分散固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物

楊 霄, 萬譯文, 黃華偉, 索紋紋, 肖 維, 李小玲*

(1. 湖南省水產(chǎn)科學(xué)研究所, 湖南 長沙 410153; 2. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(長沙), 湖南 長沙 410153)

硝基咪唑類藥物(nitromidazoles, NMZs)是一種具有5-硝基取代咪唑雜環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物,常見的包括甲硝唑(metronidazole, MNZ)、地美硝唑(dimetridazole, DMZ)、洛硝噠唑(ronidazole, RNZ)、替硝唑(tinidazole, TNZ)等。NMZs對原生動物和厭氧菌引起的某些疾病具有治療作用,在水產(chǎn)養(yǎng)殖中被用于預(yù)防和治療寄生蟲感染[1,2]。NMZs被過量施用于水產(chǎn)動物后,原藥可能在水產(chǎn)品中殘留。同時,原藥在生物體內(nèi)代謝迅速,其代謝產(chǎn)物為羥基化產(chǎn)物,主要包括羥基甲硝唑(MNZOH, MNZ的代謝物)和羥基二甲硝咪唑(HMMNI, DMZ和RNZ共同的代謝物)。NMZs具有潛在的致癌性、誘變性和遺傳毒性,其代謝物由于保留了基本的咪唑環(huán)也具有類似的毒性[1,3,4]。該類藥物濫用后易產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性,其在動物源食品中的殘留對食品安全構(gòu)成威脅。苯二氮卓類藥物(benzodiazepines, BZDs)大多是1,4-苯并二氮卓的衍生物,其基本結(jié)構(gòu)含有兩個苯環(huán)和一個七原子雜環(huán)。BZDs屬于第二代鎮(zhèn)靜安眠藥,臨床上常用的有20多種,具有鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮、抗驚厥、肌肉松弛和安定等多種藥理作用。近年來,一些養(yǎng)殖戶或商販為了保持水產(chǎn)品的鮮活狀態(tài),在水產(chǎn)動物捕撈和運輸過程中非法使用地西泮等苯二氮卓類藥物,造成其在水產(chǎn)品中殘留,嚴(yán)重危害人體健康。為控制NMZs和BZDs在動物源性食品中的殘留,我國、歐盟和美國對以上兩類藥物的使用均進(jìn)行了限定。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250號規(guī)定洛硝達(dá)唑和替硝唑在食品動物中禁止使用。同時,我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》(GB 31650-2019)規(guī)定地美硝唑、甲硝唑和地西泮允許作治療用,但不得在動物性食品中檢出。歐盟將甲硝唑、地美硝唑和洛硝噠唑列入食品動物禁用化合物清單,對苯二氮卓類鎮(zhèn)靜劑推出了限量標(biāo)準(zhǔn)[5,6]。美國禁止在食品動物中使用硝基咪唑類藥物[7]。因此,為了進(jìn)一步加強水產(chǎn)品質(zhì)量安全問題的監(jiān)管,開發(fā)簡單、靈敏、快速測定水產(chǎn)品中硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物的檢測方法顯得十分必要。

目前,檢測NMZs或BZDs的方法主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)[8,9]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)[10,11]、高效液相色譜法(HPLC)[12,13]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[14-19]。酶聯(lián)免疫法適用于批量樣品快速篩查,檢測結(jié)果需要用其他方法確證;GC-MS一般需要衍生化,操作繁瑣、耗時;HPLC靈敏度較低,對多組分化合物同時測定時分析時間長且易受雜質(zhì)干擾。LC-MS/MS靈敏度高,選擇性好,抗干擾能力強,適用于對基質(zhì)復(fù)雜樣品中多組分獸藥殘留的定性、定量檢測。水產(chǎn)品種類繁多,基質(zhì)較為復(fù)雜,含有較多的蛋白質(zhì)、脂肪和色素等成分。檢測水產(chǎn)品中NMZs和BZDs殘留的關(guān)鍵之一是樣品前處理過程必須充分地減少基質(zhì)對待測目標(biāo)物的干擾。當(dāng)前國內(nèi)外尚未發(fā)現(xiàn)同時檢測NMZs和BZDs的文獻(xiàn)報道,已有的研究報道僅見針對單一藥物的檢測,樣品前處理主要采用固相萃取技術(shù)(solid-phase extraction, SPE)[13,17,18,20]或分散固相萃取技術(shù)(dispersive solid-phase extraction, dSPE)[21,22]進(jìn)行富集和凈化。SPE是一種應(yīng)用于樣品前處理的經(jīng)典萃取技術(shù),但也存在萃取裝置、耗材成本高,萃取過程繁瑣耗時,萃取吸附劑填料選擇范圍小等缺點[23]。dSPE是一種簡單、高效、快速的前處理技術(shù),近年來在動物源食品中NMZs或BZDs多殘留檢測中得到了較為廣泛的關(guān)注和應(yīng)用[21,22,24,25]。

