三種腫瘤標(biāo)志物與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值

曹莉莉 沈昕 胡陽(yáng) 李萬(wàn)兵 余璠★

乳腺癌是臨床常見(jiàn)女性惡性腫瘤之一，其發(fā)生率在全球范圍內(nèi)呈逐年升高趨勢(shì)，每年升高幅度約為0.2%～0.8%，需給予重視［1-2］。腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA）、糖類抗原125（Carbohydrate antigen 125，CA125）、糖類抗原199（Carbohydrate antigen 199，CA199）在乳腺癌中高度表達(dá)，而大量臨床實(shí)踐證實(shí)，與健康者相比，上述血清腫瘤標(biāo)志物在部分乳腺良性病變中也可出現(xiàn)異常升高表達(dá)，雖然升高幅度低于乳腺惡性病變，但仍會(huì)影響其診斷特異度，存在一定局限性［3-4］。近年來(lái)，尿液對(duì)羥基苯丙氨酸在惡性腫瘤篩查和診斷中的應(yīng)用受到臨床關(guān)注，主要是利用尿液中氨基酸代謝物與其檢測(cè)試劑發(fā)生特征性顯色反應(yīng)進(jìn)行診斷，具有快速、便捷、無(wú)創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)［5］。本研究嘗試探討三種腫瘤標(biāo)志物與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取國(guó)藥葛洲壩中心醫(yī)院健康管理中心2020年1月至2021年12月乳腺癌患者50 例作為惡性組，年齡平均（47.62±6.10）歲，體質(zhì)量指數(shù)平均（22.75±1.91）kg/m2。另選取同期乳腺良性病變患者50 例作為良性組，年齡平均（48.35±6.69）歲，體質(zhì)量指數(shù)平均（22.49±1.45）kg/m2。健康體檢者50例作為健康組，年齡平均（48.01±5.94）歲，體質(zhì)量指數(shù)平均（22.60±1.52）kg/m2。三組年齡、體質(zhì)量指數(shù)等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：乳腺癌、乳腺良性病變均經(jīng)超聲、病理學(xué)檢查證實(shí)；均為初次發(fā)病，未接受乳腺放化療等抗腫瘤治療；3 組入試者均自愿簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有其他部位惡性腫瘤者；病理診斷不明確者；妊娠期、哺乳期女性；屬于其他部位腫瘤轉(zhuǎn)移至乳腺或乳腺癌復(fù)發(fā)者；存在認(rèn)知異常、精神疾病者；伴有影響氨基酸和尿色的其他疾病者。

1.3 方法

1.3.1 血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法

于所有受檢者入院當(dāng)日清晨采集空腹肘靜脈血3 mL，以3 500 r/min 的速率離心10 min，離心半徑為10 cm，取上清液，保存于-70℃低溫條件下備用，均于2 h 內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。采用化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)血清CEA、CA125、CA199 水平，試劑盒購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：CA125：54164303；CA199：（10）56356005；CEA：（10）57044405），所有操作嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書。

1.3.2 尿液尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)方法

入院前叮囑所有受檢者應(yīng)停服影響氨基酸和尿色的藥物（如：磺胺類、水楊酸類、利福霉素類藥物等）、停止飲用濃茶3～5 d，于所有受檢者入院當(dāng)日清晨采用一次性留尿容器收集晨尿標(biāo)本3 mL，在2 h 完成檢測(cè)。癌癥尿液篩查檢測(cè)試劑（Urinetest reagent for cancerscreening and monitoring，URC）購(gòu)自江蘇東博生物醫(yī)藥有限公司，生產(chǎn)許可證：蘇食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20160018 號(hào)，產(chǎn)品批號(hào)：20200818，于室溫20℃條件下，將尿液標(biāo)本加入裝有0.5 mL URC 的安瓿瓶中，搖晃均勻后，靜置3～5 min，觀察有無(wú)沉淀物，將沉淀物顏色與標(biāo)準(zhǔn)色板對(duì)照，判定結(jié)果：淺黃色沉淀判定為陰性，淺紅色沉淀判定為弱陽(yáng)性，紅色沉淀判定為陽(yáng)性，磚紅色沉淀判定為強(qiáng)陽(yáng)性［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）描述，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料用u表示，Ridit 檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman 線性相關(guān)法；診斷價(jià)值分析采用受試者工作特征（ROC）曲線，聯(lián)合診斷實(shí)施Logistic 二元回歸擬合，返回預(yù)測(cè)概率logit（p），將其作為獨(dú)立檢驗(yàn)變量。P＜0.05 表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清腫瘤標(biāo)志物水平

三組血清CEA、CA125、CA199 水平比較：惡性組＞良性組＞健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3 組血清腫瘤標(biāo)志物水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum tumor marker levels in the three groups（±s）

表1 3 組血清腫瘤標(biāo)志物水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum tumor marker levels in the three groups（±s）

注：與健康組比較，aP＜0.05；與良性組比較，bP＜0.05。

組別惡性組良性組健康組F 值P 值n 50 50 50 CEA（μg/L）12.06±3.41ab 2.68±0.62a 2.13±0.54 379.735＜0.001 CA125（U/mL）50.89±14.62ab 16.03±4.27a 13.14±3.05 274.436＜0.001 CA199（U/mL）55.69±15.66ab 14.21±4.18a 10.43±3.37 345.114＜0.001

2.2 三組尿液對(duì)羥基苯丙氨酸表達(dá)情況

惡性組尿液對(duì)羥基苯丙氨酸陽(yáng)性率高于良性組、健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三組尿液對(duì)羥基苯丙氨酸表達(dá)情況比較［n（%）］Table 2 Comparison of urinary p-hydroxyphenylalanine expression in the three groups［n（%）］

