胃癌組織中MOGAT3表達及臨床意義*

姚秀芳，孫慧華，吳建華，高雪梅，張 曙，王 燕

（1如東縣人民醫(yī)院病理科，江蘇 226400；2南通大學附屬醫(yī)院病理科）

胃癌是起源于胃上皮的惡性腫瘤，是全球最為常見的惡性腫瘤之一，大部分新發(fā)病例在發(fā)展中國家，尤其在亞洲東部，主要集中在中國[1]。我國胃癌發(fā)病率、死亡率高居所有腫瘤第二位，僅次于肺癌[2]。胃癌發(fā)生與多種因素密切相關，如飲食習慣、幽門螺桿菌感染等，脂肪消化吸收代謝功能異常與胃癌發(fā)生也有一定關系[3]。單?；视王；D移酶3（MOGAT3）是一種完整的膜酶，具有很強的二酰甘油?；D移酶（DGAT）活性，并可以催化裂解將單酞基甘油（MAG）轉化為三酞基甘油（TAG）所需的兩個反應[4]。胃癌作為消化道腫瘤與營養(yǎng)代謝密切相關，有研究顯示胃癌組織中MOGAT3表達上調(diào)[3]。本研究根據(jù)GEPIA、Oncomine數(shù)據(jù)庫信息分析MOGAT3 mRNA在胃癌組織中的表達，同時檢測135例胃癌術后組織標本，分析MOGAT3蛋白表達與患者臨床病理特征及預后的關系，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 GEPIA、Oncomine數(shù) 據(jù) 庫 GEPIA數(shù) 據(jù) 庫（http://gepia.cancer-pku.cn/）和Oncomine數(shù)據(jù)庫（https://www.oncomine.org/）是目前應用較廣的生物信息學分析數(shù)據(jù)庫，GEPIA數(shù)據(jù)庫整合TCGA癌癥和GTEx正常組織兩大數(shù)據(jù)，通過分析9 736個腫瘤和8 587個正常樣本的RNA測序數(shù)據(jù)，揭示癌癥亞型、驅動基因、等位基因、差異表達或致癌因素等，對深入挖掘癌癥新型靶點和標記物作用巨大。Oncomine是目前最大的癌基因芯片數(shù)據(jù)庫和整合數(shù)據(jù)平臺，共收集715個基因表達數(shù)據(jù)集、86 733個癌組織和正常組織數(shù)據(jù)，癌癥突變譜、基因表達及臨床信息齊全，整合了GEO、TCGA和已發(fā)表文獻來源的RNA和DNA-seq數(shù)據(jù)。通過Oncomine數(shù)據(jù)庫可以分析差異表達和共表達，挖掘癌癥基因信息。本研究利用這兩大數(shù)據(jù)庫分析MOGAT3 mRNA在胃癌組織中的表達情況。

1.2 胃癌組織來源 隨機選取2011年1月—2012年12月如東縣人民醫(yī)院病理科保存的135例胃癌患者手術切除組織的蠟塊標本，其中男性97例，女性38例，年齡≤60歲30例，＞60歲105例。隨訪截至2018年6月，均有完整的臨床資料和隨訪記錄，術前未行抗腫瘤治療。

1.3 組織芯片聯(lián)合免疫組化檢測MOGAT3蛋白表達 取石蠟包埋標本的核心組織，直徑約2 mm，排列于新的石蠟塊中，切片（厚度4μm），然后脫蠟、水化、抗原修復（約20 min），參照試劑盒說明書，采用免疫組化Envision法檢測MOGAT3蛋白。所用一抗為兔抗人MOGAT3抗體（試劑號:NBP1-84299，Novus），1:200稀釋。結果判讀:由兩位經(jīng)驗豐富的病理診斷醫(yī)師雙盲判讀，高倍鏡下（400×）計數(shù)400個細胞，根據(jù)染色強度和陽性細胞百分率評分。強度評分標準:無著色0分，黃色（弱陽性）1分，淺棕色（中陽性）2分，棕褐色（強陽性）3分；陽性細胞評分標準:陽性細胞≤5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分。最終以兩者乘積作為標準，0～5分為陰性，≥6分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 21.0及Graphpad統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析和作圖。計量資料以±s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差（one-way ANOVA）分析；計數(shù)資料以頻數(shù)和率表示，組間比較采用Pearsonχ2檢驗；繪制Kaplan-Meier生存曲線，預后分析采用COX回歸模型和log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 根據(jù)GEPIA、Oncomine數(shù)據(jù)庫信息分析胃癌中MOGAT3 mRNA表達情況 GEPIA數(shù)據(jù)庫分析顯示，胃癌組織（n=408）中MOGAT3 mRNA表達高于癌旁正常胃組織（n=211），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）（圖1A）；Oncomine數(shù)據(jù)庫分析結果也顯示，胃癌組織中MOGAT3 mRNA表達高于癌旁正常胃組織，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.007）（圖1B）。

