飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚生長及體色的影響

姜巨峰，劉克明，李春艷，劉肖蓮，周 勇，韓現(xiàn)芹，史東杰，馬 林，宋紅梅，趙立明

( 1.天津市水產(chǎn)研究所，天津市觀賞魚技術(shù)工程中心，天津 300221； 2.北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所暨國家淡水漁業(yè)工程技術(shù)研究中心，北京 100068； 3.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部休閑漁業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510380； 4.天津市靜海區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 301600 )

隨著我國人民生活水平的日益提高，觀賞魚已逐漸成為消費(fèi)新時(shí)尚。色彩是觀賞魚的主要觀賞價(jià)值，影響魚類體色的因素有魚類的遺傳因素、神經(jīng)內(nèi)分泌因素、年齡、性別、外部環(huán)境和所攝食餌料等[1]。性別對(duì)觀賞魚類體色的影響較為普遍，大部分魚類雄性體色較雌魚鮮艷。

馬拉維湖慈鯛(簡稱“馬鯛”)是目前觀賞魚市場(chǎng)上較為暢銷的品種，多是雌雄二態(tài)，雄性的成魚擁有艷麗極具金屬感的體色，觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值大，而雌魚和幼魚大多呈現(xiàn)單調(diào)的灰色，觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值小。阿里(弗氏鬼麗魚)(Sciaenochromisfryeri)是馬鯛中最受歡迎的品種，屬硬骨魚綱、鱸形目、慈鯛科、鬼麗魚屬。其夢(mèng)幻般的藍(lán)色為阿里贏得了“藍(lán)色閃電”的美譽(yù)，其特別的金屬藍(lán)體色吸引了一大批阿里愛好者。然而，在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，阿里繁殖的后代雌雄比例約為1∶1，其中有一半的阿里雌魚需要人工增色成金屬藍(lán)色再出售，中國目前每年需要人工增色的阿里魚逾200萬尾。

目前國內(nèi)外學(xué)者對(duì)阿里的研究較少，僅見其營養(yǎng)、麻醉劑、繁養(yǎng)技術(shù)等方面的少量報(bào)道[2-5]，而對(duì)其增色劑研制、增色策略尚未見相關(guān)報(bào)道。甲基睪酮(MT)在促進(jìn)魚類增色研究中的應(yīng)用較為廣泛，目前已見在黃姑魚(Nibeaalbiflora)[6]、斑馬魚(Daniorerio)[7]、草魚(Ctenopharyngodonidella)[8]、劍尾魚(Xiphophorushelleri)[9]、珍珠瑪麗魚(Mollienisiavelifera)[10]、紅劍尾魚(X.helleri)[10]、中華鳑鲏(Rhodeussinensis)[11]、馬拉瓜麗體魚(Cichlasomamanaguense)[12]、鯉(Cyprinuscarpio)[13]等20多種魚增色方面進(jìn)行了研究和應(yīng)用，促進(jìn)了水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)的良性化發(fā)展。筆者以阿里雌魚為研究對(duì)象，通過研究飼料中不同甲基睪酮?jiǎng)┝繉?duì)阿里雌魚生長及增色效果的影響，旨在為阿里人工養(yǎng)殖及售后技術(shù)服務(wù)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 阿里增色飼料

試驗(yàn)飼料以阿里養(yǎng)殖普通飼料為基礎(chǔ)飼料(表1)，在增色預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，分別配制含有4、8、12、16 mg/kg 4個(gè)甲基睪酮(西亞試劑，分析純，99%)含量梯度(MT4、MT8、MT12、MT16組)的試驗(yàn)飼料，基礎(chǔ)飼料為對(duì)照組飼料，所有飼料烘干后，裝袋置于4 ℃冰箱備用?；A(chǔ)飼料由魚粉32%、豆粕18%、花生餅18%、面粉19%、魚油8%、磷酸二氫鈣1%、硫酸銅0.5%、硫酸錳0.5%、維生素混合物1%組成。

表1 基礎(chǔ)飼料的營養(yǎng)分析

1.2 增色試驗(yàn)

