化妝品非法添加成份檢測(cè)流程優(yōu)化研究

肖樹雄

廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

黃佳穎

廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

周智明

廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

陳桂琴

廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

漆愛明

廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

羅卓雅＊

廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

近年來，隨著化妝品產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展，化妝品的安全性也日益受到社會(huì)關(guān)注，有些不法商家為追求短期產(chǎn)品效果，擅自在化妝品中添加非法成份，嚴(yán)重影響著消費(fèi)者的身體健康[1]。非法添加的產(chǎn)品擾亂市場(chǎng)正常秩序，違背公平競(jìng)爭(zhēng)原則，給產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展帶來傷害?！痘瘖y品監(jiān)督管理?xiàng)l例》在2021 年正式實(shí)施，要求進(jìn)一步加強(qiáng)化妝品監(jiān)督管理，打擊非法添加行為[2]。自2011 年《健康產(chǎn)品中非法添加化學(xué)成分快速篩查方法理論與實(shí)踐》出版，廣東省藥品檢驗(yàn)所在監(jiān)管工作中持續(xù)深入探索，努力完善已形成的檢驗(yàn)?zāi)Ｊ絒3]。作為目前獲批的化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)兩個(gè)國(guó)家藥監(jiān)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的依托單位，廣東省藥品檢驗(yàn)所堅(jiān)持風(fēng)險(xiǎn)管理、創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)、服務(wù)監(jiān)管理念指導(dǎo)，在打擊化妝品非法添加方面取得了豐碩成果?？偨Y(jié)化妝品非法添加藥物成份檢測(cè)技術(shù)發(fā)展歷程，其中的關(guān)鍵點(diǎn)就是如何優(yōu)化化妝品非法添加成份檢測(cè)流程，縮短檢測(cè)時(shí)效，提高檢測(cè)水平。

1 化妝品中非法添加成份概述

非法添加物系指我國(guó)法律法規(guī)允許使用物質(zhì)之外的物質(zhì)。本文討論的添加物主要為單體化合物成份，故稱非法添加成份。

從添加行為的動(dòng)機(jī)看，有的成份系原料帶入，為客觀存在且技術(shù)上無法避免的雜質(zhì)，需通過安全評(píng)估確定合理的限值，確保其在正常、合理及可預(yù)見的適用條件下使用且不得對(duì)人體的健康產(chǎn)生危害。有的成份系人為主觀故意添加，其目的是為了增強(qiáng)產(chǎn)品使用效果，減少產(chǎn)品使用過程中產(chǎn)生的副作用，即使沒有健康危害，也是一種違法行為，為監(jiān)管部門必須堅(jiān)決打擊的行為，本文所討論的非法添加主要指人為添加該類成份。

通過對(duì)廣東省藥品檢驗(yàn)所2010～2020 年近2.2 萬批化妝品檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析發(fā)現(xiàn)，1180 批不合格檢品涉及53 種成份，包括糖皮質(zhì)激素、抗感染藥物、抗組胺藥物、西咪替丁、萘甲唑啉、汞，以及塑化劑、丙烯酰胺、其他金屬元素等，這些成份都屬于非法添加物質(zhì)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，添加抗感染藥物、糖皮質(zhì)激素、抗組胺藥物成份檢出批數(shù)占不合格批數(shù)前三，分別為42.71%、18.05%和3.90%；金屬元素方面汞占比最高，達(dá)39.83%（說明：上述部分產(chǎn)品同一批次檢出多個(gè)不合格項(xiàng)目，故占比總數(shù)超過100%）。

大部分非法添加成份已有法定檢測(cè)方法，但在監(jiān)管實(shí)踐和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)中還發(fā)現(xiàn)一些超出法定檢測(cè)方法之外的成份（未知物），建議可采用高分辨質(zhì)譜檢測(cè)進(jìn)行篩查確認(rèn)，一般步驟為初步鎖定未知化合物，再建立檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)。

目前，化妝品中非法添加行為仍時(shí)有發(fā)生，除了需加強(qiáng)執(zhí)法力度外，還應(yīng)從技術(shù)角度進(jìn)行拓展研究，提高檢測(cè)靈敏度，綜合運(yùn)用多種檢測(cè)手段，優(yōu)化檢測(cè)流程，開發(fā)出更多更優(yōu)的檢測(cè)方法。

