經(jīng)陰道多普勒超聲聯(lián)合血清生存素檢測對宮頸癌癌前病變的診斷價值

曹宇新 宋風(fēng)麗

北京市大興區(qū)人民醫(yī)院(102600)

宮頸癌是一種女性常見生殖系統(tǒng)惡性腫瘤[1]。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是宮頸癌的癌前病變，高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染、細(xì)胞原癌基因的激活、抑癌基因失活及細(xì)胞凋亡等與CIN及宮頸癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。癌前病變早期診斷是阻斷疾病進展的關(guān)鍵。目前病理診斷仍是金標(biāo)準(zhǔn)，但因有創(chuàng)性使應(yīng)用受限[3]。HPV檢測雖然敏感性高，但特異性不佳，易出現(xiàn)誤診[4]。經(jīng)陰道彩色多普勒超聲(TVCDS)不僅可獲取子宮腫瘤的位置和大小信息，還可獲取血流狀態(tài)，但診斷有主觀性、專業(yè)性，靈敏度和特異度均不佳[5]，臨床應(yīng)用需聯(lián)合其他指標(biāo)。血清學(xué)指標(biāo)簡單易獲取，但無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，生存素(Survivin)是一種抗凋亡作用最強的基因，成為臨床癌癥診斷及治療的研究熱點，且與CIN、宮頸癌發(fā)生及預(yù)后密切相關(guān)[6-7]。目前關(guān)于TVCDS聯(lián)合血清Survivin對宮頸癌癌前病變的診斷價值尚少有研究，本研究對此進行分析，為臨床宮頸癌癌前病變的無創(chuàng)診斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年5月-2019年12月本院收治的CIN患者164例(CIN組)及子宮良性病變患者180例(對照組)；根據(jù)病理結(jié)果將CIN患者分為CIN1組43例、CIN2組63例、CIN3組58例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)診斷確診；②術(shù)前均行TVCDS檢查且檢查資料完整；③對照組精神狀態(tài)良好，可配合調(diào)查研究且無其他急慢性感染性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤或嚴(yán)重心腦血管疾病者；②嚴(yán)重肝、腎等重要臟器功能異常；③合并血液傳染性疾病。收集所有資料及樣本采集均經(jīng)過患者及其家屬知情同意并簽字確認(rèn)。本研究經(jīng)過本院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 研究方法

1.2.1一般資料收集采用自制調(diào)查表調(diào)查方式或門診病歷系統(tǒng)查詢收集研究對象包括年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、吸煙史(每天吸煙≥1支，連續(xù)或累計吸煙≥6個月)、絕經(jīng)情況、性傳播疾病情況及血清標(biāo)本等。

1.2.2儀器與試劑全基因組試劑盒購自美國Thero Fisher公司；雜交試劑盒購自美國羅氏公司；Survivin 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELLSA)試劑盒購自英國Abcam公司。彩色多普勒超聲儀購自美國GE公司；醫(yī)用核酸分子快速雜交儀購自北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司。

1.2.3 TVCDS檢查患者排空膀胱取截石位，由同一名經(jīng)驗豐富的超聲醫(yī)師用GE VolusonE8彩色多普勒超聲儀進行檢查。經(jīng)陰道容積探頭，頻率5～9 MHz，探頭分別對陰道、陰道穹隆部和宮頸處做橫向、縱向、斜向多方位掃查，觀察宮頸內(nèi)外口，宮頸管回聲情況，每個病例測量病灶大小后，采用彩色多普勒血流顯像檢查距病灶邊緣至少5 mm處的血流分布，記錄血流阻力指數(shù)(RI)。

1.2.4 HR-HPV檢測采用全基因組試劑盒提取研究對象血液DNA，PCR試劑盒擴增，采用雜交試劑盒、醫(yī)用核酸分子快速雜交儀檢測HR-HPV感染情況。病毒載量以相對光單位(RLU)與界值點(Cutoff)比值衡量，RLU/CO比值≥1.0診斷HPV陽性。

1.2.5血清Survivin檢測采用ELLSA法檢測血清Survivin水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 基線資料比較

CIN組與對照組年齡、BMI，絕經(jīng)、吸煙及性傳播疾病占比均無差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2 TVCDS、血清Survivin及HR-HPV陽性比較

CIN組患者宮頸管可見疑似癌變異常表現(xiàn)，宮頸體積增大，表面不光滑，宮頸梭形結(jié)構(gòu)破壞，內(nèi)膜增厚，腫塊內(nèi)血管呈棒狀或條狀，局部血流豐富；而對照組宮頸內(nèi)部沒有或血流信號極少。與對照組比較，CIN組患者血流RI降低，血清Survivin水平、HR-HPV陽性率增加(P<0.05)。與CIN1組、CIN2組、CIN3組血流RI依次降低，血清Survivin水平、HR-HPV陽性率依次增加(P<0.05)。見表2。

