三磷酸腺苷（ATP）熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)在醫(yī)務(wù)人員手表面微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果

王鯤

北大醫(yī)療魯中醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東淄博 255400

在臨床發(fā)展中，醫(yī)務(wù)人員是與患者進(jìn)行直接接觸的主要人員，導(dǎo)致醫(yī)護(hù)人員的手表面微生物污染問題較為嚴(yán)重，患者很容易出現(xiàn)感染疾病的情況，不利于患者治療效果的增強(qiáng)，甚至?xí)?dǎo)致患者發(fā)生院內(nèi)感染和多重耐藥菌感染等問題。在此基礎(chǔ)上，對(duì)醫(yī)護(hù)人員的手表明微生物進(jìn)行檢測(cè)尤為重要。以往發(fā)展中，其通常是應(yīng)用細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行，可實(shí)現(xiàn)對(duì)醫(yī)護(hù)人員手部微生物的有效評(píng)估和檢測(cè)，但是該方法在實(shí)際使用過程中，不僅操作時(shí)間相對(duì)較長，而且進(jìn)行操作的環(huán)境較為復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)效果具有不良影響[1]。臨床中應(yīng)用三磷酸腺苷生物熒光法，對(duì)于醫(yī)務(wù)人員的手表面微生物檢驗(yàn)的效果顯著。該研究選擇2019年12月—2020年12月期間該院50名醫(yī)務(wù)人員為例，分析應(yīng)用三磷酸腺苷生物熒光法的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院職醫(yī)務(wù)人員50名，其中男21名，女29名；年齡23～50歲，平均（37.34±2.34）歲；護(hù)理人員28名，醫(yī)生13名，醫(yī)技人員9名。該研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：醫(yī)護(hù)人員均為該院在職人員；依從性較好；知情相關(guān)研究并愿意參與其中。

排除標(biāo)準(zhǔn)：人員依從性較差，難以有效配合相關(guān)研究；人員與患者接觸較少。

1.2 方法

給予所有人員ATP熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)，同時(shí)將微生物培養(yǎng)方法檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用。在具體實(shí)施過程中，主要使用Biotech BT-112D型生物熒光快速檢測(cè)儀，并使用BioThema 266-112型ATP生物檢測(cè)試劑盒，同時(shí)采用ATP提取劑、裂解液、熒光素梅和ATP標(biāo)準(zhǔn)品等。

對(duì)菌懸液進(jìn)行制備，主要以金黃色葡萄球菌為主，將其單個(gè)金黃色葡萄球菌菌落進(jìn)行應(yīng)用，將其放置在普通的陰陽瓊脂培養(yǎng)基上，選取斜面進(jìn)行接種，對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，需要將溫度控制在37℃，并在保溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)24 h后，促進(jìn)細(xì)菌懸液的制備，主要采用生理鹽水對(duì)其進(jìn)行處理，將新鮮斜面上的培養(yǎng)物制作成細(xì)菌懸液，從而進(jìn)行微生物培養(yǎng)法的檢測(cè)工作。

ATP生物熒光法檢測(cè)：應(yīng)用Uitansnap ATP采樣器，對(duì)醫(yī)務(wù)人員的手指進(jìn)行采樣，采樣部位為手指屈側(cè)，主要通過往返涂擦的方式完成采樣，隨后將所采樣的棉試紙插入到取樣器中，將其取樣器上方的塑料閥門進(jìn)行折斷處理，對(duì)其反應(yīng)液進(jìn)行震蕩處理，在反應(yīng)液得以充分反應(yīng)后，將其放置到ATP生物熒光檢測(cè)儀中，使其在容器中反應(yīng)15 s作用，隨后對(duì)其反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行記錄分析，并對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行記錄。

