兩種增色劑對阿里雌魚生長及體色調(diào)控的研究①

姜巨峰， 周勇， 史東杰， 劉肖蓮，劉克明， 李春艷， 韓現(xiàn)芹， 牟希東， 宋紅梅

1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部休閑漁業(yè)重點實驗室，廣州 510380； 2.天津市水產(chǎn)研究所/天津市觀賞魚技術(shù)工程中心，天津 300221； 3.北京市農(nóng)林科學(xué)院，北京 100068

觀賞魚已成為繼狗、貓日常消費的世界第三大寵物．阿里魚(Sciaenochromisfryeri)是觀賞魚市場上較為暢銷的品種，屬硬骨魚綱，鱸形目，慈鯛科，鬼麗魚屬．阿里魚雄魚擁有艷麗的金屬藍(lán)體色，觀賞價值和經(jīng)濟價值大，而雌魚和幼魚大多呈現(xiàn)單調(diào)的灰色，觀賞價值和經(jīng)濟價值?。?/p>

目前國內(nèi)外學(xué)者對阿里魚的研究較少，僅見繁養(yǎng)技術(shù)、營養(yǎng)等方面的報道[1-4]，而對其增色技術(shù)尚未見相關(guān)報道．雄性激素在促進(jìn)魚類增色研究中的應(yīng)用較為廣泛，目前已見在斑馬魚(Brachydaniorerio)、劍尾魚(Xiphophorushelleri)、珍珠瑪麗魚(Mollienisiavelifera)等多種魚類[5-12]增色方面進(jìn)行了研究，應(yīng)用最多、最廣泛的雄性激素是甲基睪酮(Methyltestosterone)．近些年來，甲基睪酮在動物食品中屬于禁用藥．在觀賞魚養(yǎng)殖行業(yè)中，由于養(yǎng)殖出的觀賞魚只是用來欣賞而不食用，在養(yǎng)殖水環(huán)境可控可安全處理的前提下，養(yǎng)殖戶由于經(jīng)濟效益的驅(qū)使，常使用甲基睪酮對觀賞魚進(jìn)行增色出售，如果管控不好，會對環(huán)境造成污染．在當(dāng)前環(huán)保要求及養(yǎng)殖尾水處理達(dá)標(biāo)的雙重標(biāo)準(zhǔn)下，探討甲基睪酮作為增色劑的替代品意義重大．雄烯二酮(Androstenedione)、睪酮(Testosterone)也屬于雄性激素，可以作為藥物或增色劑應(yīng)用于水產(chǎn)動物中，但應(yīng)用其對水產(chǎn)動物增色的技術(shù)研究報道較少．本文以阿里雌魚為研究對象，通過在飼料中分別添加不同劑量的雄烯二酮和睪酮配置功能飼料，探討不同功能飼料對阿里雌魚生長及體色的影響，旨在確定出阿里雌魚增色的適宜增色劑和添加量，同時也為篩選出甲基睪酮增色劑安全有效的替代品提供參考依據(jù)．

1 材料與方法

1.1 阿里增色飼料

試驗飼料以阿里魚養(yǎng)殖普通飼料為基礎(chǔ)飼料(表1)，分別配置含有100，200，300，400 mg/kg雄烯二酮(標(biāo)記為A100，A200，A300，A400組)和100，200，300，400 mg/kg睪酮(標(biāo)記為T100，T200，T300，T400組)8個濃度梯度的試驗飼料．分別稱取一定量的雄烯二酮和睪酮溶解在95%的乙醇中，配制成10 mg/mL的母液，4 ℃保存?zhèn)溆茫渲骑暳蠒r使用95%的乙醇將母液稀釋至所用濃度即可．激素飼料配制參照El-Greisy等[13]進(jìn)行，采用乙醇噴霧法均勻噴灑在飼料上，50 ℃烘干6 h，對照組飼料使用95%乙醇做同樣處理．所有飼料烘干后，裝袋放入4 ℃冰箱備用，飼料的粒徑為2 mm．

