前列腺癌患者血液中PSA、TAP、MACC1 的表達及其診斷價值

王 慧，趙 瑩，溫麗蓉，曹 軍，羊繼平，原永明

1.上海市徐匯區(qū)大華醫(yī)院檢驗科，上海 200237；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院檢驗科，上海 200025；3.上海市徐匯區(qū)大華醫(yī)院介入腫瘤科，上海 200237；4.上海市徐匯區(qū)大華醫(yī)院泌尿外科，上海 200237

前列腺癌是發(fā)生在前列腺上皮的惡性腫瘤，是男性第二大癌癥。該病早期無明顯癥狀，隨著疾病的進展可表現(xiàn)為排尿困難、尿流中斷、夜尿增多等，嚴(yán)重者還可侵及膀胱，引起血尿、血精、陽痿，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［1-2］。由于前列腺癌發(fā)病早期癥狀隱匿，導(dǎo)致大多數(shù)患者確診時已是晚期，錯過了最佳治療時間。因此，早期診斷對改善患者預(yù)后具有重要意義［3］。前列腺特異抗原（prostate specific antigen，PSA）由前列腺上皮細(xì)胞分泌，廣泛用于前列腺疾病診斷。有研究［4］顯示，腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）檢測可有效篩查腫瘤高危人群，是病理診斷的“有益補充”，其水平與惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)，可作為評估患者腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)。有研究［5］顯示，前列腺癌患者血液結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1 （colon cancer metastasis related gene 1，MACC1）水平顯著升高，能夠反映前列腺癌的進展，且與疾病的惡性演變、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為預(yù)測前列腺癌進展、判斷惡性程度的潛在血液生物標(biāo)志物。PSA檢測用于前列腺癌診斷已有大量研究，也是前列腺癌診斷的標(biāo)志物之一，但與TAP、MACC1 聯(lián)合用于前列腺癌診斷的相關(guān)報道較少。因此，本研究擬探討血液PSA、TAP 及MACC1聯(lián)合檢測對前列腺癌的診斷價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象及其資料收集

回顧性分析2019 年1 月—2020 年12 月上海市徐匯區(qū)大華醫(yī)院收治的107 例前列腺癌患者（病例組）病歷資料，包括Gleason 評分、T 分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。患者平均年齡（58.37±5.29）歲；均參照《中國前列腺癌放射治療指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，經(jīng)穿刺病理活檢確診，且合并排尿異常、勃起障礙等癥狀。納入標(biāo)準(zhǔn)：心、腦、腎等器官無明顯障礙；無胰島素治療史；相關(guān)指標(biāo)數(shù)據(jù)完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期接受過正規(guī)免疫調(diào)節(jié)劑治療；心功能異常；近3 個月有嚴(yán)重創(chuàng)傷或者接受過手術(shù)；有嚴(yán)重自身免疫性疾病；需要腎臟移植；日常生活能力喪失，完全依賴協(xié)助護理；無法言語交流。

另選取同期在該院進行健康體檢的60 名男性健康體檢者作為對照組，平均年齡（58.19±7.38）歲。2組平均年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 PSA、MACC1 及TAP 檢 測 方 法 ①PSA、MACC1 檢測：采集所有患者入院后治療前、健康體檢者體檢當(dāng)日的空腹靜脈血5 mL，以2 319×g離心10 min，分離血清，置于離心管中，冷凍保存；其中PSA 采用美國Abbott I4000 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀進行檢測；MACC1 采用美國Cell Signaling Technology公司酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，均嚴(yán)格按照儀器及試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行檢測。②TAP檢測：采集所有患者入院后治療前、健康體檢者體檢當(dāng)日新鮮EDTA 抗凝靜脈血2 mL，取25 μL在玻片上制作成厚薄均勻的血涂片，晾干后垂直均勻滴加TAP 試劑3滴，形成圓形斑點顆粒，采用浙江瑞生RS-2011ATAP 集成閱片儀采集顆粒圖片并測量斑點顆粒面積，按檢測說明書進行結(jié)果判讀。