本研究采用分散固相萃取技術(shù),結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UHPLC-MS/MS),建立了一種同時測定水產(chǎn)品中5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物殘留的方法。該方法操作簡單高效,靈敏度高,回收率好,適用于大批量樣品的快速檢測,可為水產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)監(jiān)管部門同時監(jiān)控水產(chǎn)品中硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物殘留提供技術(shù)支持。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Triple Quad 5500+超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國SCIEX公司);超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);高速冷凍離心機(美國Thermo Fisher Scientific公司);渦旋混勻器(美國Scilogex公司);氮吹儀(美國Organomation公司);中沃超純水儀(中沃水務(wù)環(huán)保科技有限公司); Kinetex F5色譜柱(100 mm×3.0 mm, 2.6 μm;美國Phenomenex公司)。

甲硝唑(純度≥99.8%, CAS號:443-48-1)、地美硝唑(純度≥99.5%, CAS號:551-92-8)、洛硝達(dá)唑(純度≥99.1%, CAS號:7681-76-7)、羥基甲硝唑(純度≥99.5%, CAS號:4812-40-2)、羥基二甲硝咪唑(純度≥99.5%, CAS號:936-05-0)均購自德國Dr. Ehrenstorfer公司;地西泮(1 mg/mL, CAS號:439-14-5)、硝西泮(1 mg/mL, CAS號:146-22-5)、氯硝西泮(1 mg/mL, CAS號:1622-61-3)、奧沙西泮(1 mg/mL, CAS號:604-75-1)、氟西泮(1 mg/mL, CAS號:17617-23-1)、氯氮卓(1 mg/mL, CAS號:58-25-3)均購自美國Sigma-Aldrich公司;甲醇、乙腈(色譜純,德國Merck公司);甲酸(LC-MS級,美國Sigma公司);氯化鈉、無水硫酸鈉(分析純,上海國藥集團(tuán)股份有限公司);十八烷基鍵合硅膠吸附劑(C18, 40～63 μm)、N-丙基乙二胺(PSA, 40～63 μm)吸附劑(上海安譜實驗科技有限公司);實驗用水為超純水(18.25 MΩ·cm)。

1.2 樣品處理

1.2.1樣品采集與制備

鯽魚、鳊魚、鯉魚、草魚、鰱魚、烏鱧、對蝦、大黃魚等水產(chǎn)品購自長沙市水渡河農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場。按照《水產(chǎn)品抽樣規(guī)范》(GB/T 30891-2014)附錄B的要求進(jìn)行樣品的制備,制備好的樣品于-18 ℃冷凍保存,備用。

1.2.2提取

稱取2.0 g (±0.02 g)試樣于50 mL離心管中,加入10 mL 1%(v/v)氨水乙腈、1 g氯化鈉、3 g無水硫酸鈉,渦旋混勻1 min,超聲提取10 min, 8 000 r/min離心5 min。收集上清液于另一50 mL離心管中。殘渣加入10 mL 1%(v/v)氨水乙腈重復(fù)提取一次,合并兩次上清液,待凈化。

1.2.3凈化

準(zhǔn)確移取10 mL提取液至裝有QuEChERS吸附劑(50 mg PSA、30 mg C18)的15 mL離心管中,渦旋混勻1 min, 10 000 r/min離心8 min。吸取全部上清液于15 mL離心管中,45 ℃氮吹至近干。準(zhǔn)確加入1.00 mL 10%(v/v)甲醇水溶液,渦旋混勻1 min溶解殘渣,過0.22 μm尼龍-66微孔濾膜,供UHPLC-MS/MS測定。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取5種硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用甲醇溶解,配制成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別移取6種苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.00 mL,置于10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋定容至刻度,配制成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別移取適量上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液,用甲醇稀釋配制成1.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

稱取不含目標(biāo)物的基質(zhì)樣品于離心管中,按照1.2.2和1.2.3節(jié)步驟進(jìn)行提取和凈化,得到空白基質(zhì)溶液。移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液,用空白基質(zhì)溶液配制成質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 色譜-質(zhì)譜條件