1.2 增色試驗

增色試驗在天津市某養(yǎng)殖場進(jìn)行．以阿里雌魚為試驗對象，隨機挑選810尾規(guī)格一致、游動迅速、鰭條完整、110日齡的健康阿里雌魚放入水族缸(75 cm×60 cm×28 cm； LED燈，30 W，L/D=14∶10)中，試驗共分為9組，每組3個平行，每個平行30尾魚．在增色試驗開始前，先用普通飼料投喂1周試驗魚，待魚攝食穩(wěn)定后，隨機從各缸中取樣，測定魚的初始全長、體長、體質(zhì)量后，試驗組開始投喂增色飼料，對照組繼續(xù)投喂普通飼料開始增色試驗，阿里雌魚初始體質(zhì)量為5.78±1.05 g．養(yǎng)殖水溫為22～24 ℃，pH值為7.8～8.0，每天投喂2次，9：00和16:00各飽食投喂1次，持續(xù)投喂試驗飼料8周； 8周以后試驗組改投普通飼料，每天正常投喂，觀察試驗魚的體色變化情況，再持續(xù)養(yǎng)殖4周．在投喂飼料時，堅持少量多次的原則，魚的攝食速度很快，基本上在3 s內(nèi)飼料被攝食完畢，因此飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)不會溶失到養(yǎng)殖用水中造成水體環(huán)境的污染．當(dāng)魚吃飽后，及時將剩余漂在水面上的飼料撈出回收．

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)分析

1.3 樣品測定

在試驗第0，2，4，6，8，10，12周時，分別于每缸中隨機各取10尾魚，用0.1 mL/L濃度的丁香油將其麻醉，濾紙吸干其體表水分后，每尾魚均按頭部朝左的順序放置，然后快速用色度色差儀(Konica Minolta CM-700 d，日本)測定其體表色度色差值，測定部位為腹部的前部、中部和后部，測定數(shù)據(jù)取平均值并與阿里真雄魚的標(biāo)準(zhǔn)體表色度值(取13尾阿里真雄魚進(jìn)行測定，分別測定每尾魚腹部的前部、中部和后部3個位置并取平均值，得出標(biāo)準(zhǔn)魚色度值： 明亮度值L*為35.62±3.04； 紅綠色度值a*為0.06±1.79； 黃藍(lán)度值b*為-18.99±2.79)進(jìn)行比較，測出總色差值(△E*ab)和黃藍(lán)度值(b*)，同時測其全長、體長、體質(zhì)量指標(biāo)．待測畢后，立即將魚放入充氧的潔凈水桶中進(jìn)行蘇醒，待魚恢復(fù)正常后，將魚放回到原缸中繼續(xù)養(yǎng)殖．

1.4 數(shù)據(jù)計算與分析

阿里雌魚特定生長率(SGR)[14]計算公式如下：

SGR= (lnWt-lnW0)/t×100%

式中，Wt為試驗魚終末體質(zhì)量(g)；W0為試驗魚初始體質(zhì)量(g)；t為試驗天數(shù)(d)．

2 結(jié)果

2.1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚生長及成活率的影響

從表2可以看出，不同濃度的雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚的成活率沒有影響，均為100%．同等增色劑濃度下，雄烯二酮對阿里雌魚增質(zhì)量效率優(yōu)于睪酮組，其中A200組終質(zhì)量顯著高于T200組(p<0.05)．同時，隨著兩種增色劑添加量的增加，阿里雌魚終質(zhì)量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢．A200組的阿里雌魚SGR最高，為0.39，顯著高于T100，T200，T400組和對照組(p<0.05)．從表2 可知，雄烯二酮組中雖然A200組的SGR最高，但與其余各組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義．從生長的角度來看，雄烯二酮的適宜添加量為100 mg/kg； 睪酮組中T300組的SGR最高，但與其余各組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，從生長的角度來看，睪酮的適宜添加量為100 mg/kg．

