多能性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及微管不穩(wěn)定蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)及臨床意義

張靜依 哈雪梅(通信作者) 趙博雅 張自潔

101500首都醫(yī)科大學(xué)燕京醫(yī)學(xué)院2016級(jí)五年制臨床醫(yī)學(xué)1，北京

101500首都醫(yī)科大學(xué)燕京醫(yī)學(xué)院密云教學(xué)醫(yī)院綜合教研室2，北京

101500首都醫(yī)科大學(xué)燕京醫(yī)學(xué)院2018級(jí)五年制臨床醫(yī)學(xué)3，北京

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cSCC)是一種以角質(zhì)細(xì)胞異常增殖為特征的惡性腫瘤，其發(fā)病率隨人口老齡化發(fā)展逐年上升。本病臨床表現(xiàn)單一、病程長(zhǎng)，反復(fù)摩擦感染常影響臨床判斷，不典型的病變，更易過診或漏診。研究cSCC 早期高危特征和發(fā)生的分子機(jī)制，可為臨床提供重要信息。多能性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(SOX2)在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)生和后來的生活中必不可少，異常表達(dá)卻非常有害，通過調(diào)節(jié)干細(xì)胞功能、細(xì)胞黏附、外基質(zhì)降解及血管生成等參與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)[1-2]。微管不穩(wěn)定蛋白(Stathmin)又稱癌蛋白，具有微管解聚活性，在有絲分裂調(diào)控中起關(guān)鍵作用，是腫瘤相關(guān)因子之一[3]。本研究檢測(cè)SOX2和Stathmin在cSCC和皮膚良性增生性病變中的表達(dá)情況，以期發(fā)現(xiàn)相關(guān)診斷標(biāo)記和線索，為臨床提供預(yù)后信息及新的治療靶點(diǎn)。

資料與方法

選取2017-2020年北京市密云區(qū)醫(yī)院病理科存檔的皮膚鱗狀細(xì)胞癌切除標(biāo)本41 例為觀察組，良性增生性病變25 例為對(duì)照組。觀察組男28 例，女13 例；年齡44～94歲，平均(70.54±13.19)歲；有糖尿病者21例，無糖尿病者17 例(失訪3 例)；發(fā)生于口腔相關(guān)上皮者7 例，其他部位者34 例。對(duì)照組男13 例，女12例；年齡33～83歲，平均(56.20±14.18)歲；有糖尿病者10 例，無糖尿病者15 例；發(fā)生于口腔相關(guān)上皮者1例，其他部位者24例。兩組患者基本資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未接受過放化療。②手術(shù)切除為初次治療。③原發(fā)性腫物。④經(jīng)患者及家屬同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者。②診斷不明確者。③復(fù)發(fā)病例。④不配合隨訪者。

方法：兩組均采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法(SP)。10%中性福爾馬林固定的石蠟標(biāo)本常規(guī)切片(厚度2～3 μm)，脫蠟水化，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)浸泡。乙二胺四乙酸(EDTA)修復(fù)液(PH8.0)高壓修復(fù)，冷卻至室溫，PBS緩沖液清洗。一抗(SOX2：中山金橋， 20817571， Stathmin： 中山金橋，21095421)，37℃孵育1 h。PBS 清洗后加酶標(biāo)羊抗鼠二抗(中山金橋：17G87D11)。DAB 顯色。蘇木素復(fù)染。乙醇脫水。二甲苯透明后封片。將已知陽性組織設(shè)為陽性對(duì)照，PBS 液代一抗作為陰性對(duì)照。由2 名經(jīng)驗(yàn)豐富的主治醫(yī)師行獨(dú)立雙盲復(fù)閱判讀。

觀察指標(biāo)：依據(jù)著色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分。著色強(qiáng)度：棕褐色計(jì)3 分，棕黃色計(jì)4 分，淺黃色計(jì)1 分，不著色計(jì)0 分；陽性細(xì)胞百分比：＞75%計(jì)4 分，50%～75%計(jì)3 分，25%～50%計(jì)2 分，≤25%計(jì)1 分，無陽性計(jì)0 分。以上兩項(xiàng)得分相加計(jì)總分，0～1 分為陰性，2～7 分為陽性。高分化鱗狀細(xì)胞癌巢近基底層陽性表達(dá)時(shí)，評(píng)為1分(陰性)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用(±s)表示，組間采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，組間采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