圖1 胃癌組織中MOGAT3 mRNA表達水平增高

2.2 胃癌標本中MOGAT3蛋白表達情況 組織芯片結合免疫組化檢測顯示，MOGAT3蛋白定位于胃癌細胞胞漿，胃癌組織MOGAT3蛋白表達率為80.0%（108/135），顯著高于癌旁組織的表達率31.9%（43/135），差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=49.704，P＜0.001）。見圖2。

圖2 胃癌組織中MOGAT3蛋白表達水平增高

2.3 MOGAT3蛋白表達與臨床病理特征的關系 MOGAT3蛋白陽性表達與患者TNM分期、浸潤程度、淋巴結轉移及術前血CEA水平顯著相關（P＜0.05），而與患者性別、年齡、組織類型、分化程度、遠處轉移及Laurn分型無關（P＞0.05）。見表1。

表1 MOGAT3蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系 例

續(xù)表1 MOGAT3蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系 例

2.4 MOGAT3蛋白表達與胃癌預后的關系 Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，MOGAT3蛋白陽性患者總生存率顯著低于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（圖3A）。COX回歸單因素分析顯示，MOGAT3蛋白表達、TNM分期、浸潤程度、淋巴結轉移、遠處轉移及術前CEA水平與胃癌患者的預后具有相關性（P＜0.05），而與性別、年齡、組織類型、分化程度及Laurn分型無關（P＞0.05）。多因素分析顯示MOGAT3蛋白高表達、TNM高分期、淋巴結轉移是胃癌患者預后的獨立危險因素。見表2，圖3B、3C。

表2 COX回歸分析影響胃癌患者預后因素

圖3 胃癌患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

胃癌發(fā)病與飲食、感染及遺傳等因素有關。過多食用腌制食品、高鹽、吸煙增加罹患胃癌的風險。幽門螺桿菌及EB病毒感染是胃癌重要致癌因素[5]。胃癌有家族聚集傾向，25%常染色體顯性遺傳性彌漫性胃癌易感家族存在E-cadherin突變[6]。近年來胃癌治療不斷發(fā)展，新的化療藥物和分子靶向藥物，如奧沙利鉑、赫賽汀等，給中、晚期胃癌患者帶來希望，但由于藥物毒副作用大，敏感性不佳等原因，患者總體預后較差，5年生存率低[7]。

有學者提出癌癥是代謝異常性疾病，諸多研究探索對腫瘤發(fā)生發(fā)展起關鍵作用的特定生化代謝途徑[8]。脂質(zhì)具有多種重要的生物學功能，脂質(zhì)譜系變化及脂代謝異常在癌癥發(fā)生發(fā)展過程中扮演十分重要的作用[9]。隨著脂質(zhì)組學分析在癌癥研究中的重要進展，脂代謝異常與癌癥關系的研究日益受到關注[10]。MOGAT1基因參與甘油二酯（DG）和甘油三酯（TG）合成，主要表達在胃、腎和脂肪，腸道幾乎無表達，而MOGAT2和MOGAT3則在小腸中高表達[11]，有研究顯示，在人胃癌中與脂肪消化及吸收代謝通路有關的關鍵基因中有9個基因表達顯著上調(diào)（MOGAT3、FABP2、FABP1、APOA4、NPC1L1、PLA2G2A、ABCG5、PLA2G4A、PLA2G12B），2個基因顯著下調(diào)（LIPF、PLA2G1B）[3]。

本研究通過生物信息學技術分析顯示，胃癌組織中MOGAT3 mRNA表達高于癌旁正常胃組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。利用組織芯片技術聯(lián)合免疫組化檢測胃癌組織中MOGAT3蛋白表達水平，顯示胃癌組織中MOGAT3蛋白表達率為80.0%，顯著高于癌旁組織的表達率31.9%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。MOGAT3蛋白陽性表達與患者TNM分期、浸潤程度、淋巴結轉移及術前血CEA水平顯著相關（P＜0.05）。生存曲線分析發(fā)現(xiàn)，MOGAT3蛋白陽性患者總生存率顯著低于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。COX回歸分析顯示，MOGAT3蛋白高表達、TNM高分期、淋巴結轉移是胃癌患者預后的獨立危險因素。提示MOGAT3蛋白可能促進胃癌的發(fā)生發(fā)展，有助于預測胃癌患者的預后，有望成為胃癌治療的新靶點。