子癇前期患者血清CXCR4表達(dá)及與炎性因子相關(guān)性

王 婷 李愛萍 周莎莎

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院(450014)

子癇前期(PE)妊娠期特有疾病，也是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和新生兒發(fā)病及死亡的主要原因之一[1-2]。特異性趨化因子受體4(CXCR4)在調(diào)節(jié)胎兒-母體微環(huán)境的免疫炎癥反應(yīng)中起重要作用[3]。 核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)可調(diào)節(jié)炎癥免疫應(yīng)答，p65亞基在經(jīng)典的炎癥激活途徑中起關(guān)鍵作用[4]。因此，p65的表達(dá)水平可以反映出NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性。在病理妊娠狀態(tài)下，NF-κB p65高表達(dá)可引起子宮螺旋動脈重鑄障礙，導(dǎo)致胎盤缺血、缺氧，釋放多種炎性因子(如IL-6、TNF-a、hsCRP)進(jìn)入母體血液循環(huán)，導(dǎo)致氧化應(yīng)激及內(nèi)皮細(xì)胞損傷[5]。筆者檢測了子癇前期患者血清中CXCR4、NF-κB p65的表達(dá)，以及血清炎癥因子(IL-6、TNF-a、hsCRP)水平，同時分析其相關(guān)性，旨在探討SDF-1/CXCR4軸在子癇前期炎癥機(jī)制中的作用。

1 對象與方法

1.1 對象

選擇2020年1-10月在本院剖宮產(chǎn)孕婦60例，30例重度子癇前期孕婦作為觀察組，30例健康孕婦為對照組。子癇前期診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)參照第9版《婦產(chǎn)科學(xué)》[6]和《妊娠期高血壓疾病診治指南(2020)》[7]，兩組孕婦均為單胎妊娠、剖宮產(chǎn)術(shù)分娩。無慢性高血壓、糖尿病、心臟疾病、腎病等病史。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，并取得研究對象知情同意。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)本收集抽取空腹靜脈血，留取1ml血清，2～8℃冰箱保存7d，長期保存置于-20℃。

1.2.2主要試劑與儀器RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Toyobo，美國ABI 7500 Fast)，引物(上海生工生物有限公司)，紫外分光光度計(美國Thermo Nano Drop 1000)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(武漢賽培生物科技有限公司)、酶標(biāo)儀(Thermo Fishers)。

1.2.3總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增提取觀察組和對照組血清中CXCR4、NF-κBp65的總RNA，并使用紫外分光光度計測定RNA的純度及水平。RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并進(jìn)行擴(kuò)增，每組設(shè)置3個復(fù)孔，操作方法按試劑盒說明書。以目的基因的相對表達(dá)量作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，采用2-△△Ct的方法計算CXCR4、NF-κBp65 mRNA的相對表達(dá)量。引物序列見表1。

表1 目的基因及引物序列

1.2.4血清中炎癥因子(IL-6、TNF-a、hsCRP)測定酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測血清中炎性因子水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料

兩組對象年齡、分娩時體質(zhì)指數(shù)(BMI)及分娩孕周均無差異(P>0.05)。觀察組孕婦收縮壓、舒張壓及尿蛋白水平均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組對象一般資料比較

2.2 CXCR4、NF-κBp65 mRNA表達(dá)水平

觀察組血清中CXCR4mRNA表達(dá)低于對照組，而NF-κBp65 mRNA的表達(dá)高于對照組(均P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清CXCR4、NF-κBp65 mRNA表達(dá)

2.3 IL-6、TNF-a、hsCRP水平

觀察組血清中IL-6、TNF-a、hsCRP水平均高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組血清炎癥因子水平比較

2.4 相關(guān)性分析

觀察組血清CXCR4mRNA與NF-κBp65 mRNA、IL-6、TNF-a、hsCRP呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。見表5。對照組則無明顯相關(guān)性。