2 化妝品功效宣稱類別非法添加成份清單

《化妝品監(jiān)督管理?xiàng)l例》中對(duì)化妝品功效宣稱、相關(guān)責(zé)任人與處罰措施等進(jìn)行了明確的規(guī)定?！痘瘖y品標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》明確提出，化妝品不得使用醫(yī)療術(shù)語、明示或暗示醫(yī)療作用和效果的詞語，例如處方、藥用、解毒、治療、抗敏、除菌、祛疤等。消費(fèi)者選購化妝品的根本依據(jù)是功效，直接依據(jù)是影響功效的因素，包括成份、原料、配方等[4]。為了獲取利潤(rùn)，有些商家會(huì)進(jìn)行虛假夸大宣傳欺騙消費(fèi)者，甚至進(jìn)行非法添加以達(dá)到所宣稱的功效，嚴(yán)重?cái)_亂市場(chǎng)秩序。因此，建立化妝品功效宣稱非法添加成份清單，可優(yōu)化檢測(cè)流程，提高化妝品檢測(cè)效率。

2.1 非法添加成份檢測(cè)回顧分析

根據(jù)廣東省藥品檢驗(yàn)所2010～2020 年化妝品檢驗(yàn)檢測(cè)情況，本文對(duì)監(jiān)督檢驗(yàn)最常見的祛斑美白類、祛痘類化妝品非法添加成份檢測(cè)情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，詳見表1。

表1 祛斑美白類、祛痘類化妝品非法添加成份檢測(cè)統(tǒng)計(jì)分析表

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，在宣稱祛斑美白類化妝品中，2010～2020 年發(fā)現(xiàn)非法添加的成份多為糖皮質(zhì)激素，其中最常添加為倍他米松，占37.56%；其次為地塞米松，占27.60%。為了逃避監(jiān)管，不法商家在化妝品中非法添加現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)范圍之外的糖皮質(zhì)激素成為一種新趨勢(shì)。例如，翁?hào)|海[5]等人研究發(fā)現(xiàn)化妝品中一種新的非法添加糖皮質(zhì)激素——倍他米松丁酸乙酸酯；廣東省藥品檢驗(yàn)所基于自建的化妝品高通量篩查數(shù)據(jù)庫，利用高分辨質(zhì)譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)一種新的非法添加糖皮質(zhì)激素甲基潑尼松。此外，需要注意的是在宣稱祛斑美白類產(chǎn)品中仍有可能加入抗感染藥物如甲氧芐啶、磺胺甲基異 唑、益康唑等，在起到美白療效的同時(shí)又抗炎，以及還有可能加入具有抗角化、角質(zhì)軟化作用的維甲酸。

在宣稱祛痘類化妝品中，2010～2020 年檢出非法添加成份多為抗感染類藥物，最常添加的為甲硝唑，占44.21%；其次為氯霉素，占20.46%。用有限的檢測(cè)方法擴(kuò)大非法添加物質(zhì)檢測(cè)種類一直是研究人員的努力方向，廣東省藥品檢驗(yàn)所基于自建的化妝品高通量篩查數(shù)據(jù)庫，用高分辨質(zhì)譜篩查檢測(cè)發(fā)現(xiàn)甲氧芐啶、夫西地酸[6]2 種新的化妝品中添加的抗感染藥物，以及1 種擬腎上腺素藥物萘甲唑啉[7]。

2.2 功效宣稱類別非法添加成份清單

根據(jù)上述檢測(cè)結(jié)果并分析預(yù)測(cè)目前市場(chǎng)上可能存在非法添加成份，本文設(shè)計(jì)了功效宣稱類別非法添加成份清單（含檢測(cè)方法），詳見表2。

表2 功效宣稱類別非法添加成份清單

3 化妝品非法添加成份檢測(cè)流程優(yōu)化

目前，我國(guó)化妝品檢測(cè)方法（標(biāo)準(zhǔn)）較多，但不同類型產(chǎn)品添加成份種類繁多且隱蔽，如何提高效率和準(zhǔn)確性，在短時(shí)間內(nèi)通過檢測(cè)得出準(zhǔn)確結(jié)果是當(dāng)務(wù)之急。為此，許多專家學(xué)者進(jìn)行了大量研究，例如王同珍[8]等人建立了一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定化妝品中94 種非法添加物的方法。該方法檢測(cè)組分包括糖皮質(zhì)激素類、性激素類、磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等，是目前涉及非法添加成份最多的一種檢驗(yàn)方法。

由于同時(shí)檢測(cè)不同種類非法添加成份，需要去除樣品干擾，富集目標(biāo)成份，毛婷等[9]人在食品安全未知化學(xué)性風(fēng)險(xiǎn)快速篩查確證技術(shù)研究進(jìn)展一文中總結(jié)到利用通用型前處理技術(shù)對(duì)樣品提取凈化后，采用高分辨質(zhì)譜全掃描，可得到一級(jí)質(zhì)譜，再采用CID 模式進(jìn)一步獲得二級(jí)質(zhì)譜，并根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜結(jié)果結(jié)合保留時(shí)間、同位素分布、化合物裂解規(guī)律等，與商業(yè)化譜庫或自建數(shù)據(jù)庫檢索比對(duì)，可對(duì)復(fù)雜背景下未知化合物進(jìn)行快速篩查和精準(zhǔn)確認(rèn)。