增色試驗(yàn)在天津市觀賞魚技術(shù)工程中心靜海實(shí)驗(yàn)基地水族實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。以平均體質(zhì)量(5.78±1.05) g的阿里雌魚為試驗(yàn)對(duì)象，試驗(yàn)分為5組，每組3個(gè)平行，每個(gè)平行30尾試驗(yàn)魚。隨機(jī)選擇規(guī)格基本一致、形體健康、游動(dòng)迅速的110日齡試驗(yàn)魚置于光照周期為14L∶8D裝有30 W LED燈的75 cm×60 cm×28 cm水族缸中，并在每個(gè)缸體上標(biāo)注試驗(yàn)飼料的標(biāo)簽。水溫22～24 ℃，pH 7.8～8.0，每日9:00和16:00定時(shí)飽食投喂，持續(xù)養(yǎng)殖8周。由于甲基睪酮不溶于水，其可以作為飼料添加劑應(yīng)用于觀賞魚增色。在投喂試驗(yàn)魚時(shí)，堅(jiān)持少量多次的原則，魚的攝食速度很快，基本上在3 s內(nèi)飼料就被攝食完畢，因此飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)不會(huì)溶失到養(yǎng)殖用水中造成水體環(huán)境的污染。當(dāng)魚吃飽后，及時(shí)將漂在水面的剩余飼料撈出回收。

1.3 停藥試驗(yàn)

在增色試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，改投普通飼料，每日正常投喂，觀察試驗(yàn)魚的體色變化情況，持續(xù)養(yǎng)殖4周。

1.4 樣品測(cè)定與數(shù)據(jù)分析

在試驗(yàn)第0、2、4、6、8、10、12周時(shí)，分別于每缸中各取10尾魚，用0.1 mL/L質(zhì)量濃度的丁香油將其麻醉，用濾紙吸干體表水分后，每尾魚均按頭部朝左的順序放置，快速用色度色差儀(Konica Minolta CM-700d，日本)測(cè)定其體表色度色差值，每尾魚測(cè)定腹部前部、中部和后部3個(gè)部分，取平均值，并與標(biāo)準(zhǔn)阿里真雄魚的體表色度值(取13尾阿里真雄魚上市魚進(jìn)行測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)魚色度值為:L,35.62±3.04；a,0.06±1.79；b,-18.99±2.79)進(jìn)行比較，測(cè)出總色差值(△Eab*)和黃藍(lán)度值(b*)；同時(shí)測(cè)其全長、體長、體質(zhì)量，測(cè)畢，快速將魚放入充氧的干凈水桶中進(jìn)行蘇醒，恢復(fù)正常后將魚移至原養(yǎng)殖缸中養(yǎng)殖。阿里雌魚特定生長率(RSG，%/d)[14]按下式計(jì)算：

RSG=(lnm2-lnm1)/t×100%

式中，m1為初始體質(zhì)量(g)，m2為終末體質(zhì)量(g)，t為試驗(yàn)時(shí)間(d)。

1.5 試驗(yàn)用水的處理

試驗(yàn)結(jié)束后，將養(yǎng)殖用水排入阿里專用增色池中，定期檢測(cè)池水中的甲基睪酮含量，如甲基睪酮含量超標(biāo)，可采用Fenton氧化法或睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonastestosteroni)基因工程菌對(duì)養(yǎng)殖用水進(jìn)行處理，待合格后再進(jìn)行養(yǎng)殖利用。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)結(jié)果用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著時(shí)進(jìn)行Duncan多重比較。

2 結(jié) 果

2.1 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚生長及成活率的影響

不同質(zhì)量濃度的甲基睪酮對(duì)阿里雌魚的成活率沒有影響，均為100%(表2)。試驗(yàn)結(jié)束后，所有甲基睪酮組的阿里體質(zhì)量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，12 mg/kg的甲基睪酮組的體質(zhì)量最高，平均體質(zhì)量為8.32 g，顯著高于16 mg/kg處理組和對(duì)照組(P<0.05)，但與4、8 mg/kg處理組之間的體質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)。4、12 mg/kg處理組特定生長率差異不顯著(P>0.05)，均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但與其他處理組差異不顯著(P>0.05)。

表2 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚生長及成活率的影響

2.2 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚體色的影響

2.2.1 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚色差值(△Eab*)的影響

色差值代表測(cè)定魚體色色度值與標(biāo)準(zhǔn)體色的差距，其值呈現(xiàn)越小說明其測(cè)定色度值與標(biāo)準(zhǔn)體色值的差異越小。由表3和圖1可見，甲基睪酮對(duì)阿里雌魚具有增色效應(yīng)，其與標(biāo)準(zhǔn)魚的色差值隨著增色時(shí)間的延長而逐漸變小。在增色第2、4、6、8周時(shí)，12、16 mg/kg甲基睪酮組的色差值差異不顯著(P>0.05),但均顯著低于其他各組(P<0.05)；4、8 mg/kg甲基睪酮組的色差值差異不顯著(P>0.05),但均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表3 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里增色效果(△Eab*)