微生物培養(yǎng)法檢測(cè)：將《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》作為主要操作規(guī)范，根據(jù)具體規(guī)章制度和行為規(guī)范，將采樣棉進(jìn)行應(yīng)用，蘸取采樣液，對(duì)醫(yī)務(wù)人員的指跟向指尖進(jìn)行涂抹，往返操作，完成后，將其放置在無菌條件下，隨后剪短棉試紙，將其放入10 mL的采樣液中，促進(jìn)其充分混勻，進(jìn)行震蕩，隨后選取適量的洗脫液，將其放置在無菌的平皿中進(jìn)行培育，培養(yǎng)溫度為37℃，采用恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為48 h，對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)記錄。

結(jié)果換算：將得出的不同濃度的金黃色葡萄球菌懸液進(jìn)行制備，制備劑量為50μL，將其放置在離心管中，保證為無菌容器，隨后在其中加入裂解液，裂解液的容量為50μL，將其溶液混勻，隨后放置在室溫環(huán)境中，靜置10 min左右，在其中加入熒光素，熒光素的劑量為400μL，將其快速混勻，隨后應(yīng)用Biotech生物熒光快速檢測(cè)儀，對(duì)其RLU值進(jìn)行第一次測(cè)定（M1），隨后在其中加入ATP標(biāo)準(zhǔn)品，劑量為10μL，進(jìn)行第二次的RLU測(cè)定（M2），對(duì)其ATP含量進(jìn)行測(cè)定，主要以5M1/(M2-M1)×105為主。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷，在結(jié)果顯示為手部的細(xì)菌總數(shù)在10 cfu/cm2以下時(shí)為合格，在采用ATP生物熒光檢測(cè)法時(shí)，其結(jié)果顯示為1 amol/cm2以下時(shí)為合格。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分率（%）表示，組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 金黃色葡萄球菌群含量和ATP含量的關(guān)系分析

在其菌數(shù)增加時(shí)，ATP含量增加。見表1。

表1 金黃色葡萄球菌群含量和ATP含量的關(guān)系

2.2 兩種檢測(cè)方法的手衛(wèi)生評(píng)估情況

在完成相關(guān)工作后的醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生檢測(cè)中，進(jìn)行微生物培養(yǎng)，其菌數(shù)為（21.22±2.65）cfu/cm2，采用ATP生物法檢驗(yàn)后，得出ATP含量為（1.82±0.32）amol/cm2，ATP生物檢驗(yàn)法洗手前后合格率分別為26.00%和60.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.791,P=0.001）,兩種檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)結(jié)果具有一致性，檢驗(yàn)方法均有效。

表2 兩種檢測(cè)方法對(duì)洗手前后醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生合格率情況的評(píng)估結(jié)果分析[n(%)]