表5 觀察組各指標(biāo)相關(guān)性分析

3 討論

研究認(rèn)為PE是一種全身炎癥性疾病，而且臨床上尚缺乏有效的治療手段[8]。早期妊娠時，滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的趨化因子和細(xì)胞因子可促進(jìn)母胎界面的免疫炎癥微環(huán)境，利于正常妊娠的進(jìn)行，但過度的炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致母胎界面免疫失衡，使滋養(yǎng)細(xì)胞功能紊亂、子宮螺旋動脈重鑄障礙、血管內(nèi)皮損傷，引起胎盤和胎兒缺氧及全身炎癥[9-10]。

有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4與其配體基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)結(jié)合之后，可影響妊娠早期人絨毛組織中滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲和遷移功能，說明了SDF-1/CXCR4生物軸在母-胎界面的重要性[11-12]。CXCR4 也是一種小分子炎性細(xì)胞因子，與細(xì)胞表面的相關(guān)受體結(jié)合后引起免疫炎癥反應(yīng)[13]。與母胎界面的炎癥反應(yīng)一樣，妊娠期孕婦血清中也會出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。有研究通過構(gòu)建小鼠模型發(fā)現(xiàn)，在妊娠早期，抑制CXCR4的表達(dá)會減少樹突狀細(xì)胞向母胎界面募集，同時可能會影響外周血中的免疫細(xì)胞的功能[14]。雖然SDF-1/CXCR4軸具有免疫調(diào)節(jié)功能，但在子癇前期患者中，SDF-1/CXCR4是如何參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展，還鮮有報道，其具體細(xì)節(jié)尚需要進(jìn)一步研究。筆者前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與正常妊娠孕婦相比，子癇前期孕婦胎盤組織中CXCR4 表達(dá)水平明顯下降[15]，同時也在細(xì)胞水平進(jìn)行了相應(yīng)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)論一致[16]。為了探討PE患者血清中CXCR4的表達(dá)情況，本實(shí)驗(yàn)檢測了子癇前期患者及正常孕婦血清中的CXCR4 mRNA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其明顯下降。

NF-κB是由五個亞基(p65、cRel、RelB、p50和p52)組成的轉(zhuǎn)錄因子家族[4，17]，是多種炎癥反應(yīng)的上游調(diào)節(jié)因子。NF-κB信號通路的經(jīng)典激活機(jī)制涉及p65亞基，通路激活后，p65亞基會轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核上，調(diào)節(jié)各種炎癥基因的表達(dá)，最終可刺激細(xì)胞產(chǎn)生大量的炎性因子(IL-6、TNF-a、hsCRP等)，這些炎性因子可作為配體增加NF-κB的活性，從而引發(fā)促炎級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷[18-21]。本實(shí)驗(yàn)通過檢測PE血清NF-κB p65 mRNA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)PE患者明顯升高，同時檢測了血清中炎性因子IL-6、TNF-a、hsCRP的水平，發(fā)現(xiàn)PE患者也有明顯升高。因此，推測在PE的發(fā)生過程中，CXCR4與炎癥反應(yīng)的途徑中相關(guān)的炎性因子可能有一定的相關(guān)性。為了驗(yàn)證這一推測，本實(shí)驗(yàn)又進(jìn)行了CXCR4 mRNA與NF-κB p65 mRNA、炎性因子(IL-6、TNF-a、hsCRP)的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)子癇前期組孕婦血清CXCR4 mRNA與NF-κBp65mRNA、炎癥因子(IL-6、TNF-a、hsCRP)均呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。因此，推測CXCR4可能通過負(fù)向調(diào)控炎癥反應(yīng)的上游調(diào)節(jié)因子NF-κB p65的激活，從而激活機(jī)體的炎癥免疫應(yīng)答，釋放大量的炎性因子(IL-6、TNF-a、hsCRP)，參與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，CXCR4在PE發(fā)生的炎癥機(jī)制中可能起到一個負(fù)向調(diào)控的作用。但SDF-1/ CXCR4軸是如何調(diào)控NF-κB信號通路對全身的循環(huán)或組織進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)的，還需要通過構(gòu)建動物模型進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)，同時在細(xì)胞水平進(jìn)行驗(yàn)證。