1.2.2 Gleason 評分和T 分期 參照《前列腺癌規(guī)范化標(biāo)本取材及病理診斷共識》（2021 版）［7］，由病理科醫(yī)師根據(jù)病理結(jié)果進行Gleason 評分；參照《惡性腫瘤的TNM分類法》［8］對腫瘤進行T分期。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 24.0 軟件進行統(tǒng)計分析。呈正態(tài)分布的定量資料以±s表示，2 組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用方差分析。采用Spearman 相關(guān)性分析評估各項目與Gleason評分和T分期的相關(guān)性。采 用 受 試 者 操 作 特 征 （receiver operating characteristic，ROC） 曲線評價血液PSA、TAP 及MACC1 診斷前列腺癌的效能。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組血液PSA、TAP及MACC1表達結(jié)果分析

病例組患者血液PSA、TAP 及MACC1 水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 2組患者血液PSA、TAP及MACC1水平比較（±s）Tab 1 Comparison of blood PSA，TAP and MACC1 levels between the two groups（±s >）

表1 2組患者血液PSA、TAP及MACC1水平比較（±s）Tab 1 Comparison of blood PSA，TAP and MACC1 levels between the two groups（±s >）

Case group（n=107）Control group（n=60）t value P value 14.35±5.13 4.16±1.34 15.082 0.000 174.58±19.63 74.29±8.04 37.796 0.000 52.41±12.89 29.84±6.33 12.718 0.000

2.2 血液PSA、TAP 及MACC1 水平與臨床病理特征的關(guān)系

隨著Gleason 評分的升高，前列腺癌患者血液中PSA、TAP 及MACC1 水平逐漸升高；隨著T 分期的進展，患者血液PSA、TAP 及MACC1 水平也逐漸升高；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者PSA 和MACC1 水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P<0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血液TAP 水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P<0.05）。詳見表2。

表2 患者血液PSA、TAP及MACC1水平與臨床病理特征的關(guān)系分析（±s）Tab 2 Analysis of the relationship between PSA，TAP，MACC1 and clinicopathology in the case group（±s ）

表2 患者血液PSA、TAP及MACC1水平與臨床病理特征的關(guān)系分析（±s）Tab 2 Analysis of the relationship between PSA，TAP，MACC1 and clinicopathology in the case group（±s ）

Clinic pathologic feature n PSA/（μg?L-1）TAP/μm2 MACC1/（ng?mL-1）Age<65 years≥65years t/F value P value Gleason score 2-4 score 5-7 score 8-10 score t/F value P value T satge T1 T2 T3-T4 t/F value P value Lymphatic metastasis Yes No t/F value P value 54 53 14.15±5.08 14.55±5.26 0.400 0.689 175.54±20.15 173.60±20.25 0.467 0.620 52.18±12.91 52.64±13.07 0.183 0.855 7 48 52 9.25±4.12 14.08±5.03 19.31±5.19 20.599 0.000 148.34±18.58 172.18±19.22 201.41±19.34 42.023 0.000 39.95±10.23 50.89±12.83 65.66±13.04 23.543 0.000 29 47 31 9.14±3.26 14.19±4.89 17.79±4.93 27.629 0.000 146.12±19.12 168.58±19.58 199.37±20.12 56.084 0.000 40.16±10.25 51.97±12.78 60.58±12.83 21.247 0.000 62 45 16.58±6.12 11.28±5.89 4.492 0.000 121.48±20.59 147.07±19.87 6.439 0.000 73.53±6.58 37.08±5.03 31.127 0.000

