黑木耳牡耳1號(hào)母種培養(yǎng)基適宜碳氮源篩選

史 磊 王延鋒 王金賀 潘春磊 劉姿彤 盛春鴿 張 鵬 于海洋 趙 靜 董雪梅

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，黑龍江牡丹江 157000）

黑木耳屬擔(dān)子菌綱，木耳目，木耳科，是我國(guó)栽培最早的食用菌之一[1]。碳、氮是食用菌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中最重要的營(yíng)養(yǎng)，碳是真菌的碳素營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，氮是食用菌合成蛋白質(zhì)和核酸的必要元素[2]。目前國(guó)內(nèi)已有報(bào)道碳氮對(duì)雙孢蘑菇、平菇、香菇、草菇、猴頭菌等菌絲生長(zhǎng)和子實(shí)體產(chǎn)量產(chǎn)生影響，但在黑木耳方面相關(guān)研究報(bào)道較少。因此，筆者研究了5種碳源、4種氮源及培養(yǎng)基碳氮比對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響，從而篩選出黑木耳菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源、氮源、碳氮比，為生產(chǎn)者選擇優(yōu)良的母種培養(yǎng)基及制定高產(chǎn)栽培技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

黑木耳（牡耳1號(hào)），由黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院提供。

1.2 供試培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基1為葡萄糖20 g，蛋白胨4 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，復(fù)合VB21片，瓊脂15 g，馬鈴薯200 g，水1 000 mL，pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基2為葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，復(fù)合VB21片，馬鈴薯200 g，水1 000 mL，pH自然。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 碳源試驗(yàn)

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基1中20 g葡萄糖的含碳量為基準(zhǔn)，用相當(dāng)含碳量的果糖、蔗糖、麥芽糖和可溶性淀粉代替供試培養(yǎng)基1中的葡萄糖，配制培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)。測(cè)定5種培養(yǎng)基中黑木耳菌絲的生長(zhǎng)速度，測(cè)定結(jié)果取平均值，并進(jìn)行差異顯著性分析[3]。

1.3.2 氮源試驗(yàn)

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基1中4 g蛋白胨的含氮量為基準(zhǔn)，分別用硫酸銨、尿素和豆粉替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基1中的蛋白胨，配制培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲。單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)。觀察記錄黑木耳菌絲生長(zhǎng)情況，測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度，測(cè)定結(jié)果取平均值，并進(jìn)行差異顯著性分析。

1.3.3 碳氮比試驗(yàn)

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基2中，添加不同量蛋白胨（蛋白胨含碳量忽略不計(jì)）配成不同碳氮比的培養(yǎng)基。單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)。觀察不同碳氮比培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)影響，測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度，測(cè)定結(jié)果取均值，并進(jìn)行差異顯著性分析。

1.4 菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)定方法

以上試驗(yàn)均按常規(guī)方法滅菌，制平皿，冷卻后在無(wú)菌環(huán)境下接種一塊直徑為8 mm的活化牡耳1號(hào)菌絲塊，放置25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，以菌絲體在培養(yǎng)皿中菌落直徑作為菌絲生長(zhǎng)量指標(biāo)，計(jì)算菌絲平均生長(zhǎng)速度。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試碳源對(duì)黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)的影響

圖1 供試碳源培養(yǎng)基上黑木耳（牡耳1號(hào)）菌落形態(tài)（前期萌發(fā)）

由表1可知，果糖培養(yǎng)基中菌絲平均長(zhǎng)速與蔗糖、淀粉培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度差異顯著，與葡萄糖、麥芽糖培養(yǎng)基中菌絲長(zhǎng)速差異不顯著。5種碳源培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)速度在0.01水平上均差異不顯著。供試碳源培養(yǎng)基中菌絲平均生長(zhǎng)速度快慢順序?yàn)楣牵钧溠刻牵酒咸烟牵菊崽牵镜矸?，其中以果糖或葡萄糖為碳源時(shí)，菌落完整、菌絲潔白、濃密、健壯，菌絲生長(zhǎng)良好。因此，黑木耳牡耳1號(hào)菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是果糖，其次為葡萄糖。

表1 供試碳源培養(yǎng)基上黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)情況

2.2 供試氮源對(duì)黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)的影響

從表2可以看出，供試氮源培養(yǎng)基中菌絲平均長(zhǎng)速依次為蛋白胨＞豆粉＞硫酸銨＞尿素，蛋白胨培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)速度最快，與其他幾種氮源培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)速度差異極顯著。以蛋白胨為氮源的菌絲長(zhǎng)勢(shì)最佳，菌落完整，菌絲潔白，濃密，以尿素為氮源的菌絲長(zhǎng)勢(shì)雖然濃密，但是生長(zhǎng)速度極為緩慢。因此，黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)的最佳氮源是蛋白胨。

表2 供試氮源培養(yǎng)基上黑木耳（牡耳1）號(hào)菌絲生長(zhǎng)情況

2.3 培養(yǎng)基碳氮比對(duì)黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)的影響

從表3可以看出，黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲在試驗(yàn)碳氮比的培養(yǎng)基中均可生長(zhǎng)，碳氮比為10∶1、20∶1時(shí)，菌絲濃密，長(zhǎng)勢(shì)良好，但長(zhǎng)速較為緩慢；碳氮比為80∶1、90∶1時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度快，且菌落完整，菌絲潔白、濃密（圖2）。

表3 培養(yǎng)基碳氮比對(duì)黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)影響

圖2 不同碳氮比培養(yǎng)基中黑木耳（牡耳1號(hào)）菌落形態(tài)

3 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，以果糖為碳源的培養(yǎng)基中黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)最佳，其次是以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，以麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基中盡管菌絲生長(zhǎng)速度快，但菌絲長(zhǎng)勢(shì)與以淀粉為碳源的培養(yǎng)基一樣，菌落表現(xiàn)不完整，稀疏。因此，黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)最佳碳源為果糖，其次為葡萄糖。

以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基中黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)最佳，菌落完整，菌絲潔白、濃密、健壯，且生長(zhǎng)速度明顯快于其他幾種供試氮源。因此，黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是蛋白胨。

在試驗(yàn)碳氮比培養(yǎng)基上，黑木耳（牡耳1號(hào)）菌絲均能正常生長(zhǎng)，為10∶1、20∶1、30∶1時(shí)菌絲濃密，但菌絲長(zhǎng)速緩慢，為80∶1、90∶1時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌落完整，菌絲潔白。因此，培養(yǎng)基最適碳氮比為80∶1、90∶1。