成酸促凝膠時間顯著縮短,還引起最終’的顯著增大。

    圖6 水力空化對SPI酶促凝膠G’和G”的影響Fig.6 Effect of HC on G’ and G” of transglutaminase-catalyzed SPI gel

    此外,需要說明的是,流變學(xué)測試結(jié)果與凝膠強度結(jié)果基本一致,但不是一一對應(yīng)的,如80 g/L的SPI經(jīng)水力空化處理20 min和60 min后的凝膠強度顯著高于未處理組(<0.05),但是其’值卻小于未處理組。這可能是在測定流變特性和凝膠強度時施加在樣品上的力的類型不同造成的?!凳峭ㄟ^流變儀在保證形變的線性范圍內(nèi)給予蛋白質(zhì)樣品的剪切壓力,它對樣品的結(jié)構(gòu)沒有破壞。而凝膠強度是使用測試儀的探針對樣品進行的穿刺破壞性測試,它涉及探針與樣品之間的壓縮力和剪切力,還與蛋白凝膠網(wǎng)絡(luò)中的填充物有關(guān),因此’并不總是代表凝膠強度。

    2.6 水力空化對SPI酶促凝膠分子間作用力的影響

    由于水力空化對60、80、100 g/L SPI形成的酶促凝膠的強度、持水性和流變特性的影響趨勢大致相同,因此選取了中間質(zhì)量濃度80 g/L的SPI酶促凝膠來繼續(xù)研究凝膠的分子間作用力、微觀結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)的變化,從而探討水力空化對SPI酶促凝膠行為的影響機制。由表1可知,未經(jīng)空化處理的SPI形成的酶促凝膠中分子間作用力以非二硫共價鍵和離子鍵為主,疏水相互作用和二硫鍵次之,氫鍵所占比例較小。經(jīng)過空化處理后的SPI形成的酶促凝膠中,二硫鍵和非二硫共價鍵相對含量顯著增加(<0.05),成為凝膠形成的主要分子間作用力,而離子鍵、氫鍵和疏水相互作用相對含量均顯著降低(<0.05)。前期研究結(jié)果表明,SPI經(jīng)水力空化處理后粒徑減小,溶解性增大,表面疏水性增加,蛋白分子的結(jié)構(gòu)變得更加松散,這就使得更多的賴氨酸殘基和谷氨酰胺殘基暴露出來,二者在TG的作用下交聯(lián)形成-(-谷氨?;?-賴氨酸共價結(jié)合鍵,使凝膠中非二硫共價鍵的相對含量增加,有利于凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的形成。此外,前期研究結(jié)果還表明,水力空化處理能使SPI中的二硫鍵斷裂,蛋白分子結(jié)構(gòu)展開,游離巰基含量增多,這就導(dǎo)致在TG誘導(dǎo)蛋白分子交聯(lián)形成凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的同時,巰基互相靠近再形成二硫鍵,使凝膠中二硫鍵的相對含量增加,進一步促進凝膠網(wǎng)絡(luò)的形成。金楊等研究發(fā)現(xiàn)隨著凝固溫度的升高,填充豆腐的二硫鍵相對含量增多,與填充豆腐的硬度和彈性顯著正相關(guān)。Jia Dan等研究發(fā)現(xiàn)通過添加TG,鯉魚肌動球蛋白凝膠中非二硫鍵含量大大提高,凝膠強度、持水性及’顯著增大。結(jié)合前面凝膠強度和持水性的結(jié)果來看,經(jīng)水力空化處理后的SPI形成的酶促凝膠強度和持水性增加,這與凝膠中二硫鍵和非二硫共價鍵相對含量的增加有關(guān)。

    表1 水力空化對80 g/L SPI酶促凝膠分子間作用力的影響Table 1 Effect of HC on intermolecular forces of transglutaminasecatalyzed gel from 80 g/L SPI

    2.7 水力空化對SPI酶促凝膠微觀結(jié)構(gòu)的影響

    采用電子掃描顯微鏡放大300 倍觀察80 g/L的SPI在水力空化處理前后所形成的酶促凝膠微觀結(jié)構(gòu)的變化。如圖7所示,經(jīng)過水力空化處理后的SPI形成的凝膠微觀結(jié)構(gòu)與未處理組有明顯差異。未處理的SPI形成了松散、孔洞大小不一、無規(guī)則的凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),經(jīng)水力空化處理20 min后的SPI形成的凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)相對緊湊,經(jīng)水力空化30 min和60 min后形成的SPI凝膠網(wǎng)絡(luò),結(jié)構(gòu)變得更加致密、孔洞較小而且均勻。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是由于水力空化顯著降低了蛋白粒徑,增加了暴露于蛋白表面的活性基團,促進TG交聯(lián)反應(yīng)形成更加均勻致密的凝膠結(jié)構(gòu)。致密均勻的凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)更加有利于水分的截留,提高持水性,這與前面持水性的研究結(jié)果一致。Zhang Peipei等發(fā)現(xiàn)通過高強度超聲空化處理SPI形成的TG酶促凝膠的微觀結(jié)構(gòu)變得致密、均勻,并顯著提高了SPI酶促凝膠的凝膠強度、保水能力。

