右旋糖酐鐵分散片安全試驗(yàn)評價研究

張俊明 周艷艷 王麗華 伍錫棟 鄭國安 黎硯書

關(guān)鍵詞：右旋糖酐鐵分散片;急性毒性試驗(yàn);長期毒性試驗(yàn)

【中圖分類號】 ?R4【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）15--02

本品主要成份為右旋糖酐鐵，為氫氧化鐵與重均分子量（Mw）5000～7500的右旋糖酐的絡(luò)合物。缺鐵性貧血是一種常見的臨床疾病，是貧血類型中最常見，對患者的身心健康、兒童的生長發(fā)育、孕婦孕育過程自身的健康及胎兒的生長發(fā)育有著極大的影響，嚴(yán)重者危及生命[1]-[6] ，通過不同途徑的補(bǔ)充或是增加機(jī)體對鐵的吸收、儲存和利用，減少或避免缺鐵性貧血造成的嚴(yán)重后果。臨床一般采用口服補(bǔ)鐵比較多，尤其是對于兒童及孕產(chǎn)婦滿足機(jī)體的需要，右旋糖酐鐵分散片是口服應(yīng)用比較廣泛的第三代口服補(bǔ)鐵劑，臨床研究其在體內(nèi)易吸收、療效好，不良反應(yīng)少等的優(yōu)勢，尤其是長期用藥耐受較好，聯(lián)合用藥療效更明顯[7] ?，為論證其長期服用引起的安全性問題，本實(shí)驗(yàn)觀察右旋糖酐鐵分散片灌胃給藥對小鼠產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和對大鼠產(chǎn)生的長期毒性反應(yīng)，為臨床安全用藥提供劑量信息及防范不良反應(yīng)監(jiān)測提供依據(jù)。

1 材料

1.1動物

SPF級ICR小鼠，6～7周齡，雌雄各半，18～22g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2016-0002，合格證號：NO.4300470042533;SPF級Wistar大鼠，6～7周齡，雌雄各半，80～120g，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2014-0010，合格證號：NO43006700016508，動物使用許可證號：SCXK（贛）2018-0008。

1.2藥物

右旋糖酐鐵分散片 批號：170424，25mg/片，江西華太藥業(yè)有限公司提供

1.3儀器

AU480全自動生化分析儀，貝克曼庫爾特株氏會社;獸用全自動血液細(xì)胞分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;徠卡TP1020脫水機(jī)、徠卡HI1210攤片機(jī)、徠卡RM2126輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，均由上海徠卡儀器有限公司。

2 方法

2.1 急性毒性試驗(yàn)

選合格SPF級ICR小鼠40只，按體重隨機(jī)分為對照組和右旋糖酐鐵分散片3000mg.kg-1組，每組20只，雌雄各半，1日內(nèi)分3次灌胃給藥，間隔4h，每次給藥量40ml.kg-1，給藥后觀察各組動物的毒性反應(yīng)及死亡數(shù)情況，每天1次，連續(xù)觀察14d，觀察期結(jié)束后的動物進(jìn)行大體解剖，觀察腹腔、盆腔、胸腔、頸部、心、肝、脾、肺、腎及腦等主要臟器及組織的變化，對有異常的臟器及組織取出進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2.2 長期毒性試驗(yàn)

選合格SPF級Wistar大鼠200只，按體重隨機(jī)分為對照組、右旋糖酐鐵分散片右旋糖酐鐵分散片93.8、187.5及375.0mg.kg-1劑量組，每組50只大鼠，雌雄各半。對照組給予純化水，給藥組給予相應(yīng)組別的右旋糖酐鐵分散片混懸液，每天給藥1次，每周給藥6天，連續(xù)灌胃給藥6個月，試驗(yàn)期間每天定時觀察動物外觀體征、行為活動、腔道分泌物、呼吸、二便及給藥后其它毒性反應(yīng)，每周定期測定攝食量及體重，于給藥后3個月、6個月各組均取20只動物，停藥后1個月各組均取10只動物，均雌雄各半，麻醉后腹腔動脈采血制備全血及血清標(biāo)本，分別進(jìn)行血常規(guī)及生化指標(biāo)檢測，解剖觀察、取臟器、稱濕重，計算臟器系數(shù)，臟器用4%甲醛溶液固定、包埋、切片及HE染色后進(jìn)行組織學(xué)病理學(xué)檢查。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