圖1 飼料中甲基睪酮含量和添加時(shí)間對(duì)阿里雌魚體色的影響

8周增色時(shí)間結(jié)束后，改投對(duì)照組飼料，在第10周時(shí)，各處理組色差值較第8周時(shí)色差值均有所下降。8、12、16 mg/kg甲基睪酮組色差值差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于4 mg/kg甲基睪酮組和對(duì)照組的色差值(P<0.05)；4 mg/kg甲基睪酮組色差值顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

第12周時(shí)，除對(duì)照組，其他處理組的色差值均略高于第10周時(shí)各處理組的色差值。8、12、16 mg/kg甲基睪酮組色差值差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于4 mg/kg甲基睪酮組和對(duì)照組的色差值(P<0.05)；4 mg/kg甲基睪酮組色差值顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.2.2 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚黃藍(lán)色度值(b*)的影響

b*表示黃藍(lán)度值，+表示偏黃，-表示偏藍(lán)。由表4和圖1可見，阿里雌魚體表b*隨著增色時(shí)間的延長，呈逐漸減小趨勢(shì)。在增色8周時(shí)，12、16 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05);4 mg/kg甲基睪酮組體表b*顯著高于8 mg/kg甲基睪酮組(P<0.05)，但顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表4 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里增色效果(b*)

在增色試驗(yàn)結(jié)束后，所有處理組換投對(duì)照組飼料后，試驗(yàn)第10周時(shí)，各處理組阿里雌魚體表b*較第8周時(shí)均有所下降，阿里雌魚體表藍(lán)色呈現(xiàn)更深趨勢(shì)；12、16 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于0、4、8 mg/kg甲基睪酮組(P<0.05);4 mg/kg甲基睪酮組體表b*顯著高于8 mg/kg組(P<0.05)，但顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

第12周時(shí)，12、16 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于0、4、8 mg/kg甲基睪酮組(P<0.05); 4、8 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。與第10周相比，第12周各處理組除0、4 mg/kg甲基睪酮組體表b*稍低外，其他各組體表b*均比第10周時(shí)稍高。

3 討 論

3.1 飼料中甲基睪酮含量對(duì)阿里雌魚生長及成活率的影響

甲基睪酮對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長作用具有劑量效應(yīng)機(jī)制，低劑量能明顯促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，減少氨基酸分解，使肌肉增長、體質(zhì)量增加，高劑量可抑制養(yǎng)殖動(dòng)物的生長。本試驗(yàn)中，4、8、12、16 mg/kg甲基睪酮組均對(duì)阿里雌魚具有促生長作用，且12 mg/kg組的體質(zhì)量顯著高于16 mg/kg組(P<0.05)，但與4 mg/kg和8 mg/kg組體質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)。這與用甲基睪酮處理櫻桃鲃(Barbustitteya)雌魚[1]、馬拉瓜麗體魚[12]、鯉[13]、金魚(Carassiusauratus)[13]、吉富羅非魚(Oreochromisniloticus)[15]能夠促使其生長速度加快的結(jié)論相一致。本試驗(yàn)結(jié)果亦顯示，高劑量的甲基睪酮有抑制阿里雌魚生長的趨勢(shì)，這與高濃度激素處理會(huì)抑制舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)[16]、尼羅羅非魚(O.niloticus)[17]生長的結(jié)論相類似，但與雄性激素對(duì)庸鰈 (Hippoglossushippoglossus)[18]生長速度無明顯差別及雄性激素對(duì)黃姑魚[6]、大口黑鱸(Micropterussalmoides)[19]、稀有鯽(Gobiocyprisrarus)[20]、食蚊魚(Gambusiaaffinis)[21]的生長有顯著抑制作用的研究結(jié)果不同。這可能是由魚類種類的特異性所導(dǎo)致，也可能是因?yàn)轸~類不同生長階段對(duì)甲基睪酮的耐受性和吸收轉(zhuǎn)化利用能力不同。另外，雄性激素投喂時(shí)間也是影響魚類生長的關(guān)鍵因素，如甲基睪酮投喂體長15.1 mm的大口黑鱸[19]，在前40 d內(nèi)50 mg/kg組和100 mg/kg組的體長和體質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)，而到60 d時(shí)，100 mg/kg組的體長和體質(zhì)量顯著低于50 mg/kg組(P<0.05)。本試驗(yàn)中，在投喂甲基睪酮飼料12周后，不同試驗(yàn)組的阿里雌魚生長性能不一致，表明在實(shí)際應(yīng)用中，激素的效應(yīng)時(shí)間也是重要的考慮因素。