    圖7 水力空化對80 g/L SPI酶促凝膠微觀結(jié)構(gòu)的影響Fig.7 Effect of HC on microstructure of transglutaminase-catalyzed gel from 80 g/L SPI

    2.8 水力空化對SPI酶促凝膠二級結(jié)構(gòu)的影響

    SPI酶促凝膠樣品在4 000~400 cm范圍內(nèi)的傅里葉變換紅外光譜如圖8所示。SPI酶促凝膠的酰胺I帶二階導(dǎo)數(shù)光譜圖如圖9所示。采用Omnic 8.3和 Peakfit 4.12 軟件進行分析,包括在酰胺I帶(1 700~1 600 cm)范圍內(nèi)進行兩點基線校正、平滑處理、去卷積、作二階導(dǎo)數(shù),同時采用Gaussian法進行多次曲線擬合,最后將擬合出的子峰歸屬給蛋白的4種二級結(jié)構(gòu),并通過計算各子峰面積百分比推導(dǎo)蛋白樣品的二級結(jié)構(gòu)組成。各子峰與二級結(jié)構(gòu)對應(yīng)關(guān)系:1 600~1 640cm為-折疊,1 650~1 660 cm為-螺旋,1 640~1 650 cm為無規(guī)卷曲,1 660~1 700 cm為-轉(zhuǎn)角。不同處理80 g/L SPI酶促凝膠二級結(jié)構(gòu)的相對含量如表2所示。

    圖8 80 g/L SPI酶促凝膠的傅里葉變換紅外光譜Fig.8 Fourier transform infrared spectra of transglutaminasecatalyzed gel from 80 g/L SPI

    圖9 80 g/L SPI酶促凝膠的酰胺I帶二階導(dǎo)數(shù)光譜圖Fig.9 Second-derivative amide I spectra of transglutaminase-catalyzed gel from 80 g/L SPI

    表2 水力空化對80 g/L SPI酶促凝膠二級結(jié)構(gòu)的影響Table 2 Effect of HC on secondary structure of transglutaminasecatalyzed gel from 80 g/L SPI

    由表2可知,經(jīng)過水力空化處理后的SPI酶促凝膠二級結(jié)構(gòu)中的各個組成的含量發(fā)生明顯變化。與未處理的樣品相比,經(jīng)過水力空化處理后的SPI酶促凝膠-折疊、-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)相對含量顯著增加,-螺旋、無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)相對含量顯著降低,表明-螺旋、無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化成-折疊、-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)。-螺旋結(jié)構(gòu)相對含量減少一般伴隨著氫鍵相對含量的降低,-折疊相對含量升高表明蛋白質(zhì)疏水相互作用降低,這與前文分子間作用力測定結(jié)果一致。無規(guī)卷曲相對含量的降低,說明凝膠二級結(jié)構(gòu)從無序向有序轉(zhuǎn)變,這與凝膠的微觀結(jié)構(gòu)結(jié)果相印證。Herrero等研究發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)-折疊和-轉(zhuǎn)角的相對含量與形成的凝膠強度顯著正相關(guān),可見經(jīng)水力空化處理后的SPI酶促凝膠強度的增加還與凝膠二級結(jié)構(gòu)中-折疊和-轉(zhuǎn)角相對含量的增加有關(guān)。

    3 結(jié) 論

    SPI經(jīng)水力空化處理后形成的酶促凝膠微觀結(jié)構(gòu)更加致密均勻;二級結(jié)構(gòu)中-螺旋、無規(guī)卷曲相對含量降低,-折疊、-轉(zhuǎn)角相對含量增加;凝膠形成過程中的分子間作用力也發(fā)生變化,二硫鍵和非二硫共價鍵的相對含量增加,成為凝膠形成的主要分子間作用力,而離子鍵、氫鍵相對含量和疏水相互作用均降低。這些凝膠結(jié)構(gòu)和分子間作用力的變化,使得經(jīng)水力空化處理后的SPI形成的酶促凝膠持水性、凝膠強度和最終的’增大,其中以處理30 min后形成的酶促凝膠最大。結(jié)果表明,一定時間的水力空化處理可以改善SPI酶促凝膠的性能,可為預(yù)測和控制大豆蛋白凝膠的性能和工藝優(yōu)化提供理論指導(dǎo)。