2.3 血清腫瘤標(biāo)志物與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸相關(guān)性

Spearman 相關(guān)性分析，血清CEA、CA125、CA199 與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸（賦值：陰性=1，弱陽(yáng)性=2，陽(yáng)性=3，強(qiáng)陽(yáng)性=4）呈正相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 血清腫瘤標(biāo)志物與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸相關(guān)性Figure 1 Correlation between serum tumor markers and urine p-hydroxyphenylalanine

2.4 血清腫瘤標(biāo)志物、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值

以惡性組作為陽(yáng)性樣本，良性組與健康組作為陰性樣本，繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，血清CEA、CA125、CA199、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸聯(lián)合診斷乳腺癌的AUC 為0.902（95%CI：0.843～0.945），大于各指標(biāo)單獨(dú)診斷（P＜0.05）。見(jiàn)表3、圖2。

表3 血清腫瘤標(biāo)志物、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值Table 3 Diagnostic value of serum tumor markers and urine p-hydroxyphenylalanine in breast cancer

圖2 ROC 曲線圖Figure 2 ROC curve

2.5 血清腫瘤標(biāo)志物、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸與乳腺癌病理特征的關(guān)系

血清CEA、CA125、CA199、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸與腫瘤直徑、分化程度、臨床分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)（P＜0.05），與分子分型無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。見(jiàn)表4。

表4 血清腫瘤標(biāo)志物、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸與乳腺癌病理特征的關(guān)系Table 4 Relationship between serum tumor markers，urine p-hydroxyphenylalanine and pathological characteristics of breast cancer

3 討論

CEA 是目前臨床應(yīng)用最多的腫瘤標(biāo)志物之一，在正常健康人體內(nèi)含量極低，在惡性腫瘤患者血液中急劇升高，能有效反映腫瘤發(fā)生［7］。CA199屬于糖類抗原，主要以唾液蛋白形式存在，可在胰腺、腸道、肝膽管等部位上皮細(xì)胞中表達(dá)，正常生理狀態(tài)下處于低表達(dá)狀態(tài)，在胃癌、肝癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤中上調(diào)表達(dá)［8］。CA125 屬于跨膜黏蛋白，在卵巢、內(nèi)膜、角膜、支氣管等部位上皮細(xì)胞中表達(dá)，異常高表達(dá)在診斷和監(jiān)測(cè)惡性腫瘤進(jìn)展中具有重要意義［9］。臨床研究證實(shí)，血清CEA、CA125、CA199 可作為腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于乳腺癌診斷中，但單一依靠血清腫瘤標(biāo)志物診斷無(wú)法達(dá)到理想的診斷要求，存在不同程度誤漏診現(xiàn)象［10-11］。因此，聯(lián)合多種方式診斷成為提高診斷價(jià)值的重要方法。

報(bào)道顯示，多數(shù)惡性腫瘤患者尿液中酪氨酸含量會(huì)明顯升高［12］。葉秀娟等［13］研究中將尿液對(duì)羥基苯丙氨酸應(yīng)用于胃癌篩查中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其在胃癌患者中呈顯著高表達(dá)，診斷敏感度高達(dá)91.18%，特異度為71.04%，表現(xiàn)出良好的診斷價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，與乳腺良性病變患者、健康女性相比，乳腺癌患者尿液對(duì)羥基苯丙氨酸陽(yáng)性表達(dá)率明顯較高，可見(jiàn)尿液對(duì)羥基苯丙氨酸可應(yīng)用于乳腺癌診斷中。分析原因，一旦人體內(nèi)有惡性腫瘤細(xì)胞活動(dòng)時(shí)，其異常生長(zhǎng)、增殖、分化便會(huì)引起應(yīng)激反應(yīng)，從而導(dǎo)致氨基酸代謝異常，顯著增加尿液中對(duì)羥基苯丙氨酸含量，且其含量增加幅度與癌細(xì)胞代謝活躍程度聯(lián)系緊密［14］。同時(shí)，相關(guān)研究表明，氨基酸代謝異常、尿液中對(duì)羥基苯丙氨酸含量升高可發(fā)生于惡性腫瘤早期，為臨床早期診斷腫瘤性質(zhì)奠定良好基礎(chǔ)［15］。故本研究嘗試探討尿液對(duì)羥基苯丙氨酸診斷乳腺癌價(jià)值，結(jié)果顯示，其診斷乳腺癌的AUC高達(dá)0.860，具有較為良好的診斷價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，血清CEA、CA125、CA199水平與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸表達(dá)呈正相關(guān)，說(shuō)明血清腫瘤標(biāo)志物與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸在乳腺癌中聯(lián)系緊密，可能具有協(xié)同促進(jìn)疾病發(fā)癥的作用。進(jìn)一步分析證實(shí)，血清CEA、CA125、CA199、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸聯(lián)合診斷乳腺癌的價(jià)值明顯優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)診斷，可作為臨床診斷乳腺癌的新途徑、新方向。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，血清CEA、CA125、CA199、尿液對(duì)羥基苯丙氨酸與腫瘤直徑、分化程度、臨床分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，可能與乳腺癌病情進(jìn)展過(guò)程中腫瘤細(xì)胞活動(dòng)加劇有關(guān)。

綜上可知，血清CEA、CA125、CA199 與尿液對(duì)羥基苯丙氨酸聯(lián)合檢測(cè)可作為臨床診斷乳腺癌的重要途徑，且與腫瘤直徑、分化程度、臨床分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等多種病理特征密切相關(guān)，有助于臨床評(píng)估病情進(jìn)展情況。