子癇前期患者血清BNP、miR-124與病情及妊娠結(jié)局關(guān)系

鄭 雯 張亞莉

河南省商丘市第一人民醫(yī)院(476000)

子癇前期(PE)主要癥狀包括血壓升高、水腫、出現(xiàn)蛋白尿等，多數(shù)合并心、腦、肺及其他臟器功能障礙，是引起孕產(chǎn)婦死亡的主要原因[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)，PE的發(fā)生發(fā)展與胎盤缺血、內(nèi)皮功能障礙有關(guān)[2]。腦利鈉肽(BNP)是各種心血管疾病如慢性心力衰竭[3]、肥厚性心肌病[4]、急性冠脈綜合征[5]等重要生物標(biāo)記物。BNP可用于監(jiān)測高血壓患者是否發(fā)生心室重構(gòu)并能反映患者病情嚴(yán)重程度[6]。近年來，微小RNA(miRNA)在高血壓、糖尿病中的作用越來越受到重視。薛強(qiáng)等[7]研究指出，miR-124與高血壓并發(fā)糖尿病患者的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)活性激活有關(guān)，且其CYP11B2基因位點(diǎn)多態(tài)性可能參與了代謝綜合征的發(fā)生。本研究通過檢測PE患者血清BNP、miR-124水平，分析其與病情及妊娠結(jié)局的關(guān)系，初步討論其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月-2020年6月于本院就診的PE患者132例為PE組，根據(jù)病情分為輕度PE組(74例)和重度PE組(58例)；產(chǎn)前檢查健康孕婦60例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①PE診斷符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；②單胎妊娠；③知情同意并配合檢查及相關(guān)資料收集。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并糖尿病或心血管疾??；②合并原發(fā)性高血壓、腎臟病；③合并惡性腫瘤；④依從性差或拒絕配合檢查。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

1.2 檢測方法

1.2.1血樣采集PE患者入院后次日清晨取空腹靜脈血、正常產(chǎn)前檢查孕婦取空腹8 h靜脈外周血，分裝于兩個(gè)無菌試管中，離心取上清液于無菌EP管。

1.2.2血清BNP水平采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清BNP水平(上海喬羽生物科技有限公司生產(chǎn)試劑盒)。

1.2.3血清miR-124水平采用熒光定量PCR技術(shù)檢測血清miR-124水平，首先利用Trizol試劑盒(TaKaRa公司，日本)提取總RNA。利用紫外分光光度計(jì)檢測RNA純度。用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(ThermoFisher公司，美國)合成cDNA，利用MaximaTM SYBR Green qPCR Master Mix試劑(ThermoScientific公司，美國)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以U6為內(nèi)參基因。循環(huán)參數(shù)：95℃變性6min；95℃ 30s；60℃ 20s，共40個(gè)循環(huán)。miR-124上游引物：5’-GCTAAGGCACGCGGTG-3’，下游引物：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’；U6上游引物：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTA-3’，引物序列由生工生物工程公司合成。用2-△△Ct法計(jì)算miR-124相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4平均動(dòng)脈壓及24 h尿蛋白定量采用水銀柱式血壓計(jì)檢測入組對(duì)象收縮壓、舒張壓并計(jì)算平均動(dòng)脈壓。采用雙縮脲法檢測24 h尿蛋白定量。

1.3 觀察指標(biāo)及隨訪記錄

觀察比較血清BNP、miR-124水平及平均動(dòng)脈壓、24 h尿蛋白定量。隨訪記錄妊娠結(jié)局，以出現(xiàn)子癇、心衰、肺水腫、妊娠期高血壓綜合征、新生兒窒息、宮內(nèi)窘迫、小于胎齡兒等判定為不良妊娠，比較各組發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料

3組孕婦年齡、孕前體質(zhì)指數(shù)、孕周、孕次等無差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組一般資料比較

2.2 血清指標(biāo)、平均動(dòng)脈壓及24 h尿蛋白定量比較

PE組血清BNP、miR-124水平，平均動(dòng)脈壓、24 h尿蛋白定量均高于對(duì)照組，且重度PE組高于輕度PE組(均P<0.05)。見表2。

表2 各組血清指標(biāo)、平均動(dòng)脈壓及24 h尿蛋白比較

2.3 PE患者血清BNP、miR-124水平與不良妊娠

根據(jù)PE患者血清BNP、miR-124水平中位數(shù)(86.38 pg/ml、1.30)將其分為高BNP組和低BNP組、高miR-124組和低miR-124組，分析各組妊娠結(jié)局。結(jié)果顯示高BNP組、高miR-124組不良妊娠總發(fā)生比例更高(P<0.05)。見表3。