表2 飼料中雄烯二酮、睪酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)對阿里雌魚生長及成活率的影響

2.2 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚體色的影響

2.2.1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚色差值(△E*ab)的影響

△E*ab值代表測定魚體色色度值與標(biāo)準(zhǔn)魚的差距，其值越小說明其測定色度值與標(biāo)準(zhǔn)體色值的差異越小．從表3和圖1可以看出，雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚具有增色效應(yīng)，其與標(biāo)準(zhǔn)魚的色差值隨著增色時間的延長而逐漸變?。性囼灲M色差值均顯著低于對照組(p<0.05)，雄烯二酮處理組增色效果優(yōu)于睪酮組．在投喂增色飼料8周時，A300，A400組的色差值與T300組的色差值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但均顯著低于其余各組(p<0.05)； T300，T400組的色差值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但均顯著低于T100，T200，A100，A200組及對照組(p<0.05)．

表3 雄烯二酮、睪酮對阿里增色效果(△E*ab)

投喂8周增色飼料后改投普通飼料，在第10周時，除A100和A400組外，各處理組色差值較第8周時色差值均有所下降．從雄烯二酮和睪酮各處理組來看，A300，A400組和T300，T400組色差值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但均顯著低于其余各組(p<0.05)．

在第12周時，除對照組，A100，T100，T200組外，其余處理組的色差值均高于第10周時各處理組的色差值．從雄烯二酮和睪酮各處理組來看，A300，A400組和T400組的色差值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但均顯著低于A100，A200，T100，T200組及對照組的色差值(p<0.05)； T300組色差值與T400和A300組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)．

2.2.2 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚黃藍(lán)色度值(b*)的影響

b*值表示黃藍(lán)度值，+表示偏黃，-表示偏藍(lán)．從表4和圖1可以看出，阿里雌魚體表b*值隨著增色時間的延長，其b*值呈現(xiàn)逐漸減小的趨勢，所有處理組均顯著低于對照組(p<0.05)．在增色8周時，A400組體表b*值最低，為-12.97，與A300處理組體表b*值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但顯著低于其余各組(p<0.05)； T300組體表b*值為-10.03，與A300，T400組體表b*值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但顯著低于A100，A200，T100，T200組及對照組體表b*值(p<0.05)．

表4 飼料中雄烯二酮、睪酮對阿里增色效果(b*值)

圖1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚體色的影響

投喂8周增色飼料后改投普通飼料，試驗第10周時，除A100，A400組體表b*值較第8周時高一些，其余各處理組阿里雌魚體表b*值均較第8周時低，阿里魚體表藍(lán)色呈現(xiàn)出更深的趨勢； A300組體表b*值為-13.23，與A400組體表b*值(-12.73)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但顯著低于其余各處理組(p< 0.05)； T300，T400和A200組體表b*值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但顯著低于A100，T100組及對照組(p<0.05)； T200，A200組體表b*值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)．

第12周時，所有試驗組體表b*值均顯著低于對照組(p<0.05)．A300，A400，T300，T400組體表b*值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但顯著低于A100，A200和T100組(p<0.05)．與第10周相比，第12周除A100，T200組及對照組體表b*值低于第10周外，其余各組體表b*值均比第10周時高．