    猜你喜歡
    空化水性水力
    水力全開
    功率超聲作用下鋼液中空化泡尺寸的演變特性
    鋼鐵釩鈦(2023年5期)2023-11-17 08:48:34
    水性與常性
    球墨鑄鐵管的水力計算
    三維扭曲水翼空化現(xiàn)象CFD模擬
    不同運動形式下水物相互作用空化數(shù)值模擬
    水力噴射壓裂中環(huán)空水力封隔全尺寸實驗
    新型鞋用水性聚氨酯膠研發(fā)成功
    基于Ni2+氧化性和磷酸酯緩蝕性制備水性鋁顏料
    低水力停留時間氧化溝的改造與調(diào)控
    777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产高清激情床上av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 大型av网站在线播放| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 女同久久另类99精品国产91| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 午夜福利免费观看在线| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 熟女电影av网| 久久99热这里只有精品18| 亚洲一码二码三码区别大吗| 精品久久蜜臀av无| 日韩精品中文字幕看吧| 精品国产一区二区三区四区第35| 免费搜索国产男女视频| 正在播放国产对白刺激| 久久精品91蜜桃| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 成人午夜高清在线视频 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美zozozo另类| 亚洲免费av在线视频| 黄色a级毛片大全视频| 国内精品久久久久精免费| 亚洲专区国产一区二区| 动漫黄色视频在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产亚洲欧美98| 看黄色毛片网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 香蕉av资源在线| 国产高清有码在线观看视频 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美成人性av电影在线观看| 欧美中文综合在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 日韩欧美在线二视频| 国产精品国产高清国产av| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久中文字幕一级| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲国产看品久久| 91av网站免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜日韩欧美国产| 亚洲自偷自拍图片 自拍| www日本在线高清视频| 在线观看免费视频日本深夜| 男人舔女人的私密视频| 欧美在线黄色| 男女床上黄色一级片免费看| 变态另类丝袜制服| 国产精品九九99| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲人成77777在线视频| 日韩欧美免费精品| www.www免费av| av福利片在线| 女人被狂操c到高潮| 欧美中文综合在线视频| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 久久久久久九九精品二区国产 | 精品免费久久久久久久清纯| 欧美中文综合在线视频| 久热爱精品视频在线9| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品 国内视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 可以在线观看的亚洲视频| 国产激情欧美一区二区| 欧美又色又爽又黄视频| 91av网站免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 999久久久国产精品视频| 亚洲中文av在线| 午夜激情福利司机影院| 精品国产国语对白av| 国产野战对白在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 91老司机精品| 国产高清视频在线播放一区| 黄频高清免费视频| 一本精品99久久精品77| 午夜福利高清视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 黄色成人免费大全| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| av电影中文网址| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久青草综合色| 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| xxx96com| 波多野结衣高清无吗| 丝袜美腿诱惑在线| 成人18禁在线播放| 亚洲 国产 在线| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲一区二区三区色噜噜| av有码第一页| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 黄色成人免费大全| 国产三级黄色录像| 成人三级做爰电影| 色哟哟哟哟哟哟| 女性生殖器流出的白浆| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 妹子高潮喷水视频| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品 欧美亚洲| 日本黄色视频三级网站网址| 视频区欧美日本亚洲| xxxwww97欧美| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 天堂动漫精品| 久久久国产成人精品二区| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 久9热在线精品视频| 91在线观看av| 亚洲成人国产一区在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 久久中文字幕人妻熟女| 国产精品永久免费网站| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产片内射在线| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产精品精品国产色婷婷| 成人三级做爰电影| 久久久久久免费高清国产稀缺| 女性生殖器流出的白浆| 操出白浆在线播放| 麻豆一二三区av精品| 丝袜在线中文字幕| 精品乱码久久久久久99久播| 国产成人av教育| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 国产区一区二久久| 身体一侧抽搐| 欧美在线一区亚洲| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 12—13女人毛片做爰片一| 日本一区二区免费在线视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 男男h啪啪无遮挡| 日本成人三级电影网站| 国产精品,欧美在线| 亚洲黑人精品在线| 午夜久久久久精精品| 一级a爱视频在线免费观看| av欧美777| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品久久视频播放| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲在线自拍视频| 老司机靠b影院| 亚洲,欧美精品.