表3 血清BNP、 miR-124水平與PE患者不良妊娠[例(%)]

2.4 影響PE患者不良妊娠因素分析

單因素分析顯示，血清BNP、miR-124、平均動(dòng)脈壓、24 h尿蛋白與PE患者發(fā)生不良妊娠有關(guān)(P<0.05)；多因素logistic回歸分析顯示，血清BNP、miR-124、24 h尿蛋白異常是影響PE患者結(jié)局不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4、表5。

表4 不同特征PE患者妊娠結(jié)局比較

表5 影響PE患者不良妊娠結(jié)局的多因素logistic回歸分析

3 討論

血清BNP是一種多肽類激素，廣泛分布于腦、心臟、肺、消化道等全身各組織，以心臟水平最高。正常生理情況下，BNP在心室中儲(chǔ)存濃度很低；在病理情況下血清BNP水平在血容量增加和心室負(fù)荷過重等物理因素、暴露于RAAS系統(tǒng)等化學(xué)因素及缺血、缺氧等代謝因素作用下明顯增加[9]。PE主要臨床表現(xiàn)為血壓升高，小動(dòng)脈血管痙攣增加了血管外阻力，使得心室后負(fù)荷明顯增加，心室順應(yīng)性顯著降低，推測PE患者血清BNP水平相對(duì)于正常情況有所增加。本研究結(jié)果顯示，PE患者血清BNP水平高于對(duì)照組且重度PE患者最高，表明PE患者病情越嚴(yán)重，心室負(fù)荷增加越明顯，BNP水平升高更顯著。王建康等[10]研究發(fā)現(xiàn)，重度PE、輕度PE及正常妊娠者血清BNP水平依次降低，表明血清BNP在PE發(fā)病過程中起重要作用，并與患者病情有關(guān)。黃鈞等[11]研究表明，重度PE患者血清BNP水平、收縮壓和舒張壓均高于輕度PE、妊娠高血壓患者，且BNP與收縮壓和舒張壓有一定關(guān)系但關(guān)系不密切。本研究也得出相似的結(jié)果，PE患者平均動(dòng)脈壓、24 h尿蛋白定量均高于對(duì)照組，PE患者血清BNP水平與平均動(dòng)脈壓、24 h尿蛋白定量均呈正相關(guān)。平均動(dòng)脈壓與PE患者全身小動(dòng)脈痙攣關(guān)系密切，24 h尿蛋白可反映PE患者腎功能損傷情況，故血清BNP水平在一定程度上可反映PE患者病情程度。

miRNAs可與靶基因的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)結(jié)合來抑制其轉(zhuǎn)錄[12]。研究證實(shí)，miRNAs參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等生理病理過程，與心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)系[13]。miR-124是一種與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)的miRNA，而miR-124在PE患者血清中的表達(dá)研究少見報(bào)道。Lykoudi等[14]利用miRNA基因芯片分析了16名PE患者和8例正常妊娠孕婦胎盤組織，結(jié)果顯示有44種miRNA失調(diào)，其中miR-124在早發(fā)性PE胎盤中過表達(dá)，提示miR-124可作為指示PE的特定生物標(biāo)記物。本研究結(jié)果顯示，PE患者血清miR-124水平高于對(duì)照組且重度PE組高于輕度PE組，表明高水平miR-124與PE病情程度有關(guān)。Lv等[15]研究發(fā)現(xiàn)，miR-124-3p可通過下調(diào)早期生長反應(yīng)因子1降低血管緊張素II依賴性高血壓。另有報(bào)道稱[16]，PE患者胎盤組織中miR-124-3p表達(dá)顯著增加，并可直接靶向抑制胎盤生長因子(PLGF)表達(dá)，抑制胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲、遷移，可通過PLGF-ROS途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡，揭示了miR-124-3p在PE中的可能作用機(jī)制。本文分析PE患者妊娠結(jié)局發(fā)現(xiàn)，高BNP、高miR-124水平患者不良妊娠結(jié)局發(fā)生率增加，與其他學(xué)者[17]研究結(jié)果一致。本研究進(jìn)一步分析顯示，血清BNP、miR-124、24 h蛋白尿水平是影響PE病情發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明該3項(xiàng)指標(biāo)異常升高時(shí)發(fā)生PE風(fēng)險(xiǎn)增加。

綜上所述，PF患者血清BNP、miR-124水平異常升高且隨PE病情加重明顯升高，高水平血清BNP、miR-124的PE患者不良妊娠結(jié)局發(fā)生率增加。提示臨床，血清BNP、miR-124可能作為指示PE患者病情發(fā)展及不良妊娠結(jié)局的生物標(biāo)志物，但作用和影響機(jī)制有待更深入研究。