3 討論

3.1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚生長及成活率影響分析

適宜濃度的雄性激素能促進(jìn)魚類自身蛋白質(zhì)的合成，提高魚體內(nèi)的生長激素水平，從而提高魚類的生長速度．本研究中，A100，A200，A300，A400組和T300組的SGR均顯著高于對照組(p<0.05)，說明雄烯二酮和睪酮對阿里雌魚均具有促生長作用．這與用甲基睪酮處理馬拉瓜麗體魚(Cichlasomamanaguense)[11]、鯉魚(Cyprinuscarpio)[12]、金魚[12](Carassiusauratus)、櫻桃鲃[15](Barbustitteya)雌魚、吉富羅非魚[16](Oreochromisniloticus)能夠促使其生長速度加快的結(jié)論一致，表明雄烯二酮和睪酮在促進(jìn)魚類生長上與甲基睪酮有相同的作用效果．本研究還發(fā)現(xiàn)，從兩種增色劑的SGR來看，相同濃度組的雄烯二酮SGR比睪酮組高，這說明雄烯二酮比睪酮對阿里雌魚促生長效果更好，這可能是由于雄烯二酮是睪酮的激素原，在生理代謝過程中可直接轉(zhuǎn)換為睪酮，同時還產(chǎn)生一些雌激素和一些活性物質(zhì)，對促進(jìn)魚體內(nèi)生長因子的表達(dá)有促進(jìn)作用．

從雄烯二酮、睪酮各組別的SGR來看，其數(shù)值在一定程度上均呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢，這說明雄烯二酮和睪酮對阿里雌魚促生長均具有劑量效應(yīng)，高濃度組的雄烯二酮、睪酮有抑制阿里雌魚生長的趨勢，這與高濃度激素抑制黑鱸[17](Dicentrarchuslabrax)、大口黑鱸[18](Micropterussalmoides)、尼羅非鯽[19](Oreochromisniloticus)、半滑舌鰨[20](Cynoglossussemilaevis)生長的研究結(jié)果相一致，但與雄性激素對庸鰈[21](HippoglossushippoglossusL.)生長速度沒有明顯影響和雄性激素對黃姑魚[6]的生長有顯著抑制作用的研究結(jié)果不同．這可能是由于魚的種類特異性不同所致，也可能是因為魚類不同生長階段對雄性激素的耐受性和吸收轉(zhuǎn)化利用能力不同有關(guān)．雄性激素對魚類生長性能的影響機制是多方面的．一方面可能是因為雄性激素通過影響水產(chǎn)動物的攝食與消化系統(tǒng)，從而影響其生長性狀； 另一方面可能是因為魚類攝食雄性激素后，體內(nèi)與生長相關(guān)的激素及其受體濃度發(fā)生了改變，從而影響魚類的生長速度．當(dāng)激素濃度在適宜范圍內(nèi)時對魚類成活率無顯著影響，但當(dāng)激素濃度超過某個閾值后，會導(dǎo)致魚類的成活率顯著降低．17α-MT 對白斑狗魚[22](Esoxlucius)有顯著致死效應(yīng)； 用2 μg/L的辛基酚處理日本青鏘[23](Oryziaslatipes)時，死亡率升高20%～30%．本研究飼料中添加雄烯二酮或睪酮對阿里雌魚的成活率沒有影響，這與用雄性激素處理馬拉瓜麗體魚[12]和櫻桃鲃[15]的研究結(jié)論一致．這說明雄烯二酮、睪酮各處理組濃度在阿里雌魚的耐受范圍內(nèi)．

3.2 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚體色調(diào)控的比較分析

在自然界中，一般雄魚較雌魚艷麗，因此也更具有觀賞價值和經(jīng)濟價值．10 mg/kg的甲基睪酮對5月齡的珍珠瑪麗魚[24](Mollienesiavelifera)的體色沒有作用，但能使3月齡的紅劍尾魚[24](Xiphophorushelleri)體色增色，這可能是由于5月齡的珍珠瑪麗魚性腺已較成熟或者投喂的甲基睪酮時間較短、劑量較小的緣故； 30 mg/kg以上的17α-MT處理50日齡的中華鳑鲏[10](Rhodeussinensis)，28 d后體色明顯開始起效； 應(yīng)用17α-MT 處理紅劍尾魚[9，24](Xiphophoroushelleri) 、瑪麗魚[25](MollienesiaLatipinnaLeSueur)以及紅斑馬魚[26](Brachydaniorerio)時，其體色明顯更加艷麗．本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加適量的雄烯二酮或睪酮，可使阿里雌魚體色逐漸呈現(xiàn)雄魚的金屬藍(lán)體色，且雄烯二酮比睪酮增色效果更好．投喂增色飼料8周時，A300組與A400組和T300組的色差值(ΔE*ab)和黃藍(lán)度值(b*)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，但顯著低于其余各組(p<0.05)．綜合養(yǎng)殖成本和增色效果等因素，認(rèn)為阿里雌魚最佳增色劑為雄烯二酮，其適宜添加量為300 mg/kg．

