高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定配制酒中4種色素和3種甜味劑

◎ 喬 笠，劉 穎，王雁秋，陳 德

（松滋市公共檢驗檢測中心，湖北 松滋 434200）

配制酒是以發(fā)酵酒或蒸餾酒為酒基體，加入可食動植物組織或可藥用的中藥材，輔加食品添加劑用于呈色呈味。人體過量攝入食品添加劑會對健康造成一定的危害?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）[1]對配制酒中的食品添加劑的限量作了有關(guān)規(guī)定。

目前，食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中色素、甜味劑的檢測主要采用液相色譜紫外檢測法，且不同添加劑間的檢測方法差異很大，因此不能采用同一個分析方法，通過一針進樣同時檢測出配制酒中的多種食品添加劑[2-5]。

本文將建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，通過一針進樣同時檢測出配制酒中的4種色素（檸檬黃、日落黃、莧菜紅和胭脂紅）和3種甜味劑（甜蜜素、三氯蔗糖、阿力甜）。該檢測方法操作簡便、靈敏度好，回收率和精密度高，適用于配制酒中4種色素和3種甜味劑的定量分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

配制酒樣品，市售；甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；乙酸銨（色譜純，阿拉丁化學(xué)試劑有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)品：檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、甜蜜素、阿力甜和三氯蔗糖（純度≥99.5%，北京壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）。

乙酸銨溶液（10 mmol·L-1）：稱取0.77 g乙酸銨，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL，經(jīng)0.22 μm水相濾膜過濾后備用。

1.2 儀器與設(shè)備

LCMS-8040型高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，日本島津；YP10002型電子天平，上海越平；CLT55R型離心機，湖南湘儀；UPH-II-20T型純水機，四川優(yōu)普；DTA-27型超聲清洗儀，湖北鼎泰恒勝。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）7種添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制（1 000 mg·mL-1）。稱取適量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、三氯蔗糖、阿力甜和甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品，用水配制成1 000 mg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

（2）7種添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液配制（10 mg·mL-1）。取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1 mL于100 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度混勻，制得7種添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

（3）7種添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液配制。用水稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，配制成0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.20 mg·L-1、0.50 mg·L-1、0.80 mg·L-1和1.00 mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.2 樣品前處理

稱取配制酒5 g（精確至0.01g）于50 mL塑料離心管中，加水約20 mL，振蕩混勻后超聲提取20 min，將水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度。取適量上清液過0.22 μm濾膜，待測定。

1.3.3 儀器條件

（1）質(zhì)譜條件。霧化氣流量：3 L·min-1；DL管溫度：200 ℃；干燥氣流量：15 L·min-1；加熱塊溫度：400 ℃；轉(zhuǎn)換打拿極電壓：6.0 kV；檢測器電壓：2.0 kV。

（2）色譜條件。賽默飛Hypersil GOLD色譜柱（150 mm ×2.1 mm，5 μm）；流動相：A 相（10 mmol·L-1乙酸銨水溶液）和B相（純甲醇），流速為0.30 mL·min-1；柱溫：40 ℃；進樣體積：10 μL。梯度洗脫程序：0～2 min，5%→10%B；2～4 min，10%→20%B；4～6 min，20%→30%B；6～9 min，30%→40%B；9～ 11 min，40% → 50%B；11～ 12 min，50%→60%B；12～15 min，60%→80%B；15～16 min，80% → 80%B；16.0～ 16.5 min，80% → 5%B；16.5～ 20.0 min，5%B。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用水稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，配制成0.05 mg·L-1、0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1、0.5 mg·L-1、0.8 mg·L-1和1.0 mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

對質(zhì)譜參數(shù)中7種添加劑的定性離子對和定量離子對、Q1偏轉(zhuǎn)電壓和Q3偏轉(zhuǎn)電壓、碰撞能量等進行優(yōu)化，最終優(yōu)化結(jié)果如表1所示。

表1 7種添加劑質(zhì)譜參數(shù)表

2.2 色譜參數(shù)優(yōu)化

本研究分別試驗了 0.20 mL·min-1、0.30 mL·min-1、0.40 mL·min-1泵流速條件；30 ℃、35 ℃、40 ℃的柱溫條件；最終選擇0.30 mL·min-1的泵流速、40 ℃柱溫條件，該條件下7種添加劑均可以完全分離。7種添加劑的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，LC-MS/MS） 色 譜 圖 如圖1所示。

圖1 7種添加劑的LC-MS/MS色譜圖

2.3 7種添加劑線性關(guān)系、檢出限

按照優(yōu)化后的條件對混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液進行測定，分別以S/N=3的質(zhì)量濃度作為檢出限。由表2可看出，各添加劑線性關(guān)系良好（r≥0.997），檢出限結(jié)果表明，該方法靈敏度較高。

表2 7種添加劑的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限表

2.4 加標(biāo)實驗

以配制酒空白陰性樣品為空白樣品基質(zhì)進行加標(biāo)實驗，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，7種添加劑的加標(biāo)回收率范圍為90.2%～100.2%，說明此方法回收率高。7種添加劑的RSD范圍為1.8%～5.1%，說明此方法精密度高。

2.5 樣品測定

對全部10批次的市售配制酒進行了檢測。其中有1批次的配制酒樣品中檢出三氯蔗糖，其濃度為0.03 g·kg-1，此結(jié)果與根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》（GB 22255—2014）所測定出的三氯蔗糖的濃度一致，證明檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

表3 7種添加劑的加標(biāo)回收率和精密度表

3 結(jié)論

本試驗所建立的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定配制酒中7種添加劑的分析方法具有操作簡便、靈敏度好、回收率和精密度高等優(yōu)點。該檢測方法為配制酒中7種添加劑含量的快速檢測與定量分析提供了有力的依據(jù)。