1.4.1色譜條件

Kinetex F5色譜柱(100 mm×3.0 mm, 2.6 μm);柱溫40 ℃;流速0.35 mL/min;進(jìn)樣量5 μL;流動相A為0.1%(v/v)甲酸水溶液,B為甲醇。梯度洗脫程序:0～0.5 min, 10%B; 0.5～4 min, 10%B～95%B; 4～6 min, 95%B; 6～6.1 min,95%B～10%B; 6.1～8.5 min, 10%B。

1.4.2質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI),多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);噴霧電壓:5 500 V;離子源溫度550 ℃;氣簾氣(curtain gas)壓力241 kPa,碰撞氣(collision gas)壓力62 kPa,噴霧氣壓力(Gas 1)345 kPa,輔助加熱氣(Gas 2)壓力379 kPa。優(yōu)化后的其他質(zhì)譜采集參數(shù)見表1。

表 1 5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物的質(zhì)譜分析參數(shù)Table 1 Mass spectrometry parameters for the five nitroimidazoles and six benzodiazepines

2 結(jié)果與討論

2.1 分析條件的優(yōu)化

2.1.1色譜條件的優(yōu)化

硝基咪唑類藥物和苯二氮卓類藥物是一類中等極性的化合物,在C18色譜柱上具有較強的保留。Kinetex F5柱(100 mm×3.0 mm, 2.6 μm)是一款采用核-殼技術(shù)的五氟苯基丙基固定相色譜柱,非常適用于鹵代、共軛、異構(gòu)體或極性化合物的分離分析。對于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,流動相的類型和性質(zhì)是影響目標(biāo)化合物分離度和響應(yīng)的重要因素。本實驗研究發(fā)現(xiàn)硝基咪唑類藥物和苯二氮卓類藥物在甲醇-水體系中比在乙腈-水體系中的響應(yīng)值更高。采用甲醇-水體系作為流動相,在水相中加入2 mmoL/L的乙酸銨后,部分目標(biāo)物的色譜峰出現(xiàn)峰展寬的現(xiàn)象,響應(yīng)強度減小;而在水相中加入0.1%(v/v)甲酸后,目標(biāo)物峰形尖銳對稱,離子化效率更高,響應(yīng)強度增大?？紤]到目標(biāo)分析物種類較多,化學(xué)性質(zhì)差異較大,采用梯度洗脫程序,可有效縮短分析時間,改善峰形,減少拖尾,改進(jìn)多組分目標(biāo)物的分離效果。因此,本實驗最終確定選擇0.1%(v/v)甲酸水-甲醇體系作為流動相,采用梯度洗脫程序進(jìn)行分析檢測,色譜條件見1.4.1節(jié)。5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(5 μg/L,以10%(v/v)甲醇水溶液配制)的MRM色譜圖見圖1。

圖 1 5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖Fig. 1 Multiple reaction monitoring (MRM) chromatograms of the five nitroimidazoles and six benzodiazepines

2.1.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將50 μg/L的硝基咪唑類和苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)溶液通過針泵恒流進(jìn)樣方式注入質(zhì)譜儀中,在正離子模式(ESI+)下進(jìn)行一級質(zhì)譜掃描(Q1 scan),獲得目標(biāo)化合物的母離子[M+H]+。然后使用子離子掃描(product ion scan)對獲得的母離子進(jìn)行二級質(zhì)譜掃描,確定目標(biāo)物的子離子信息。選取2個相對豐度強且穩(wěn)定的子離子與對應(yīng)母離子組成定性離子對和定量離子對,采用MRM模式優(yōu)化選定離子對的去簇電壓和碰撞能量,最終確定1.4.2節(jié)所述的質(zhì)譜條件。

2.2 樣品前處理條件的優(yōu)化

2.2.1提取條件的優(yōu)化

硝基咪唑類藥物為酸堿兩性化合物,苯二氮卓類藥物多為弱堿性化合物,這兩類藥物在酸性條件下易分解,主要以質(zhì)子化形式存在,在堿性條件下較穩(wěn)定,主要以分子狀態(tài)存在。提取溶劑的極性和pH值對目標(biāo)物的萃取回收率具有很大的影響。研究表明,動物源食品中硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物常用的提取溶劑為乙酸乙酯[14,20]、乙腈[15,16,18,26]、堿化乙酸乙酯[17,27]和堿化乙腈[21,22,28]等。本實驗重點考察了乙酸乙酯、乙腈、1%(v/v)氨水乙酸乙酯和1%(v/v)氨水乙腈對目標(biāo)物提取效率的影響。結(jié)果表明,采用乙酸乙酯和乙腈作為提取劑時,目標(biāo)物的回收率分別為64.2%～86.7%和68.1%～88.6%;采用1%(v/v)氨水乙酸乙酯和1%(v/v)氨水乙腈作為提取劑時,各目標(biāo)物的回收率均可達(dá)到80%以上,提取效率總體優(yōu)于乙酸乙酯和乙腈,這說明堿性條件下目標(biāo)物多以分子狀態(tài)存在,更容易被有機溶劑提取。同時,實驗還發(fā)現(xiàn),采用乙酸乙酯和1%(v/v)氨水乙酸乙酯作為提取劑時,樣品提取液中脂溶性雜質(zhì)較多,溶液較混濁,為后續(xù)凈化帶來困難。因此,綜合考慮,本實驗選擇1%(v/v)氨水乙腈作為提取溶劑。