3 討論

在醫(yī)院發(fā)展過程中，醫(yī)務(wù)人員的手部微生物污染情況較為常見，其很容易導(dǎo)致患者出現(xiàn)安全風(fēng)險(xiǎn)問題，在一定程度上增加了醫(yī)院的交叉感染發(fā)生率，對(duì)院內(nèi)感染的影響較大。在這種情況下，促進(jìn)醫(yī)院發(fā)展，將醫(yī)務(wù)人員的手部微生物污染情況進(jìn)行評(píng)估尤為重要的[2]。醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生消毒是對(duì)醫(yī)院感染問題進(jìn)行預(yù)防的主要措施，尤其針對(duì)基礎(chǔ)傳播疾病的預(yù)防來說，其衛(wèi)生消毒是一種經(jīng)濟(jì)、方便的方法。在實(shí)際發(fā)展中，要想提高醫(yī)務(wù)人員的手部衛(wèi)生依從性，還需要醫(yī)院為醫(yī)務(wù)人員購買快速、簡單、有效的消毒液，并將其放置在手術(shù)間，物品間和門崗等位置，保證方便易取，并將吸收方法進(jìn)行張貼，給予各種洗手提示，從而保證將醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生依從性進(jìn)行有效提高[3]。但是根據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，醫(yī)務(wù)人員的洗手次數(shù)雖然得到了提高，但是其對(duì)應(yīng)的細(xì)菌培養(yǎng)合格率卻相對(duì)較低，表明部分醫(yī)務(wù)人員在洗手的過程中，并不按照規(guī)范的洗手步驟操作，尤其針對(duì)急診，連臺(tái)手術(shù)時(shí)間相對(duì)緊迫，其感染風(fēng)險(xiǎn)更高。要想將醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生習(xí)慣進(jìn)行強(qiáng)化，提高其手衛(wèi)生措施的執(zhí)行率和正確率，需要對(duì)患者的手衛(wèi)生質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估[4-6]。在臨床發(fā)展中，對(duì)醫(yī)務(wù)人員的手部微生物情況進(jìn)行評(píng)估檢測(cè)的主要方法為微生物培養(yǎng)法，這種傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)方法，雖可將手衛(wèi)生消毒后的細(xì)菌殘存量進(jìn)行反映，但需要消毒專業(yè)人員的檢驗(yàn)技能相當(dāng)熟練，并且對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間較長，需要在48 h后才能出結(jié)果[7-8]，其在實(shí)際發(fā)展過程中，會(huì)受到患者自身因素的影響，導(dǎo)致其使用受到限制，對(duì)臨床應(yīng)用造成不良影響。在我國醫(yī)學(xué)技術(shù)得以不斷發(fā)展的情況下，相關(guān)研究不斷深入，臨床逐漸應(yīng)用ATP生物熒光法的檢測(cè)，對(duì)醫(yī)療器械、醫(yī)務(wù)人員和相關(guān)物體表面的微生物進(jìn)行檢測(cè)[9-11]。

ATP熒光微生物檢測(cè)方法的主要使用原理為所有微生物機(jī)體內(nèi)其ATP的可見程度不一，對(duì)其進(jìn)行熒光素酶的催化，從而使其與ATP發(fā)生一定反應(yīng)，表現(xiàn)為具有熒光的熒光素氧化產(chǎn)物[12]。與此同時(shí)，熒光強(qiáng)度會(huì)對(duì)體內(nèi)ATP含量造成影響，在其出現(xiàn)升高情況時(shí)，表現(xiàn)為增強(qiáng)，從而可將人體的微生物含量進(jìn)行有效反映，其也是對(duì)人體進(jìn)行檢測(cè)的重要指標(biāo)[13]。根據(jù)相關(guān)研究顯示，在將ATP熒光微生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用時(shí)，對(duì)應(yīng)的ATP熒光微生物檢測(cè)方法在醫(yī)療器械清洗方面的效果較好，其與傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)方法進(jìn)行比較時(shí)差異較小，表明ATP熒光微生物檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用價(jià)值較高[14]。研究顯示，將ATP熒光檢測(cè)方法進(jìn)行應(yīng)用，對(duì)人員洗手前后的合格率進(jìn)行分析，分別為30.00%和60.00%，數(shù)據(jù)前后對(duì)比差異大，表明ATP熒光檢測(cè)法較好。其他學(xué)者將ATP熒光檢測(cè)法與微生物培養(yǎng)法分別使用，對(duì)其洗手前后的合格率進(jìn)行分析，ATP熒光檢測(cè)法的合格率分別為26.00%和58.00%(P＜0.05），而微生物檢驗(yàn)前后的合格率則分別為28.00%和44.00%（P＜0.05），表明ATP熒光檢測(cè)法效果顯著[15]。該研究應(yīng)用該方法后，其結(jié)果顯示：金黃色葡萄球菌菌數(shù)表增加時(shí)，ATP含量增加。ATP生物檢驗(yàn)法洗手前后合格率則分別為26.00%和60.00%（P<0.05）。表明ATP熒光微生物檢測(cè)方法的使用，在醫(yī)務(wù)人員手表面微生物的評(píng)估中意義顯著，檢出率較高，臨床應(yīng)用可靠性較強(qiáng)，在將該檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用過程中，其檢測(cè)方法較為便捷，可實(shí)現(xiàn)快速取樣，而且檢測(cè)速度較快，反應(yīng)速度快，具有較高的靈敏度，可縮短檢測(cè)時(shí)間，在臨床中的推廣價(jià)值較為顯著。與此同時(shí)，其技術(shù)的使用還改善和彌補(bǔ)24 h培養(yǎng)技術(shù)的滯后性，對(duì)臨床指導(dǎo)工作意義顯著。