化妝品一般由原料混合配制而成，且為外用產(chǎn)品，與食品相比成份相對(duì)簡(jiǎn)單，因此在考慮檢測(cè)流程時(shí)可進(jìn)行簡(jiǎn)化處理。通過長(zhǎng)期實(shí)踐總結(jié)，廣東省藥品檢驗(yàn)所將信息排查、檢測(cè)、篩查與確證結(jié)合，形成信息排查-檢測(cè)-高分辨篩查優(yōu)化組合的檢測(cè)模式，優(yōu)化了非法添加成份檢測(cè)流程，提高了目標(biāo)成份檢測(cè)效率和檢測(cè)準(zhǔn)確性，取得良好效果。此外，還利用高分辨質(zhì)譜篩查技術(shù)，發(fā)現(xiàn)多個(gè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以外的非法添加成份，并建立了檢測(cè)方法。

3.1 信息排查

對(duì)疑似非法添加的樣品先進(jìn)行信息排查，列選可能添加成份的檢測(cè)方法（標(biāo)準(zhǔn)）。信息排查需要收集的信息主要包括以下幾種：①功效宣傳，將夸大功效宣傳的產(chǎn)品列為懷疑對(duì)象。②質(zhì)量公告或媒體報(bào)道，收集各地發(fā)布的監(jiān)督抽檢質(zhì)量信息，關(guān)注重點(diǎn)類別產(chǎn)品、通報(bào)過不合格產(chǎn)品的廠家信息，及媒體報(bào)道出現(xiàn)質(zhì)量問題的產(chǎn)品信息。③進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)交流或收集風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)反饋的信息。④快檢篩查，先進(jìn)行快篩試劑或試紙條篩查，其結(jié)果可為檢測(cè)項(xiàng)目的選擇提供參考。

3.2 常規(guī)檢測(cè)

常規(guī)檢測(cè)采用的技術(shù)一般為高效液相色譜法（HPLC）和高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC/MS）。目前針對(duì)常規(guī)的非法添加成份，例如激素、抗感染類藥物、抗組胺類藥物等常規(guī)檢測(cè)方法一般都能適用，詳見表2。

3.3 高分辨質(zhì)譜檢測(cè)

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中常用的HPLC和HPLC/MS 主要用于樣品中已知化合物的定性定量，而對(duì)未知的非法添加成份難以定性。高分辨質(zhì)譜技術(shù)因其高質(zhì)量精度、同位素豐度比，同時(shí)能快速采集一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜、自動(dòng)解析并與自建譜庫或商業(yè)化數(shù)據(jù)庫（如默克索引或chemindex 數(shù)據(jù)庫）進(jìn)行匹配搜索，可有效解決非法添加成份的定性篩查檢測(cè)問題。此外高分辨質(zhì)譜在全掃描的模式下也具有極高的靈敏度，在一次運(yùn)行中可實(shí)現(xiàn)幾百種甚至上千種物質(zhì)的檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)效率。目前，廣東省藥品檢驗(yàn)所自建的化妝品高通量篩查數(shù)據(jù)庫已收集了幾百個(gè)化合物信息，包含激素、抗生素等，可快速解決非法添加成份的定性篩查檢測(cè)問題，為監(jiān)督執(zhí)法提供技術(shù)支撐。

3.4 高分辨質(zhì)譜與常規(guī)檢測(cè)方法組合使用

3.4.1 高分辨質(zhì)譜確證

非法添加成份在發(fā)出常規(guī)檢測(cè)報(bào)告之前要求須經(jīng)過陽性結(jié)果確證程序。對(duì)于液相質(zhì)譜方法確證存在干擾的結(jié)果，可以借助高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法輔助確證，排除干擾影響，得到準(zhǔn)確結(jié)果。

3.4.2 高分辨質(zhì)譜識(shí)別

對(duì)比較復(fù)雜的樣品，按常規(guī)方法檢測(cè)因干擾而無法確定結(jié)果時(shí)，可以采用高分辨質(zhì)譜檢測(cè)識(shí)別。如發(fā)現(xiàn)非法添加成份信息，再通過適當(dāng)前處理，應(yīng)用常規(guī)檢測(cè)報(bào)告結(jié)果。

3.4.3 高分辨質(zhì)譜篩查

對(duì)疑似非法添加成份樣品，可用高分辨質(zhì)譜進(jìn)行篩查確證，初步鎖定未知化合物。如發(fā)現(xiàn)尚無法定檢測(cè)方法的非法添加成份，可通過研究，建立常規(guī)檢測(cè)方法（非標(biāo)準(zhǔn)方法）。

高分辨質(zhì)譜與常規(guī)檢測(cè)方法組合使用優(yōu)化流程，如圖1 所示，通過優(yōu)化最終形成了對(duì)疑似非法添加化妝品的信息排查-檢測(cè)-高分辨篩查優(yōu)化組合的檢測(cè)模式。