本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)停用增色飼料后的一段時間內(nèi)，魚體的顏色呈現(xiàn)逐漸加深的趨勢，這可能是由于魚類吸收的雄烯二酮或睪酮在體內(nèi)逐漸富集，后期通過代謝得以全部釋放，所以在改投普通飼料后前一段時間里，阿里魚呈現(xiàn)出更深的金屬藍(lán)體色，而到后期金屬藍(lán)體色有逐漸變淺的趨勢，表明外源雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚具有適應(yīng)性反應(yīng)，為了使阿里魚呈現(xiàn)穩(wěn)定的金屬藍(lán)體色，在實際養(yǎng)殖過程中需要定期投喂增色飼料．在本研究中，A300，A400組阿里魚改投普通飼料后4周中仍然呈現(xiàn)出較深的金屬藍(lán)體色，這可能是由于阿里雌魚經(jīng)過8周增色后已雄性化，也可能尚未完全雄性化但體內(nèi)吸收的增色劑還沒有代謝完全的原因，具體機理還需進(jìn)一步研究確定．

觀賞魚的觀賞價值除體型以外，體色是最重要的因素．影響魚體色變化的原因是多方面的，內(nèi)在的原因主要受有物種的特性和基因的影響，如麥穗魚[27](Pseudorasboraparva)在生殖期體色較平時呈現(xiàn)更加鮮艷的色彩； 外在的原因主要受養(yǎng)殖水環(huán)境和攝食的飼料組成的影響，如斑鱖[27](Sinipercascherzeri)可以根據(jù)光照強度的變化而變化，飼料中添加蝦青素、微藻等物質(zhì)[14，28-29]可以有效增加人工養(yǎng)殖魚類的體色．微藻對環(huán)境雄激素也有顯著的富集和降解作用[30]，在飼料中適量添加雄激素或含有雄激素的微藻等介質(zhì)，可以促使雌魚呈現(xiàn)出雄魚一樣鮮艷的體色．因此，研究如何有效在飼料中添加揚色成分，改善人工養(yǎng)殖條件下觀賞魚的外觀色彩，是觀賞魚研究和養(yǎng)殖從業(yè)者努力的方向[15]．

3.3 阿里增色魚與真雄魚顏色差異的比較分析

從本研究可以看出，飼料中添加雄烯二酮、睪酮投喂阿里雌魚后，其體色能夠呈現(xiàn)出金屬藍(lán)色，觀賞價值和經(jīng)濟價值得到了提升，但與阿里真雄魚相比，用雄烯二酮或睪酮增色后的阿里雌魚其色差值(△E*ab)和黃藍(lán)度值(b*)還有一定的差距．這可能與魚的種類吸收利用雄烯二酮、睪酮的特異性有關(guān)，也可能與養(yǎng)殖的具體光照和溫度差異有關(guān)，具體原因還有待進(jìn)一步研究．

4 結(jié)論

飼料中添加雄烯二酮、睪酮均可促使阿里雌魚生長速度加快，并使其呈現(xiàn)雄魚的金屬藍(lán)體色，雄烯二酮較睪酮促生長、增色效果好； 飼料中雄烯二酮的適宜添加量為300 mg/kg，增色8周后的阿里魚體色能夠穩(wěn)定4周．