肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 的表達(dá)及臨床意義

徐陽，范瑞

（河南省南陽市第一人民醫(yī)院病理科，河南 南陽 473000）

肺腺癌是我國(guó)臨床常見惡性腫瘤疾病， 病變進(jìn)展快，預(yù)后差。 文獻(xiàn)指出，惡性腫瘤最重要特點(diǎn)是侵襲周圍組織并在遠(yuǎn)處發(fā)生轉(zhuǎn)移， 此過程是一個(gè)多基因、 多階段性及多種轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控的結(jié)果，涉及一系列生理病理反應(yīng)，而腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、 惡性質(zhì)是導(dǎo)致肺腺癌患者錯(cuò)失治療時(shí)機(jī)及病死的主要原因[1-2]。 因此，分析肺腺癌病變進(jìn)展機(jī)制成為目前臨床研究關(guān)注的熱點(diǎn)。 環(huán)氧合酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2） 是由花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，廣泛分布于人體，在正常生理狀態(tài)下表達(dá)較少，但受到細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、癌基因等多種因素刺激后可快速合成并釋放， 進(jìn)而參與炎癥及腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[3]。 基質(zhì)金屬蛋白酶-7（Matrixmetalloproteinase，MMP-7）是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的一員，參與基質(zhì)降解過程，研究顯示， 腫瘤轉(zhuǎn)移屏障可在MMP-7 的作用下被破壞，最終促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)[4]。 上述研究均表明，COX-2、MMP-7 異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、 發(fā)展有關(guān)。 鑒于此， 本研究進(jìn)一步分析肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2017年1月至12月期間醫(yī)院收治并進(jìn)行手術(shù)治療的74 例肺腺癌患者病歷資料，其中男23 例，女51 例；年齡35～68 歲，平均（48.85±5.14）歲；高分化21 例、中分化32 例、低分化21 例；腫塊直徑＞3 cm 33 例，腫塊直徑≤3 cm 41 例。 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）通過細(xì)胞學(xué)及術(shù)后病理組織檢查確診為原發(fā)性肺腺癌；（2）術(shù)前均未接受化療、放療及其他抗腫瘤治療者；（3）臨床資料及術(shù)后組織病理學(xué)檢查結(jié)果完整。 排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他腫瘤類疾病者；（2）合并先天性肺疾病者。

1.2 研究方法

1.2.1 基線資料采集 查閱患者病歷， 采用本院自制基線資料調(diào)查量表，采集患者性別、年齡、病變位置、腫瘤直徑、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及浸潤(rùn)程度等臨床資料。

1.2.2 癌組織中COX-2、MMP-7 檢測(cè) 采用免疫組化法檢查。 取石蠟包埋的肺腺癌組織塊，常規(guī)切片脫蠟、脫水，加入檸檬酸緩沖液（pH=6.0）進(jìn)行高溫抗原修復(fù)，將0.3%過氧化氫溶液滴入，抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，分別使用兔抗人COX-2 單克隆抗體（北京中山金橋生物技術(shù)有限公司，稀釋比例為1:200）及兔抗人MMP-7 多克隆抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，稀釋比例為1:160）作為一抗，在4 ℃的環(huán)境下孵育過夜，二抗與免疫組化復(fù)合物在37 ℃的環(huán)境下各孵育30 min，以磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline，PBS）代替一抗并作為陰性對(duì)照，而后完成DNA 染色、蘇木精復(fù)染、乙醇脫水及中性樹膠封片。

1.2.3 結(jié)果判定 在顯微鏡下隨機(jī)選取5 個(gè)高倍視野（放大倍數(shù)400 倍）觀察切片，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞， 判讀染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)。 COX-2 及MMP-7 主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)， 陽性范圍為淡黃色至棕黃色顆粒，0 分為無著色，1 分為淺黃色，2 分為黃棕色，3 分為棕褐色； 陽性細(xì)胞百分比=陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%， 陽性細(xì)胞百分比≤25%記1 分， 陽性細(xì)胞百分比25%～50%記2分，陽性細(xì)胞百分比51%～75%記3 分，陽性細(xì)胞百分比＞75%記4 分。 COX-2、MMP-7 蛋白陽性表達(dá)判定方法：染色強(qiáng)度分值與陽性細(xì)胞占比乘積＞2。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)， 采用Shapiro-Wilk 正態(tài)分布檢驗(yàn)計(jì)量資料正態(tài)性，±s 表示符合正態(tài)分布計(jì)量資料；n（%）表示計(jì)數(shù)資料，用χ2檢驗(yàn)；采用logistic 回歸分析肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 的表達(dá)與各臨床特征的關(guān)系；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 表達(dá)情況 免疫組化檢查結(jié)果顯示，COX-2、MMP-7 主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中， 在肺腺癌組織中陽性表達(dá)率分別為68.92%（51/74），45.95%（34/74），見圖1～2。

圖1 MMP-7 在肺腺癌組織中的表達(dá)（×400）

2.2 不同臨床特征的肺腺癌患者癌組織中COX-2及MMP-7 表達(dá)情況 不同性別、年齡段、腫瘤直徑及分化程度的肺腺癌患者癌組織中COX-2、MMP-7 陽性表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；TNMⅢ-Ⅳ分期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度T3-T4 期的肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 陽性表達(dá)率高于TNMⅠ-Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度T1-T2 期的肺腺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表1。

