宮頸癌手術(shù)患者FOXF2與凋亡基因表達的相關(guān)性及意義

謝加瓊 徐蕾 何蔚

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤性疾病之一，其惡性程度較高、符合手術(shù)指征的患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率不低[1,2]。積極尋找宮頸癌患者手術(shù)后復(fù)發(fā)的機制并降低復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率是目前臨床研究的重點之一。siRNA干擾叉頭框轉(zhuǎn)錄因子F2(FOXF2)是FOX轉(zhuǎn)錄因子家族的重要成員之一，發(fā)現(xiàn)其與胚胎及組織發(fā)育、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等相關(guān)，通過調(diào)節(jié)細胞極性而維持組織穩(wěn)態(tài)[3,4]，其在不少腫瘤組織中呈低表達并加快腫瘤發(fā)生發(fā)展。FOXF2與宮頸癌的研究也有部分開展，如細胞研究發(fā)現(xiàn)siRNA干擾FOXF2可促進SiHa細胞的體外轉(zhuǎn)移及增殖能力[5]，提示低表達的FOXF2促進宮頸癌進展。本次研究討論FOXF2與宮頸癌手術(shù)預(yù)后的關(guān)系，旨在為后續(xù)宮頸癌患者的預(yù)后早期評估及干預(yù)等提供新途徑。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年1月在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院和成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院接受手術(shù)治療的118例宮頸癌患者的組織標本為宮頸癌組，年齡38～72歲，平均(53.34±15.28)歲。同期100例宮頸息肉患者行息肉切除術(shù)并將其宮頸組織標本作為對照組，年齡37～67歲，平均(52.39±12.27)歲。2組患者的性別比、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。術(shù)中所有組織標本凍存于液氮罐中保存，術(shù)前告知患者相關(guān)事宜并簽署知情同意書，研究方案獲本院倫理委員會審核批準。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①宮頸癌病灶組織標本均術(shù)后病理證實為原發(fā)性宮頸癌；②術(shù)前未接受放化療等保守治療；③臨床資料完整且完成隨訪。

1.2.2 排除標準：①合并其他原發(fā)惡性腫瘤性疾??；②合并嚴重自身免疫性疾病者；③合并嚴重心肝腎功能不全者；④妊娠或者哺乳期女性。

1.3 qRT-PCR法測定宮頸組織中FOXF2與凋亡基因表達量 將病灶組織剪碎、碾磨并加入細胞裂解液，提取總RNA。參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明逆轉(zhuǎn)錄為互補cDNA，以U6為內(nèi)參設(shè)計引物、使用SYBR Green Master Mix試劑盒對目標基因引物在PCR儀96微孔板上進行擴增。引物序列如下：U6上游引物5’-CGCGCAACGGAATCCCA-3’，下游引物5’-GTGCAGG

GTCCGAGGT-3’； FOXF2上游引物5’-TCGAAGCTGA

CCTGAAGTG-3’，下游引物5’-TCAAGCTGCTGAGCTG

AG-3’；Caspase-3上游引物5’-CTAGCTAAGCTGAGCG

TGA-3’，下游引物5’-TCGAAGCTGACGTGAGTCGA-3’；Bax上游引物5’-TCGAAGCTAGCTGAGCTGA-3’， 下游引物5’-AGCTGAGCTTAGCGTAG-3’； Bcl-2上游引物5’-ACTGAGCGGATGCGGTAG-3’， 下游引物5’-TCGAATCGAGCTGGAATCG-3’。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5min→94℃變性30 s→58℃退火30 s，共38個循環(huán)。

1.4 預(yù)后隨訪 術(shù)后第2天開始對所有入組的宮頸癌患者進行長期隨訪，具體隨訪方式包括門診復(fù)診及電話，隨訪內(nèi)容包括B超、腫瘤標志物、宮頸檢查等，以2021年1月或者該日期前患者確診復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的時間作為隨訪終點，記錄患者的無病生存率(DFS)。

1.5 臨床資料收集 收集所有入組宮頸癌患者的臨床資料，包括年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、組織學(xué)分類、FIGO分期、分化程度、肌層浸潤、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

2 結(jié)果

2.1 2組組織中FOXF2及凋亡基因表達量比較 宮頸癌組病灶組織中FOXF2、Caspase-3、Bax mRNA的表達量低于對照組正常組織，Bcl-2 mRNA的表達量高于對照組正常組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 宮頸癌組、對照組組織中FOXF2及凋亡基因表達量比較

2.2 宮頸癌病灶組織中FOXF2及凋亡基因表達量的相關(guān)性分析 Pearson檢驗顯示，宮頸癌病灶組織中FOXF2 mRNA表達量與Caspase-3、Bax mRNA的表達量呈正相關(guān)(P<0.05)，與Bcl-2 mRNA的表達量呈負相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 FOXF2 mRNA與Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表達量的相關(guān)性