圖1 高分辨質(zhì)譜與常規(guī)監(jiān)測(cè)方法檢測(cè)組合使用優(yōu)化流程圖

4 應(yīng)用實(shí)例

4.1 信息排查發(fā)現(xiàn)萘甲唑啉

萘甲唑啉是一種擬腎上腺素類藥物，具有強(qiáng)烈收縮血管的作用，臨床上廣泛應(yīng)用于滴鼻劑等制劑中。廣東省藥品檢驗(yàn)所研究人員在獲知萘甲唑啉可用于減輕皮膚紅血絲的治療后，立即建立了檢測(cè)方法并將相關(guān)成份加入篩查數(shù)據(jù)庫。在多次祛痘類產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)中，廣東省藥品檢驗(yàn)所應(yīng)用該法檢出萘甲唑啉成份，并進(jìn)行了方法驗(yàn)證，最終總結(jié)路徑為：信息排查，建立方法，風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)非法添加，QTOF 篩查發(fā)現(xiàn)非法添加，常規(guī)檢測(cè)確證。

4.2 高分辨質(zhì)譜篩查發(fā)現(xiàn)甲基潑尼松

4.3 優(yōu)化檢測(cè)流程的成果

甲基潑尼松為一種中效型糖皮質(zhì)激素，作用與潑尼松龍相同，抗感染作用較強(qiáng)，其抗炎作用為潑尼松龍的3 倍。臨床上主要用于原發(fā)及繼發(fā)性腎上皮質(zhì)功能減退、皮膚病、紅斑狼瘡等許多疾病的治療，副作用低，效果好。甲基潑尼松目前尚無法定檢測(cè)方法，廣東省藥品檢驗(yàn)所通過應(yīng)用自建高分辨質(zhì)譜庫對(duì)風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)樣品進(jìn)行篩查檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)一款美白祛斑產(chǎn)品在與譜庫匹配時(shí)出現(xiàn)甲基潑尼松成份。研究人員將其按照完全未知物定性分析匹配譜庫數(shù)據(jù)處理，精確質(zhì)量數(shù)、同位素豐度比、二級(jí)質(zhì)譜、保留時(shí)間等信息進(jìn)行匹配度打分，確定其為甲基潑尼松?？偨Y(jié)其路徑為：QTOF 篩查發(fā)現(xiàn)非法添加，加入非法添加成份到激素檢測(cè)方法并進(jìn)行驗(yàn)證。

廣東省藥品檢驗(yàn)所采用高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法，在2020 年共完成祛痘類、祛斑美白類和嬰幼兒等化妝品500 多批次樣品篩查，發(fā)現(xiàn)了包括甲氧芐啶、夫西地酸、萘甲唑啉、甲基潑尼松、對(duì)乙酰氨基酚、克羅米通等9 個(gè)非標(biāo)準(zhǔn)成份（未發(fā)布法定檢測(cè)方法）；研發(fā)了4 個(gè)常規(guī)檢測(cè)方法（正在申請(qǐng)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法立項(xiàng)）。

5 結(jié)語

近年來，廣東省藥品檢驗(yàn)所在化妝品非法添加成份檢測(cè)方面取得了一些成就，對(duì)檢測(cè)流程優(yōu)化方面進(jìn)行了一些探索研究，但在對(duì)復(fù)雜體系未知物篩查確證方面還有兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)有待進(jìn)一步研究：一是通用型前處理技術(shù)。目前，相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)以采用固相萃取技術(shù)作為前處理方法已起到很好的效果，但面對(duì)復(fù)雜基質(zhì)體系，如防曬劑、染發(fā)劑等產(chǎn)品添加未知物需要進(jìn)行質(zhì)譜高分辨篩查禁限用組分時(shí)，由于干擾強(qiáng)、難度大，建議引入QuEChERS[10]等通用型前處理技術(shù)以開發(fā)出更合適的方法。二是進(jìn)一步豐富和完善高分辨質(zhì)譜篩查確證數(shù)據(jù)庫。用于非法添加篩查的數(shù)據(jù)庫應(yīng)具有一定的預(yù)見性，建議增加可能添加，監(jiān)管、監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)的新成份或同類成份及其同分異構(gòu)體的信息，不斷豐富數(shù)據(jù)庫內(nèi)容，梳理并合理分類，以方便篩查確證。

化妝品非法添加成份現(xiàn)象形勢(shì)復(fù)雜，刻意逃避監(jiān)管的新行為不斷出現(xiàn)且變幻莫測(cè)，增加了非法添加成份檢測(cè)的研究難度，要求監(jiān)管人員必須繼續(xù)努力，讓監(jiān)管跑在風(fēng)險(xiǎn)前面，全力保證人民群眾用妝安全。