圖2 COX2 在肺腺癌組織中的陽性表達(dá)（×400）

表1 肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 表達(dá)與臨床特征

2.3 肺腺癌組織中COX-2 及MMP-7 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析 將肺腺癌組織中COX-2 及MMP-7 陽性表達(dá)作為自變量，將TNM 分期（0=Ⅰ-Ⅱ期，1=Ⅲ-Ⅳ期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（0=無，1=有）及浸潤(rùn)程度（0=T1-T2 期，1=T3-T4 期）作為因變量，經(jīng)logistic 回歸分析結(jié)果顯示， 肺腺癌組織中COX-2及MMP-7 陽性表達(dá)與TN 分期、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度密切相關(guān)（OR＞1，P＜0.05）。 見表2。

表2 肺腺癌組織中COX-2 及MMP-7 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析

3 討論

隨著近年來手術(shù)、化療、放療及靶向治療的不斷改進(jìn)，肺腺癌患者臨床治療取得較好效果，但多數(shù)患者治療后不可避免地出現(xiàn)復(fù)發(fā)及進(jìn)展， 嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。 因此，了解與肺腺癌進(jìn)展相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)對(duì)指導(dǎo)臨床治療肺腺癌具有重要意義。

COX-2 是一種誘導(dǎo)型酶，屬于膜結(jié)合蛋白，參與人體多種病理及生理過程， 多在腎臟組織及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)， 在大多數(shù)正常細(xì)胞組織中通常不表達(dá)或低濃度表達(dá)， 但在炎癥及腫瘤組織中表達(dá)升高，已有研究證實(shí)，COX-2 可能是潛在的癌基因，且與腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展關(guān)系密切[5-6]。MMP-7是基質(zhì)蛋白酶家族中最小的分子， 主要由巨噬細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞分泌，具有一定的底物特異性，主要作用于細(xì)胞基質(zhì)、細(xì)胞膜及細(xì)胞膜表面分子，多在人體正常上皮細(xì)胞中表達(dá)，但活性較低[7]。 文獻(xiàn)報(bào)道[8]，MMP-7 過表達(dá)多發(fā)生于各種上皮來源的間質(zhì)腫瘤及腫瘤細(xì)胞，與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、浸潤(rùn)等密切相關(guān)。 結(jié)合上述COX-2、MMP-7 作用機(jī)制， 考慮COX-2、MMP-7 異常表達(dá)與肺腺癌腫瘤進(jìn)展相關(guān)。本研究觀察了不同臨床病理特征的肺腺癌患者COX-2、MMP-7 表達(dá)情況，結(jié)果顯示，不同TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度的肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 陽性表達(dá)具有差異性， 提示COX-2、MMP-7 可能與肺腺癌腫瘤分期、 轉(zhuǎn)移及惡性程度有關(guān)。究其原因：COX-2 高表達(dá)可刺激血管因子生成， 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖分化及新生腫瘤血管的形成，不僅增加腫瘤惡性程度且促進(jìn)腫瘤進(jìn)一步生長(zhǎng)及對(duì)周邊組織的浸潤(rùn)，增加腫瘤分期及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[9]。同時(shí)，COX-2 可促進(jìn)中性白細(xì)胞A549 的增殖，增加白細(xì)胞A549 與腫瘤細(xì)胞作用，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，而大量炎癥因子的釋放，可發(fā)揮誘導(dǎo)和維護(hù)腫瘤血管作用，促進(jìn)腫瘤新生血管生成，使腫瘤細(xì)胞增殖，增加癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力[10-11]。 此外，COX-2 高表達(dá)的同時(shí)前列腺素E2 的釋放量增加，而前列腺素E2 可提高細(xì)胞內(nèi)cAMP 水平，抑制巨噬細(xì)胞、T 殺傷細(xì)胞活性，抑制機(jī)體免疫，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的發(fā)生逃逸，導(dǎo)致腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移[12-13]。MMP-7 可通過降解腫瘤細(xì)胞表面的FasL， 抑制Fas 與FasL 的結(jié)合，降低腫瘤細(xì)胞凋亡的敏感性，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，使腫瘤惡性程度增加[14]。MMP-7 可通過直接促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性， 誘導(dǎo)肺腺癌新生血管生成，不僅增加腫瘤惡性程度，且增加組織浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[15]。 MMP-7 可酶解機(jī)體中的鏈接組織生長(zhǎng)因子， 而鏈接組織生長(zhǎng)因子具有抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分泌作用，因此MMP-7 高表達(dá)可激活成纖維細(xì)胞分泌大量?jī)?nèi)皮生長(zhǎng)因子， 增強(qiáng)血管生長(zhǎng)因子活性，降低血管生成抑制因子活性，致使肺腺癌新生血管的生成，為腫瘤提供豐富的血供，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，逐漸侵襲周圍組織器官，促進(jìn)肺腺癌進(jìn)展[16-17]。 進(jìn)一步經(jīng)logistic 回歸分析結(jié)果顯示，肺腺癌組織中COX-2 及MMP-7 陽性表達(dá)與TNM分期、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度密切相關(guān)。 提示COX-2 及MMP-7 參與肺腺癌的進(jìn)展、 轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)。 這進(jìn)一步說明COX-2、MMP-7 高表達(dá)與肺腺癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及惡性程度密切相關(guān)，可為臨床肺腺癌的綜合治療提供一個(gè)新的靶點(diǎn)，以抑制腫瘤細(xì)胞增殖分化，降低復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，更好地改善患者預(yù)后。

綜上所述， 肺腺癌組織中COX-2、MMP-7 陽性表達(dá)率較高，與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度密切相關(guān)， 可為臨床肺腺癌綜合治療方案的制定提供依據(jù)。