2.3 血液PSA、TAP 及MACC1 診斷前列腺癌的效能

血液PSA 診斷前列腺癌的ROC 曲線下面積（area under the curve，AUC） 為0.764，靈 敏 度 為86.12%，特異度為88.63%，截斷值為6.01μg/L；血液TAP 診斷前列腺癌的AUC 為0.796，靈敏度為88.18%，特異度為89.58%，截斷值為135.62 μm2；血液MACC1 診斷前列腺癌的AUC 為0.873，靈敏度為78.46%，特異度為80.10%，截斷值為37.80 pg/mL；3 項指標(biāo)聯(lián)合檢測的AUC 為0.941，靈敏度為93.15%，特異度為94.08%，均高于各單項指標(biāo)（P<0.05）。詳見圖1。

圖1 血液PSA、TAP及MACC1診斷前列腺癌的ROC曲線Fig 1 ROC curve of blood PSA, TAP and MACC1 in predicting prostate cancer

2.4 血液PSA、TAP及MACC1水平與Gleason評分、T分期的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血液PSA、TAP及MACC1 水平均與Gleason 評分呈正相關(guān)（r值分別為0.648、0.513和0.501，均P=0.000），與T分期呈正相關(guān)（r值分別為0.616、0.537 和0.542，均P=0.000）。

3 討論

前列腺癌是臨床上較常見的男性惡性腫瘤，通常好發(fā)于中老年男性。隨著人們生活水平的提高和人口老齡化，亞洲國家的前列腺癌發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，甚至危及患者生命。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)統(tǒng)計，2020 年中國前列腺癌發(fā)病率約15.6/100 000，新發(fā)病例超11 萬，死亡人數(shù)超5萬［9］。由于前列腺癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已開始轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后不良。因此，早期發(fā)現(xiàn)和診斷前列腺癌，始終是臨床研究的熱點。

PSA是激肽酶家族蛋白，主要由前列腺上皮細(xì)胞分泌，正常時僅有極低水平的PSA 存在于血液中，血液中PSA 水平的升高預(yù)示前列腺發(fā)生病理變化或受到創(chuàng)傷。在絕大多數(shù)前列腺癌患者中，PSA水平升高，因此PSA 是診斷前列腺癌的首選標(biāo)志物［10-11］。但PSA 無腫瘤特異性，在前列腺增生和前列腺炎患者中均升高。PSA 在血液中主要存在結(jié)合與非結(jié)合2種形式，血液中大部分PSA 與多種內(nèi)源性蛋白酶抑制劑相結(jié)合形成復(fù)合PSA，如與α1-抗糜蛋白酶（α 1-antichymotrypsin，α1-ACT） 結(jié)合構(gòu)成PSA-ACT，是血液中復(fù)合PSA 的主要構(gòu)成形式，也是目前免疫學(xué)方法能檢測到的主要成分。因其他幾種結(jié)合形式的抗原決定簇被人α2-巨球蛋白所掩蔽，不能被PSA 檢測抗體所識別，剩余少部分PSA 在血液中處于游離狀態(tài)，成為游離PSA（free-PSA，fPSA）。因此，臨床檢測的總前列腺特異性抗原（total prostate-specific antigen，tPSA）僅是fPSA 與PSA-ACT 之和。tPSA和fPSA 在血液中的半衰期只有幾個小時，且隨著時間的推移，穩(wěn)定性下降，尤其是fPSA更不穩(wěn)定。

TAP是近年來發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞癌變初期致癌因子促發(fā)原癌基因和抑癌基因突變后的腫瘤標(biāo)志物。在細(xì)胞開始惡化時，細(xì)胞膜表面的聚糖結(jié)構(gòu)發(fā)生異常，導(dǎo)致TAP 大量釋放入體液中，其已在乳腺癌、胃癌等疾病篩查及預(yù)后中得到廣泛應(yīng)用［12-13］。有研究［14］顯示，TAP水平與惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)，可作為評估患者腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)。