2.3 宮頸癌患者無病生存率與FOXF2表達的關(guān)系 118例宮頸癌患者隨訪期出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移36例并歸于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，其余82例歸于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組病灶組織中FOXF2 mRNA的表達量為(1.65±0.21)、未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組病灶組織中FOXF2 mRNA的表達量為(1.83±0.24)。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組病灶組織中FOXF2 mRNA的表達量低于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。根據(jù)所有宮頸癌患者病灶組織中FOXF2 mRNA表達量的中位數(shù)1.69，將其分為高FOXF2組、低FOXF2組各59例。高FOXF2組的中位無病生存時間為38個月、低FOXF2組的中位無病生存時間為32個月。Kplan-Meier生存曲線顯示，高FOXF2組患者的無病生存情況優(yōu)于低FOXF2組患者(P<0.05)。見圖1。

圖1 FOXF2表達水平與宮頸癌患者無病生存時間的關(guān)系

2.4 宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素分析 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組、未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組患者的年齡、月經(jīng)情況、腫瘤直徑、組織學(xué)分類的分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；FIGO分期、分化程度、肌層浸潤、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FOXF2表達量的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素分析 例

2.5 宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的COX回歸分析 以宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況作為終點事件(0=未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，1=復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移)，將單因素分析中具有差異的指標包括FIGO分期、分化程度、肌層浸潤、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FOXF2表達量納入COX回歸模型進行危險因素分析，結(jié)果顯示：FIGO分期Ⅲ期、低分化、肌層浸潤、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織中FOXF2表達量低表達是宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的COX回歸分析

3 討論

宮頸癌侵襲性較強，研究顯示存在盆腔轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高達70%[6,7]。FOXF2屬于間質(zhì)特異性轉(zhuǎn)錄因子，在泌尿道、消化道、呼吸道等器官高表達并參與細胞外基質(zhì)合成等多個生命過程，其在多個惡性腫瘤組織中均存在異常表達，如魯昌坤等[8]的研究發(fā)現(xiàn)FOXF2轉(zhuǎn)錄因子通過抑制p21Cip1 CDK調(diào)控早期胃癌能量代謝；王云檢等[9]指出miRNA-182可通過靶向調(diào)控FOXF2促進肝細胞癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。基礎(chǔ)研究初步明確FOXF2參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展[5]，文中檢測宮頸癌組織及良性宮頸組織中FOXF2及凋亡基因的表達情況，發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中FOXF2表達下調(diào)、與既往研究結(jié)論吻合；促凋亡基因Caspase-3、Bax表達下調(diào)而抗凋亡基因Bcl-2表達上調(diào)，這與惡性腫瘤細胞程序性凋亡進程受阻的特點吻合。相關(guān)性分析更指出，宮頸癌組織中FOXF2表達量與促凋亡基因表達量呈正相關(guān)，與抗凋亡基因表達量呈負相關(guān)，提示FOXF2基因表達下調(diào)可能通過減輕對凋亡基因的表達調(diào)控最終促進腫瘤進展。

宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況與其最終死亡結(jié)局密切相關(guān)，在分析術(shù)中宮頸癌組織FOXF2表達與患者無病生存情況的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXF2低表達宮頸癌患者的無病生存時間相對較短，提示FOXF2表達情況與宮頸癌患者的術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移間存在一定關(guān)系。宮頸癌患者的術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的多因素參與的過程，既往關(guān)于其復(fù)發(fā)危險因素的分析已經(jīng)開展較多，文中再次將包括宮頸癌組織FOXF2表達量在內(nèi)的臨床資料納入COX回歸模型，分析發(fā)現(xiàn)：組織中FOXF2表達量低表達、FIGO分期Ⅲ期、低分化、肌層浸潤、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素。FOXF2表達量對宮頸癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響與王慶偉等[10]的研究結(jié)果相似，其認為FOXF1在乳腺癌組織中低表達可能與患者預(yù)后有關(guān)。關(guān)于組織中FOXF2表達量低表達誘導(dǎo)宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的具體機制不明，Liu等[11]的研究指出FOXF2通過Wnt/β-catenin信號通路抑制TGF-β1誘導(dǎo)的人原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞纖維化。組織中低表達的FOXF2可能也通過上述相似途徑影響術(shù)后微小殘留癌細胞的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移并最終左右生存結(jié)局。He等[12]的研究顯示多種因素可調(diào)節(jié)FOXF2水平，調(diào)節(jié)FOXF2水平是治療腫瘤的理想化方法，關(guān)于FOXF2調(diào)控在后續(xù)宮頸癌治療及預(yù)后改善中的作用研究有待后續(xù)研究明確。FIGO分期、低分化、肌層浸潤、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征對宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響已在既往較多研究[13]中被明確，本文結(jié)果與其一致。

綜上所述，宮頸癌患者術(shù)中病灶組織中FOXF2低表達，可能通過影響凋亡基因表達而促進患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。FOXF2基因在后續(xù)宮頸癌預(yù)后優(yōu)化中的實踐價值有待更多研究明確。