2.2.2凈化條件的優(yōu)化

在樣品前處理過程,加入氯化鈉有利于提取溶劑和水相分層,防止樣品中的水分和水溶性極性基質(zhì)干擾物進(jìn)入提取液中,從而減少對目標(biāo)物的干擾和質(zhì)譜離子源的污染[15];加入無水硫酸鈉可以去除提取液中的水分,使?jié)饪s復(fù)溶后的樣品溶液體積更準(zhǔn)確,從而提高目標(biāo)物的回收率。本實驗選用氯化鈉作為鹽析劑,無水硫酸鈉作為除水劑并優(yōu)化其用量,結(jié)果表明,加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鈉時,樣品提取液具有最好的鹽析效果,濃縮后離心管中未發(fā)現(xiàn)水分殘留,各目標(biāo)化合物的提取效率較高,回收率為79.6%～102.5%。

為了減少基質(zhì)效應(yīng),提高凈化效率和萃取回收率,本研究采用分散固相萃取作為凈化手段。吸附劑的選擇是分散固相萃取的一個最重要的參數(shù)。C18、PSA以及石墨化炭黑(GCB)是常用的吸附劑。其中,C18對脂肪等非極性干擾物具有較強的吸附作用;PSA可以吸附樣品中的色素、糖類、有機酸等干擾物質(zhì);GCB能有效去除各種基質(zhì)中的色素和甾醇類等干擾物,但對含有平面結(jié)構(gòu)的化合物具有較強的吸附作用。水產(chǎn)品基質(zhì)較為復(fù)雜,樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白質(zhì)后可以去除部分干擾物,但仍可能存在少量的蛋白質(zhì)、脂肪和色素等雜質(zhì);苯二氮卓類藥物含有苯環(huán)類官能團(tuán)的結(jié)構(gòu),故本研究只選擇PSA和C18兩種吸附劑進(jìn)行優(yōu)化。在同一加標(biāo)水平(2.5 μg/kg)的空白樣品提取液中,分別加入3個不同組合的PSA和C18(1: 50 mg C18; 2: 50 mg PSA; 3: 25 mg PSA+25 mg C18)吸附劑凈化(結(jié)果見圖2)。

圖 2 吸附劑類型及用量對5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物回收率的影響(n=3)Fig. 2 Effects of the types and amounts of adsorbents on the recoveries of the five nitroimidazoles and six benzodiazepines (n=3)

從圖2可以看出,各目標(biāo)物采用組合3(25 mg PSA+25 mg C18)凈化時回收率較高(均大于80%),明顯優(yōu)于組合1和組合2。實驗還發(fā)現(xiàn),僅采用C18(組合1)凈化時,提取液顏色較深,氮吹濃縮后殘渣較多;僅采用PSA(組合2)凈化時,氮吹濃縮后脂質(zhì)殘留較多。采用C18(組合1)或PSA(組合2)凈化后進(jìn)樣檢測,空白樣品基線噪聲較大,干擾物質(zhì)較多,質(zhì)譜的離子源較易受污染且待測物的回收率不理想。實驗進(jìn)一步優(yōu)化了PSA和C18吸附劑的用量。分別將PSA(25、50、75 mg)和C18(15、30、45 mg)搭配成9個組合進(jìn)行正交試驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)50 mg PSA+30 mg C18組合的協(xié)同凈化效果最佳,各目標(biāo)物的回收率均較高,回收率達(dá)到81.5%～103.2%。因此,本實驗最終選擇50 mg PSA+30 mg C18作為凈化吸附劑。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)評價