| 69av精品久久久久久| 在线观看日韩欧美| 成人精品一区二区免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 人成视频在线观看免费观看| 婷婷丁香在线五月| 午夜免费鲁丝| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一二三四社区在线视频社区8| 好男人在线观看高清免费视频 | 在线视频色国产色| 黄色视频不卡| 美女 人体艺术 gogo| 午夜久久久久精精品| 国产视频一区二区在线看| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 制服诱惑二区| 男人的好看免费观看在线视频 | 午夜久久久久精精品| 亚洲av片天天在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 久久久精品欧美日韩精品| 免费看十八禁软件| 亚洲男人的天堂狠狠| 又黄又粗又硬又大视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 69av精品久久久久久| 精品久久蜜臀av无| 亚洲午夜理论影院| 成人国产综合亚洲| 一进一出抽搐gif免费好疼| 老汉色av国产亚洲站长工具| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品无人区乱码1区二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 美女免费视频网站| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲av美国av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| av片东京热男人的天堂| 久久伊人香网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 妹子高潮喷水视频| 天堂动漫精品| 亚洲国产精品成人综合色| 制服诱惑二区| 一级毛片高清免费大全| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 成人免费观看视频高清| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 手机成人av网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 日本免费a在线| 久久这里只有精品19| 国产精品电影一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲av电影在线进入| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 日本熟妇午夜| 亚洲 国产 在线| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 窝窝影院91人妻| 日韩欧美 国产精品| 久久精品影院6| x7x7x7水蜜桃| 一级毛片高清免费大全| 好男人电影高清在线观看| 午夜福利高清视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 中国美女看黄片| 91老司机精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 啦啦啦 在线观看视频| 免费在线观看黄色视频的| 人人妻人人看人人澡| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 午夜日韩欧美国产| 国产一区二区三区视频了| 国产一区二区在线av高清观看| 成年人黄色毛片网站| 一级毛片女人18水好多| 亚洲全国av大片| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲专区字幕在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 1024视频免费在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲av第一区精品v没综合| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 18禁国产床啪视频网站| 高清在线国产一区| 婷婷六月久久综合丁香| 人妻久久中文字幕网| 日本五十路高清| 国产av又大| 少妇 在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 中文字幕高清在线视频| 亚洲中文av在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 黄片小视频在线播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| av中文乱码字幕在线| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产麻豆成人av免费视频| 动漫黄色视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 白带黄色成豆腐渣| 免费搜索国产男女视频| 白带黄色成豆腐渣| 男女视频在线观看网站免费 | 美女午夜性视频免费| 在线看三级毛片| 午夜福利高清视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品成人免费网站| 欧美成人午夜精品| 国产精品 国内视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 91av网站免费观看| 超碰成人久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 一本综合久久免费| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| avwww免费| 后天国语完整版免费观看| 黄色毛片三级朝国网站| 久久久国产欧美日韩av| 精品国产乱码久久久久久男人| 日本三级黄在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品高清国产在线一区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 村上凉子中文字幕在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 一级毛片精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 午夜激情福利司机影院| 亚洲五月色婷婷综合| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产精品一区二区免费欧美| 国产在线观看jvid| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 一个人免费在线观看的高清视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产精品 国内视频| 91九色精品人成在线观看| 久久久久久久久久黄片| 亚洲avbb在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 俺也久久电影网| 真人做人爱边吃奶动态| 18禁国产床啪视频网站| 成人国语在线视频| 悠悠久久av| 亚洲av熟女| 精品卡一卡二卡四卡免费| 岛国视频午夜一区免费看| 国产亚洲欧美98| 国产精品综合久久久久久久免费| a级毛片在线看网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲中文av在线| 黄色a级毛片大全视频| 丰满的人妻完整版| 成人国语在线视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 两个人视频免费观看高清| 一本精品99久久精品77| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 男人的好看免费观看在线视频 | 一区二区三区激情视频| 日本a在线网址| 一本综合久久免费| 黄色视频不卡| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一二三四在线观看免费中文在| 日本精品一区二区三区蜜桃| 麻豆国产av国片精品| 精品国产国语对白av| 精华霜和精华液先用哪个| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品久久电影中文字幕| av电影中文网址| 国产爱豆传媒在线观看 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产成人精品久久二区二区免费| 妹子高潮喷水视频| 丰满的人妻完整版| 日韩av在线大香蕉| 女人被狂操c到高潮| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产麻豆成人av免费视频| 免费在线观看影片大全网站| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲精品中文字幕一二三四区| 人人妻人人看人人澡| 欧美午夜高清在线| 亚洲人成电影免费在线| 岛国在线观看网站| 