MACC1是在結(jié)腸癌中與轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，是結(jié)腸癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移和生存預(yù)后的預(yù)測因子。MACC1 主要通過促進腫瘤血管形成及激活相關(guān)信號通路等來維持惡性腫瘤的侵襲性［15］。有研究［16］顯示，MACC1 可誘導(dǎo)結(jié)腸腫瘤細(xì)胞在肺、肝臟出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，前列腺癌患者血液PSA、TAP 及MACC1 水平顯著高于健康人群，提示PSA、TAP 及MACC1 可作為診斷前列腺癌的重要標(biāo)志物。PSA具有組織特異性，只存在于人前列腺腺泡及導(dǎo)管上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中，不表達于其他細(xì)胞；但無腫瘤特異性，前列腺炎、良性前列腺增生和前列腺癌均可導(dǎo)致tPSA 水平升高。TAP 為腫瘤細(xì)胞增殖過程中細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)中的N-鏈聚糖分支，在惡性腫瘤發(fā)生后，該物質(zhì)大量釋放入血液。MACC1 則通過參與相關(guān)血管生成因子的分泌，促進腫瘤血管的形成。本研究ROC 曲線分析結(jié)果進一步顯示，這3 項指標(biāo)的聯(lián)合檢測效能顯著優(yōu)于單項檢測。

Gleason評分是常用的前列腺癌組織學(xué)分級方法，對評估前列腺腫瘤的惡性程度、判斷腫瘤侵襲程度具有重要的參考價值［17］。本研究結(jié)果顯示，血液中PSA、TAP 及MACC1 可隨著Gleason 評分及T 分期的升高而升高，可作為評估疾病嚴(yán)重程度的參考指標(biāo)。本研究進一步進行Spearman 相關(guān)分析，結(jié)果顯示血液中PSA、TAP 及MACC1 水平與Gleason 評分、T 分期均呈正相關(guān)。分析其原因，可能是因為前列腺癌T分期、Gleason評分越高，癌組織侵襲范圍越大，導(dǎo)致前列腺結(jié)構(gòu)受損更嚴(yán)重，淋巴管壁結(jié)構(gòu)破壞更大，促使PSA彌散進入血液量增多，導(dǎo)致PSA等水平升高。

總之，血液中PSA、TAP 及MACC1 水平均與前列腺癌Gleason 評分和T 分期之間關(guān)系密切，對診斷前列腺癌有重要的臨床參考價值，且3 項聯(lián)合檢測價值更高。但本研究屬于單中心小樣本研究，未來仍需進一步擴大樣本采集量；同時，也需進一步開展前瞻性研究，以闡明血液中PSA、TAP 及MACC1 在前列腺癌發(fā)生中的相關(guān)機制。

利益沖突聲明/Conflict of Interests

所有作者聲明不存在利益沖突。

All authors disclose no relevant conflict of interests.

倫理批準(zhǔn)和知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究涉及的所有實驗均已通過上海市徐匯區(qū)大華醫(yī)院倫理委員會的審核批準(zhǔn)（審批號：20210810）。所有實驗過程均遵照《藥物臨床試驗倫理審查工作指導(dǎo)原則》的條例進行。受試對象或其親屬已經(jīng)簽署知情同意書。

All experimental protocols in this study were reviewed and approved by the ethics committee of Dahua hospital， Xuhui District，Shanghai （approval No. 20210810）， and all experiments were conducted in accordance with the regulations of the guiding principles for ethical review of drug clinical trials. The subjects or their relatives have signed the informed consent form.

作者貢獻/Authors'Contributions

王慧、原永明、曹軍參與了研究設(shè)計；王慧、趙瑩、溫麗蓉、羊繼平參與了論文的寫作和修改；所有作者均閱讀并同意了最終稿件的提交。

WANG Hui， YUAN Yongming and CAO Jun participated in the experimental design.WANG Hui， ZHAO Ying， WEN Lirong and YANG Jiping participated in the writing and revision of the paper.All the authors have read the last version of paper and consented for submission.

·Received：2021-12-13

·Accepted：2022-03-09

·Published online：2022-04-28