用DAS3.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（x±s），進(jìn)行組間t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)分析。

3 結(jié)果

3.1 右旋糖酐鐵分散片急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

給藥期間及連續(xù)觀察14d，各組小鼠一般狀況、自主活動無異常，生理腔道未見異常分泌物。觀察期試驗(yàn)組小鼠均存活，未見明顯毒性反應(yīng)癥狀，解剖觀察重要臟器心、肝、脾、肺、腎及腦未發(fā)現(xiàn)異常;雄性小鼠第2d體質(zhì)量減輕，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），雌性小鼠體質(zhì)量與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），結(jié)果見表1;觀察期試驗(yàn)組小鼠每天每只攝食量與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），見表2。

3.2 右旋糖酐鐵分散片長期毒性試驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 右旋糖酐鐵分散片對大鼠一般情況的影響

試驗(yàn)給藥期間各組大鼠精神狀態(tài)、外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸均未見異常，各組大鼠均無死亡，無毒性癥狀出現(xiàn)，停藥后各項(xiàng)觀察指標(biāo)均未見異常改變。

3.2.2 右旋糖酐鐵分散片對大鼠體重及攝食量的影響

試驗(yàn)期間與對照組比較，大鼠體質(zhì)量增長變化無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），結(jié)果見表3 ;試驗(yàn)組大鼠給藥早期給藥組攝食量較對照組有增加的趨勢，給藥后期較對照組有減少的趨勢，停藥后給藥組大鼠有增加的趨勢。

血液學(xué)指標(biāo)試驗(yàn)組雄性大鼠試驗(yàn)期血液學(xué)指標(biāo)無異常，與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）;試驗(yàn)組雌性大鼠給藥3個月中、高劑量組WBC計數(shù)減少，給藥6個月中、高劑量組PLT計數(shù)增加，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），停藥后均能恢復(fù)，結(jié)果見表4、5。

3.2.4 右旋糖酐鐵分散片對大鼠生化指標(biāo)的影響

生化指標(biāo)試驗(yàn)組雄性大鼠肝及腎功能檢測值無明顯異常，與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），血糖及血清離子代謝出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），但均無生物學(xué)意義;雌性大鼠肝功能中劑量組給藥6個月中劑量TP減少，停藥后TP及ALB均增加，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。

3.2.5 右旋糖酐鐵分散片對重要臟器系數(shù)及組織形態(tài)學(xué)的影響

給藥3個月、6個月及停藥1個月，對各組大鼠臟器進(jìn)行規(guī)范的剖檢，肉眼觀察未見異常器官組織;臟器系數(shù)試驗(yàn)組雄性大鼠中劑量組給藥3個月脾臟系數(shù)增加，中劑量組給藥6個月心臟系數(shù)減少，雌性大鼠中劑量組心臟系數(shù)減少，停藥后低劑量組腎臟和子宮系數(shù)增加與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）;組織病理學(xué)檢查對照組及高劑量組主要病變?yōu)楦渭?xì)胞的空包變性、點(diǎn)及灶狀壞死，心臟心肌細(xì)胞局灶性變性及慢性炎細(xì)胞浸潤，但發(fā)生率及病變程度對照組與高劑量組間無明顯區(qū)別。

4 討論

右旋糖酐鐵分散片是臨床用量比較多的補(bǔ)充缺鐵性貧血，作為第三代具有明顯優(yōu)勢的口服制劑，臨床研究較多的是療效、長期用藥的耐受性及不同人群用藥過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)，而對于用藥安全性方面研究的報道較少，通過對其臨床前試驗(yàn)研究我們發(fā)現(xiàn)如下。