SOX2 和Stathmin 蛋白在兩組患者中的表達(dá)。SOX2蛋白在正常皮膚未見表達(dá)，在cSCC中表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核，個(gè)別胞質(zhì)陽性。Stathmin 定位于胞質(zhì)，在正常鱗狀上皮基底及基底旁層表達(dá)，高分化鱗狀細(xì)胞癌巢近基底陽性表達(dá)，分化越差，信號(hào)越強(qiáng)。見圖1、圖2。

圖1 SOX2在癌組織中表達(dá)(10x)

圖2 Stathmin在癌組織中表達(dá)(10x)

兩組患者病變中SOX2 和Stathmin 蛋白表達(dá)率比較：觀察組SOX2 和Stathmin 在cSCC 陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者病變中SOX2和Stathmin蛋白表達(dá)率比較

觀察組SOX2 和Stathmin 蛋白表達(dá)與臨床因素的關(guān)系：觀察組SOX2 陽性表達(dá)與發(fā)病部位和糖尿病史相關(guān)，發(fā)生于口腔黏膜的鱗狀細(xì)胞癌SOX2 蛋白陽性表達(dá)率明顯高于其他部位，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白陽性表達(dá)率高于無糖尿病史者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Stathmin 蛋白陽性表達(dá)與腫瘤分化呈負(fù)相關(guān)，中-低分化鱗癌Stathmin 蛋白陽性表達(dá)率明顯高于高分化者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 觀察組SOX2和Stathmin蛋白表達(dá)與臨床因素的關(guān)系

討 論

鱗狀上皮是表皮增殖單元發(fā)生一系列高度調(diào)控事件而逐漸分化成熟的，細(xì)胞分裂率、凋亡或傳輸時(shí)間等微小改變即可導(dǎo)致病理狀況，其調(diào)控異常是最可能誘發(fā)惡性腫瘤的原因。

SOX2 對(duì)維持胚胎和干細(xì)胞群至關(guān)重要，可影響細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。SOX2 在食管鱗癌、膀胱癌前病變及小鼠侵襲性膀胱癌中持續(xù)表達(dá)，對(duì)腫瘤的啟動(dòng)和生長(zhǎng)十分重要，推薦SOX2 作為尿路上皮癌標(biāo)記及潛在靶點(diǎn)[4-5]。這與本研究結(jié)果所示SOX2 蛋白在cSCC 細(xì)胞核陽性表達(dá)，且陽性率明顯高于對(duì)照組結(jié)果相似。SOX2 蛋白高表達(dá)于口腔相關(guān)的鱗狀細(xì)胞癌，可能與其上皮干細(xì)胞性及異質(zhì)性相關(guān)[6]。SOX2還可協(xié)同P63 形成復(fù)合體，激活編碼GLUT1 的內(nèi)含子增強(qiáng)子簇，提高GLUT1 表達(dá)，介導(dǎo)糖酵解內(nèi)流過度激活，鱗狀細(xì)胞癌存在其表型，糖代謝異常時(shí)高度易感[7]。本研究結(jié)果顯示，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白陽性表達(dá)率高于無糖尿病史者，由此推斷，患者糖尿病史及血糖水平可作為cSCC 診斷參考依據(jù)。

幾乎所有宮頸鱗癌和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變中Stathmin 過表達(dá)，其蛋白及mRNA 表達(dá)水平在食管鱗癌患者血清中高于健康者[8]。但很多研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin 高表達(dá)與腫瘤分化差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期晚和生存期短有關(guān)[9-10]?？谇击[癌過表達(dá)Stathmin可通過激活PI3K-AKT-mTOR 信號(hào)通路來降低癌細(xì)胞對(duì)治療的敏感性。本研究結(jié)果顯示，Stathmin在cSCC的陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，且其陽性表達(dá)與腫瘤分化呈負(fù)相關(guān)，提示其表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)。

綜上所述，Stathmin 和SOX2 可作為cSCC 診斷標(biāo)記，陽性表達(dá)提示惡性，可協(xié)助鑒別病理形態(tài)相似的cSCC 和良性增生性病變，并為臨床提供預(yù)后信息。患者糖尿病病史及血糖水平有可能作為cSCC的參考依據(jù)。