氣相色譜-質(zhì)譜儀測定植物油中氯丙醇酯

◎ 欒 田，王曉婧，廖 雪，王 緣，趙 嵐

（黑龍江省疾病預防控制中心，黑龍江 哈爾濱 150030）

氯丙醇酯是近年發(fā)現(xiàn)的一類新型食品污染物質(zhì)，主要源于植物油精煉加工過程，普遍存在于植物油和含油脂的食品中，其中較典型的是3-氯丙醇酯（3-MCPDE）和2-氯丙二醇酯（2-MCPDE），尤其以3-MCPDE含量最高[1]。目前，3-MCPDE毒性未明確，其水解產(chǎn)物3-氯丙醇具有生殖和腎臟毒性、免疫抑制及潛在致癌風險等作用[2-3]。2-MCPDE與3-MCPDE結(jié)構(gòu)相似，其引起的健康風險也應引起重視。目前，我國關(guān)于氯丙醇酯檢測方法的文獻報道較多，有氣相色譜-質(zhì)譜法[4]、液相色譜-質(zhì)譜法[5]，大多是關(guān)于食用油中3-MCPD的檢測，我國尚未制定植物油中氯丙醇酯的限量標準。本實驗采用氘代同位素內(nèi)標法，運用氣相色譜-質(zhì)譜儀同時檢測氯丙醇酯的含量，為快速有效測定植物油中氯丙醇酯提供檢測依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 標準物質(zhì)

2-氯-1,3-丙二醇硬酯酸二酯（2-MCPDE）、D5-2-氯-1,3-丙二醇硬酯酸二酯（d5-2-MCPDE）、3-氯-1,2-丙二醇棕櫚酸二酯（3-MCPDE）、D5-3-氯-1,2-丙二醇棕櫚酸二酯（d5-3-MCPDE），50 μg·mL-1，加拿大 TRC 公司。

1.1.2 試劑

七氟丁?；溥颍ㄇ邬i，97%純度）；四氫呋喃（阿達瑪斯，色譜純）；正己烷（Fisher，色譜純）；甲醇（默克，色譜純）；二氯甲烷（默克，色譜純）；硫酸（科密歐，優(yōu)級純）；溴化鈉（國藥滬試，分析純）；碳酸氫鈉（科密歐，優(yōu)級純）。

1.1.3 儀器

氣相色譜-質(zhì)譜儀（7890A-5975，美國安捷倫）；氮吹儀（DC24H，上海安譜）；電熱鼓風干燥箱（9035A，上海一恒）；渦旋混勻儀（HS501，IKA）；天平（CP324S，賽多利斯）。

1.2 實驗方法

1.2.1 前處理及上機檢測

（1）水解。①稱取0.100 g植物油于離心管中，加入2 mL四氫呋喃，再加入100 μL內(nèi)標使用液（1.00 μg·mL-1），混勻。②加入3 mL正己烷萃取，渦旋后5 000 r·min-1離心3 min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，氮吹至干，加入1.0 mL四氫呋喃復溶。③復溶后液體中加入1.8 mL硫酸-甲醇溶液，混勻，烘箱40 ℃保溫16 h。④加入0.5 mL 9.6%碳酸氫鈉中和，40 ℃下氮吹至1.5 mL。

（2）凈化。將3 000 mg硅藻土倒入固相萃取柱中，再將水解液倒入萃取柱，20 mL正己烷淋洗，棄去淋洗液，加入30 mL二氯甲烷進行洗脫，收集至50 mL離心管中；將洗脫液用脫水劑充分脫水后，轉(zhuǎn)入50 mL離心管中，40 ℃氮吹濃縮至1.0 mL，轉(zhuǎn)移至帶刻度的5 mL玻璃管。

（3）衍生。將50 μL七氟丁?；溥蜓苌鷦┘尤朐嚬苤?，蓋塞立即渦旋混勻。75 ℃保溫30 min。放置室溫后加入正己烷定容至1.0 mL。加入2 mL水，充分渦旋，放置分層后，將上清液轉(zhuǎn)入進樣瓶中，供GC-MS分析。