成在线人永久免费视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 19禁男女啪啪无遮挡网站| aaaaa片日本免费| 看片在线看免费视频| av中文乱码字幕在线| 久久香蕉激情| 亚洲精品在线美女| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲av成人av| 精品久久久久久久久久久久久 | 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲天堂国产精品一区在线| 韩国精品一区二区三区| 欧美色视频一区免费| 国产午夜福利久久久久久| 国产三级黄色录像| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产真实乱freesex| 亚洲一区二区三区不卡视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| av片东京热男人的天堂| 男男h啪啪无遮挡| ponron亚洲| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产高清videossex| 手机成人av网站| 不卡一级毛片| 久久精品人妻少妇| 国产一区二区激情短视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产成人av激情在线播放| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 男女视频在线观看网站免费 | 久久久久国内视频| √禁漫天堂资源中文www| 欧美不卡视频在线免费观看 | 成人av一区二区三区在线看| 岛国视频午夜一区免费看| 大香蕉久久成人网| 天堂影院成人在线观看| 麻豆成人av在线观看| 午夜免费观看网址| 久久久久九九精品影院| 国产高清videossex| 久久香蕉精品热| 久久久久久久久久黄片| 午夜精品在线福利| 精品国产乱子伦一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| АⅤ资源中文在线天堂| 99精品久久久久人妻精品| 日日爽夜夜爽网站| 成人国产一区最新在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久这里只有精品19| 精品国产国语对白av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久国产精品人妻蜜桃| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲免费av在线视频| 天天一区二区日本电影三级| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品91无色码中文字幕| 伦理电影免费视频| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 午夜免费鲁丝| 国产成年人精品一区二区| 国产精品永久免费网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 大型av网站在线播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 一a级毛片在线观看| 69av精品久久久久久| 久久伊人香网站| 日本黄色视频三级网站网址| 日韩三级视频一区二区三区| 美女 人体艺术 gogo| 一本大道久久a久久精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 十八禁人妻一区二区| 丁香六月欧美| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲国产精品成人综合色| 观看免费一级毛片| 成人国产一区最新在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品永久免费网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 91麻豆av在线| 在线观看www视频免费| 亚洲无线在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一级黄色大片毛片| av有码第一页| 精品午夜福利视频在线观看一区| 在线观看免费视频日本深夜| 国产三级黄色录像| 女人被狂操c到高潮| 女同久久另类99精品国产91| 国产三级黄色录像| 色综合欧美亚洲国产小说| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美成人免费av一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 嫩草影院精品99| 国产精品久久电影中文字幕| 老汉色∧v一级毛片| 久久中文字幕一级| 中文在线观看免费www的网站 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产欧美日韩一区二区三| 久99久视频精品免费| 岛国在线观看网站| 99在线人妻在线中文字幕| 少妇的丰满在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 男人的好看免费观看在线视频 | 在线播放国产精品三级| 国产高清视频在线播放一区| 69av精品久久久久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品欧美国产一区二区三| 久久香蕉精品热| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品亚洲一级av第二区| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲男人的天堂狠狠| 嫩草影视91久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 99国产精品一区二区蜜桃av| 色老头精品视频在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美日本视频| 欧美性猛交黑人性爽| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久久久久国产a免费观看| 搡老熟女国产l中国老女人| а√天堂www在线а√下载| 亚洲最大成人中文| 午夜福利在线观看吧| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日韩欧美 国产精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲熟女毛片儿| 视频在线观看一区二区三区| av免费在线观看网站| 一级片免费观看大全| 国产视频一区二区在线看| 久久午夜亚洲精品久久| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 中国美女看黄片| 国产99白浆流出| 久99久视频精品免费| 午夜福利18| 久久伊人香网站| 久久久久久久久久黄片| 级片在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 色综合婷婷激情| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲成av人片免费观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲一区高清亚洲精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产av不卡久久| 一本综合久久免费| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲成人国产一区在线观看| 看片在线看免费视频| 精品免费久久久久久久清纯| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 日本一区二区免费在线视频| 精华霜和精华液先用哪个| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美激情极品国产一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 日本一区二区免费在线视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日本一本二区三区精品| 欧美在线一区亚洲| 亚洲精品一区av在线观看| 久久青草综合色| 在线观看午夜福利视频| 亚洲第一av免费看| 色综合婷婷激情| 好男人在线观看高清免费视频 | 亚洲 欧美一区二区三区| 在线观看午夜福利视频| 精华霜和精华液先用哪个|