基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect, ME)是指在采用LC-MS/MS檢測目標(biāo)化合物時,樣品中的基質(zhì)成分和樣品前處理引入的雜質(zhì)在與待測物離子化過程中相互競爭,影響(增強或抑制)待測物在噴霧接口處的離子化效率,從而導(dǎo)致分析測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度發(fā)生改變的現(xiàn)象[29,30]?；|(zhì)效應(yīng)是LC-MS/MS分析時存在的一個非常顯著的現(xiàn)象,一般受分析儀器條件、樣品基質(zhì)類型、前處理方式等因素的影響,會對檢測結(jié)果的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度產(chǎn)生很大影響。因此,在建立LC-MS/MS分析方法時應(yīng)評估基質(zhì)效應(yīng),并采用適當(dāng)?shù)姆椒ń档突蜓a償基質(zhì)效應(yīng)的影響,從而確保檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確、可靠。

基質(zhì)效應(yīng)常用的評價方法主要有柱后注射法(定性評價法)[31]和提取后添加法(定量評價法)[32]。提取后添加法主要有單點提取添加法[25,28]和離子抑制率[33-36]兩種評價方式。本研究采用離子抑制率對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評價(見表2),即ME=(K2/K1-1)×100%,其中,K1為溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率,K2為空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。當(dāng)ME>0時,稱為基質(zhì)增強效應(yīng),表示基質(zhì)使待測物的響應(yīng)增加;當(dāng)ME<0時,稱為基質(zhì)抑制效應(yīng),表示基質(zhì)使待測物的響應(yīng)降低,當(dāng)ME=0時表示不存在基質(zhì)效應(yīng)。由表2可知,硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物在草魚、大黃魚和對蝦基質(zhì)溶液中存在一定強度的基質(zhì)增強或減弱效應(yīng),ME為-25.8%～12.7%。其中甲硝唑和羥基甲硝唑在3種基質(zhì)中均存在較強的基質(zhì)抑制效應(yīng),ME為-25.8%～-10.4%。對于基質(zhì)復(fù)雜的水產(chǎn)品而言,經(jīng)本方法前處理凈化后各目標(biāo)化合物的基質(zhì)效應(yīng)均在可接受的范圍內(nèi)。在實際樣品測定中,本實驗采用空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量校準(zhǔn)可進(jìn)一步補償基質(zhì)效應(yīng)的影響。

表 2 5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物在 不同基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)Table 2 Matrix effects of the five nitroimidazoles and six benzodiazepines in different matrices

2.4 方法學(xué)驗證

2.4.1線性范圍和靈敏度

按1.3節(jié)方法配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,并分別進(jìn)行測定。以被測組分的峰面積y為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度x(μg/L)為橫坐標(biāo),繪制空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用在空白草魚、對蝦和大黃魚中分別添加低濃度目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法,以信噪比(S/N)=3和S/N=10分別確定各目標(biāo)物的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物的線性范圍、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)(R2)、檢出限和定量限見表3。

表 3 5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物的線性范圍、基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table 3 Linear ranges, matrix-matched standard curves, correlation coefficients (R2), limits of detection (LODs), and limits of quantification (LOQs) of the five nitroimidazoles and six benzodiazepines

由表3可知,5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物在0.5～20 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,靈敏度較高。

2.4.2回收率和精密度

選取陰性草魚、對蝦和大黃魚作為空白基質(zhì)樣品,設(shè)定3個添加水平,每個添加水平做6個平行樣,按本方法進(jìn)行回收率和精密度試驗,結(jié)果見表4。由表4可知,各基質(zhì)中5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物的回收率為73.2%～110.6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.5%～14.3%;表明該方法的回收率和重復(fù)性好,滿足日常檢測要求。

表 4 不同基質(zhì)中5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物的回收率和精密度(n=6)Table 4 Recoveries and precisions of the five nitroimidazoles and six benzodiazepines in different matrices (n=6)

2.5 實際樣品檢測

采用已經(jīng)建立的方法對市售鯽魚、鳊魚、鯉魚、草魚、鰱魚、烏鱧、對蝦、大黃魚等30份樣品進(jìn)行分析檢測。檢測結(jié)果顯示,所有樣品均未檢出硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物。

3 結(jié)論

本文對儀器檢測參數(shù)和樣品前處理條件進(jìn)行了優(yōu)化,采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量,建立了一種分散固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中5種硝基咪唑類和6種苯二氮卓類藥物殘留的分析方法。該方法靈敏度高,回收率好,簡單、高效、快速、成本低,實現(xiàn)了對水產(chǎn)品中多種硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物的同時分析檢測,為檢測水產(chǎn)品中硝基咪唑類和苯二氮卓類藥物殘留提供了技術(shù)支持。