表2 兩組各檢測指標(biāo)比較

2.4 血流RI、血清Survivin診斷宮頸癌癌前病變價值

繪制ROC曲線，血流R I、血清Survivi診斷宮頸癌癌前病變的AUC分別為0.873(95%CI：0.836～0.910)、0.907(95%CI：0.871～0.942)，截斷值分別為0.599、88.860 ng/ml，此時靈敏度分別為76.8%、89.0%，特異度分別為85.0%、88.3%；二者聯(lián)合檢測診斷病變的AUC為0.951(95%CI：0.929～0.974)，靈敏度、特異度分別為94.5%、86.4%。

2.5 影響宮頸癌癌前病變的危險因素分析

logistic回歸分析顯示，HR-HPV陽性、血流RI低、血清Survivin水平高均是影響宮頸癌癌前病變的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響宮頸癌癌前病變的多因素logistic回歸分析

3 討論

宮頸癌發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，目前篩查方式的靈敏度及特異度均不高，易造成漏診或誤診[8]。TVCDS是近來婦產(chǎn)科發(fā)展的重要突破，無創(chuàng)且可不受腸道氣體、肥胖等因素影響；陰道探頭頻率較高，掃查視角較寬，可清晰顯示宮頸及陰道穹隆部檢查影像，還可通過計算機軟件將結(jié)果量化，測量出血流RI，是一種快捷、有效的檢查方式[9]。TVCDS對宮頸病變有較高臨床診斷價值[10-11]。本研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，CIN組血流RI低于對照組，CIN3組低于CIN1組和CIN2組，提示腫瘤患者血流表現(xiàn)為高速低阻狀態(tài)[12]。CIN作為癌前病變，亦存在血管異常生長，提示宮頸局部血流RI降低可能與宮頸癌癌前病變有關(guān)。本研究進一步繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，RI診斷宮頸癌癌前病變的AUC為0.873，截斷值為0.599時靈敏度為76.8%，特異度為85.0%，雖然TVCDS檢測的血流RI對宮頸癌前病變有一定診斷價值，但可能因存在專業(yè)性強等主觀經(jīng)驗因素判定限制靈敏度不佳。

宮頸癌發(fā)生發(fā)展是一個多階段、多步驟的復(fù)雜過程。研究發(fā)現(xiàn)，凋亡抑制蛋白在該演變過程中發(fā)揮重要作用。Survivin通常只表達于胚胎中，可通過直接抑制caspase-3和caspase-7活性阻斷細(xì)胞凋亡過程，近年來成為宮頸癌癌前病變及宮頸癌早期診斷及靶向治療的熱點之一[13]。吳曉梅等[14]研究報道，Survivin在老年宮頸癌及CIN患者中呈特異性高表達，且隨疾病嚴(yán)重程度而增加。Yu等[15]研究報道，降低宮頸癌Src/NF-kappaB/Survivin信號通路活性，可有效抑制宮頸癌細(xì)胞增殖和克隆。Kogo等[16]研究報道，miR-218～survivin軸通過調(diào)控克隆原性、遷移和侵襲抑制宮頸癌進展，抑制Survivin可能是改善宮頸癌預(yù)后的一種潛在治療策略。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，CIN組患者血清Survivin水平增加，且CIN1-CIN3血清Survivin水平呈增加趨勢，提示血清Survivin水平增加與宮頸癌癌前病變有關(guān)，有望成為早期預(yù)防癌變的治療靶點。本研究進一步ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，Survivin診斷宮頸癌癌前病變的AUC為0.907，截斷值為88.860 ng/ml時靈敏度和特異度分別為89.0%、88.3%，提示血清Survivin對宮頸癌癌前病變有一定診斷價值。而血清Survivin聯(lián)合血流RI診斷宮頸癌癌前病變的AUC為0.951、靈敏度(94.5%)、特異度(86.4%)均優(yōu)于單一指標(biāo)檢測，且血流RI低、血清Survivin水平高是影響宮頸癌癌前病變的獨立危險因素。

綜上所述，CIN患者血流RI降低，血清Survivin水平升高，TVCDS檢測血流RI聯(lián)合血清Survivin可能對宮頸癌癌前病變有較好的診斷價值。但因本研究樣本量及工作條件限制，未分析HR-HPV感染與血流RI、血清Survivin關(guān)系及影響機制，有待進一步探究。