小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)，右旋糖酐鐵分散片大劑量灌胃給予，小鼠耐受性比較好，在灌胃給藥劑量達(dá)到3000mg.kg-1，相當(dāng)于臨床60kg成人用藥劑量（5mg.kg-1）的600倍時，用藥后的小鼠未出現(xiàn)明顯急性毒性作用，后期的觀察也未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性臨床癥狀，但對于缺鐵性的模型能否耐受大劑量有待進(jìn)一步去考察研究。

大鼠反復(fù)灌胃給藥毒性試驗(yàn)，連續(xù)6個月灌胃給予較大劑量的右旋糖酐鐵分散片，發(fā)現(xiàn)長期用藥大鼠體質(zhì)量正常增長，給藥早期大鼠攝食量有增加的趨勢，后期有減少的趨勢，停藥后能夠恢復(fù)，提示用藥早期補(bǔ)鐵劑的增加有利于大鼠對攝食的增加，給藥后期隨著機(jī)體對需鐵量的內(nèi)外平衡及給藥容量的增加對攝食量有影響，停藥后能夠恢復(fù);長期補(bǔ)鐵對大鼠血液學(xué)影響不明顯，尤其是補(bǔ)鐵后的RBC和HGB2個指標(biāo)的檢測值，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)過程中和對照組無明顯的區(qū)別，無統(tǒng)計學(xué)意義，無明顯的劑量相關(guān)性，停藥后也無明顯的數(shù)值變化（p>0.05），提示對正常發(fā)育的大鼠在試驗(yàn)過程中，長期給予補(bǔ)鐵劑，對RBC和HGB無明顯影響;長期補(bǔ)鐵對大鼠血清生化檢測值影響不明顯，對應(yīng)各臟器的功能無明顯影響，另從試驗(yàn)各觀察期解剖大體觀察無明顯異常，個別臟器系數(shù)在不同觀察期出現(xiàn)增加或減少的情況（p<0.05），但從組織病理學(xué)未發(fā)現(xiàn)于此相關(guān)的異常結(jié)果，提示與試驗(yàn)藥物無明確的相關(guān)性。長期毒性試驗(yàn)在187.5mg.kg-1（相當(dāng)于臨床用藥量的37.5倍）以上時，血液學(xué)出現(xiàn)WBC計數(shù)減少、PLT計數(shù)增加，停藥后能恢復(fù)，其余血液學(xué)指標(biāo)及主要肝腎功能檢測無明顯異常，病理學(xué)主要為肝空泡變性、肝點(diǎn)灶狀壞死及炎性細(xì)胞浸潤，心臟的局灶性壞死及炎性細(xì)胞浸潤，這些組織病理學(xué)改變在對照組與給藥組間無明顯區(qū)別，可能與大鼠正常衰老有關(guān)。另肝是各種物質(zhì)代謝潔場所，未發(fā)現(xiàn)其它明顯的與給藥相關(guān)的器質(zhì)性改變，提示在187.5mg.kg-1以下劑量組給藥無明顯毒性反應(yīng)，用藥相對是安全的。

綜上所述，右旋糖酐鐵分散片大劑量灌胃給予小鼠3000mg.kg-1劑量時，無明顯毒性反應(yīng)，大鼠長期毒性試驗(yàn)灌胃給187.5mg.kg-1以下時，無明顯的毒性反應(yīng)，對長期口服補(bǔ)鐵的患者相對是安全的。有研究報道血清鐵蛋白過高會加重原有肝性疾病的程度，長期口服補(bǔ)鐵劑對于血清及主要貯鐵臟器中含鐵量的變化有無明顯的影響，將會進(jìn)一步研究分析及另行撰文。

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基金項(xiàng)目：江西省藥品監(jiān)督管理局科研項(xiàng)目，基金編號：2019JS37