外科、醫(yī)務(wù)人員的日常工作量相對(duì)較大，工作任務(wù)繁重，很容易導(dǎo)致手衛(wèi)生問題被忽視，進(jìn)而會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的傳播。在一般情況下，行政人員與臨床的接觸相對(duì)較少，因此該科室的手衛(wèi)生感染發(fā)生率相對(duì)較低。因此，醫(yī)院的外科和醫(yī)技科室的醫(yī)務(wù)人員對(duì)應(yīng)的手衛(wèi)生合格率較低。而行政科室最高。對(duì)人員展開現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)醫(yī)技科室的醫(yī)務(wù)人員常出現(xiàn)的手衛(wèi)生問題有不戴手套，完成工作后未按要求洗手等。根據(jù)研究數(shù)據(jù)顯示，偶爾進(jìn)行洗手人員的手衛(wèi)生情況優(yōu)于未進(jìn)行洗手人員的手衛(wèi)生。因此，醫(yī)院中洗手是對(duì)手衛(wèi)生進(jìn)行控制的主要措施，降低人員的手表面微生物含量。在展開醫(yī)療操作的過程中，大量的病原微生物會(huì)通過醫(yī)護(hù)人員的手污染相關(guān)物品，從而容易導(dǎo)致感染問題的發(fā)生，而且容易將病原菌帶出醫(yī)院以外的環(huán)境中。在這種情況下，需要規(guī)范醫(yī)院對(duì)醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生，加強(qiáng)其行為控制，操作后按要求洗手，勤洗手，保證洗手規(guī)范性，從而保證人員手衛(wèi)生[16]。ATP熒光檢測(cè)儀是一種對(duì)醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行手衛(wèi)生評(píng)估的主要方法，實(shí)用性較強(qiáng)，在當(dāng)前發(fā)展中得到了廣泛認(rèn)可且應(yīng)用范圍較為廣泛，主要被應(yīng)用在醫(yī)藥，生物學(xué)和食品工業(yè)等領(lǐng)域，在應(yīng)用此技術(shù)時(shí)，其可為患者提供較為直觀的檢測(cè)結(jié)果，而且檢測(cè)速度較快，臨床應(yīng)用靈敏度高。但實(shí)際發(fā)展中，此技術(shù)的應(yīng)用也存在一定的不足，其技術(shù)結(jié)果并不能表示物體表面的存活細(xì)菌量，同時(shí)難以有效實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌數(shù)量和菌株種類的判斷。在這種情況下，醫(yī)院在開展感染監(jiān)測(cè)工作的過程中，需要結(jié)合實(shí)際的監(jiān)測(cè)目的，選擇合理有效的。從而保證檢測(cè)方法的實(shí)施有效性，對(duì)醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生情況進(jìn)行有效檢測(cè)，根據(jù)實(shí)際情況，為醫(yī)務(wù)人員制訂有效的管理策略，提高其洗手規(guī)范性等，從而保證降低醫(yī)院感染發(fā)生率。

綜上所述，在對(duì)醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生污染情況進(jìn)行檢測(cè)過程中，應(yīng)用三磷酸腺苷熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)，其臨床應(yīng)用價(jià)值顯著，檢驗(yàn)準(zhǔn)確率較高，可進(jìn)行推廣使用。