1.2.2 儀器參數(shù)

（1）氣相色譜條件。色譜柱：DB-5ms；進樣口溫度：280 ℃；載氣：高純氦氣，流速：1.0 mL·min-1；進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1.0 μL；程序升溫：60 ℃保持1 min，再以3 ℃·min-1的速度升至 100 ℃，最后以40 ℃·min-1的速度升至300 ℃，保持3 min。

（2）質(zhì)譜條件。離子化方式：EI；離子源溫度：230 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；四極桿溫度：150 ℃；溶劑延遲：5.0 min；選擇離子監(jiān)測模式（SIM）。氯丙醇酯及其內(nèi)標衍生物的監(jiān)測離子和定量離子見表1。

表1 氯丙醇酯及其內(nèi)標衍生物的監(jiān)測離子和定量離子表（m/z）

2 結(jié)果與分析

2.1 方法線性范圍及檢出限

稱取0.1 g空白植物油，分別準確加入10 μL、50 μL、100 μL、200 μL和300 μL混合標準工作液及混合內(nèi)標工作液，按照樣品操作步驟進行處理，測定后將實驗結(jié)果繪制為工作曲線。由表2可知，在0～300 μg·kg-1，2種組分都有良好的線性關(guān)系。以儀器中SIM模式下，以3倍噪比（S/N）待測組分的濃度作為儀器檢出限，以取樣量為0.1 g計算，本方法中的2種組分檢出限均為 0.020 mg·kg-1，見表 2。

表2 工作曲線及檢出限表

2.2 方法精密度和加標回收率

對空白植物油樣品進行低、中、高3個水平加標，分別進行6次平行實驗，計算待測物質(zhì)含量的相對標準偏差及回收率。由表3可知，氯丙醇酯的RSD小于10%，該方法的精密度可靠。

表3 樣品加標回收率及精密度表（n=6）

2.3 有證標準物質(zhì)的測定

對FAPAS質(zhì)控樣品（證書含量范圍3-MCPDE和2-MCPDE分別為0.183～0.412 mg·kg-1和0.058～0.150 mg·kg-1）進行6次平行實驗，計算3-MCPDE和2-MCPDE的含量。經(jīng)檢測，植物油中3-MCPDE和2-MCPDE 6次測定的-x±s分別為（0.286±0.022） mg·kg-1和（0.114±0.010） mg·kg-1，RSD分別為7.69%和8.77%，表明該方法測定植物油中3-MCPDE和2-MCPDE的準確度良好。

2.4 實際樣品測定

對市售的33份植物油樣品進行測定，33份植物油中，3-MCPDE檢出31份，檢出率為93.94%，2-MCPDE檢出24份，檢出率為72.73%。

3 結(jié)論

本文采用氣相色譜-質(zhì)譜法用同位素內(nèi)標法測定植物油中3-MCPDE和2-MCPDE。在酸性條件下，采用硫酸-甲醇溶液對植物油進行水解，經(jīng)硅藻土固相萃取小柱凈化，七氟丁酰基咪唑衍生后，采用氣相色譜-質(zhì)譜儀測定，以氘代同位素作為內(nèi)標進行定量。3-MCPDE 和 2-MCPDE 在 10～ 300 μg·kg-1有良好的線性關(guān)系；3-MCPDE和2-MCPDE的平均回收率分別為92.7%～102.7%和89.7%～108.2%，相對標準偏差均小于10%，3-MCPDE檢出率為93.94%，2-MCPDE檢出率為72.73%。實驗結(jié)果表明，建立的方法靈敏度高，準確可靠，適用于植物油中3-MCPDE和2-MCPDE檢測，可滿足大量樣品的檢測要求，實際樣品中氯丙醇酯檢出率較高。

氯丙醇酯作為新型污染物，我國尚未制定其限量標準。目前，其毒理學數(shù)據(jù)有限，其在人體內(nèi)的水解率、代謝情況及人群對其敏感程度直接決定暴露風險的高低。因此，有必要加大監(jiān)測力度，以獲取更多數(shù)據(jù)，進行下一步的風險分析。