當(dāng)激素含量在適宜范圍內(nèi)時(shí)對(duì)魚類成活率無顯著影響，但在超過某個(gè)閾值后，魚類的成活率將會(huì)顯著降低。投喂17α-甲基睪酮對(duì)白斑狗魚(Esoxlucius)[22]有顯著致死效應(yīng)；用辛基酚處理日本青鏘(Oryziaslatipes)[23]發(fā)現(xiàn)，當(dāng)處理質(zhì)量濃度為2 μg/L時(shí)，死亡率升高20%～30%。本試驗(yàn)中，各處理組對(duì)阿里雌魚的成活率無影響，這與櫻桃鲃[1]、馬拉瓜麗體魚[12]的研究結(jié)果相同，說明甲基睪酮含量在阿里雌魚耐受范圍之內(nèi)。

3.2 飼料中甲基睪酮含量對(duì)馬雕阿里雌魚體色的影響

一般情況下，雄魚較雌魚艷麗，因此也更具觀賞價(jià)值。在飼料中添加一定量的甲基睪酮，可促使雌魚呈現(xiàn)出雄魚個(gè)體的副性征，其體色變得更加艷麗。研究顯示，飼料中添加10 mg/kg的甲基睪酮能使3月齡的紅劍尾魚[24]體色加深，但對(duì)5月齡的珍珠瑪麗魚[24]的體色無影響，這可能是由于5月齡的珍珠瑪麗魚性腺分化程度已較高或者投喂的甲基睪酮的劑量太小、時(shí)間太短所導(dǎo)致的；飼料里添加30 mg/kg以上的17α-甲基睪酮，50日齡的中華鳑鲏[11]體色明顯開始增強(qiáng)，效應(yīng)時(shí)間需28 d；17α-甲基睪酮處理后的紅劍尾魚[10,24]、瑪麗魚 (M.latipinna)[25]以及紅色斑馬魚[26]，體色更鮮艷。本試驗(yàn)結(jié)果表明，甲基睪酮可使阿里雌魚體色呈現(xiàn)雄魚金屬藍(lán)的體色。12 mg/kg與16 mg/kg的甲基睪酮增色效果差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。結(jié)合養(yǎng)殖成本和增色時(shí)間等因素綜合考慮，認(rèn)為12 mg/kg甲基睪酮是促使阿里雌魚體色增色的最佳添加量。

表5 甲基睪酮對(duì)觀賞魚增色情況

在8周增色試驗(yàn)結(jié)束改投普通飼料，試驗(yàn)第10周時(shí)，各試驗(yàn)組的阿里雌魚體表b*比第8周時(shí)的偏小，體表呈“金屬藍(lán)”體色加深；在第12周時(shí)，各試驗(yàn)組魚體表b*除4 mg/kg甲基睪酮組外，其他各組魚體表b*均較第10周時(shí)的偏大；這說明前8周在體內(nèi)富集的甲基睪酮后期通過代謝得以全部釋放出來，所以在增色飼料開始停止投喂的一段時(shí)間里，阿里呈現(xiàn)出更深的金屬藍(lán)體色，到后期其顏色有逐漸變淺的趨勢(shì)，但仍維持在體色較艷的程度，表明外源甲基睪酮對(duì)阿里雌魚具有適應(yīng)性反應(yīng)。該試驗(yàn)中，阿里雌魚在停止投喂增色飼料后4周仍然呈現(xiàn)金屬藍(lán)體色，可能是由于阿里雌魚經(jīng)過8周增色后已雄性化或者體內(nèi)吸收的增色劑尚未代謝完全，所以呈現(xiàn)出較為穩(wěn)定的金屬藍(lán)體色，具體原因還需進(jìn)一步研究確定。

3.3 增色魚與阿里真雄魚顏色差異的比較分析

本試驗(yàn)結(jié)果表明，投喂甲基睪酮后的阿里雌魚，其體色能夠呈現(xiàn)出雄魚金屬藍(lán)的體色。但與真雄魚的色差值(△Eab*)和黃藍(lán)度值(b*)相比較，其體色色度還有一定的差距。這可能與種類吸收利用甲基睪酮的特異性有關(guān)，也可能與具體養(yǎng)殖溫度、光照有關(guān)，具體原因還需要進(jìn)一步研究。

3.4 飼料中添加甲基睪酮對(duì)阿里雌魚健康及養(yǎng)殖環(huán)境的影響分析

飼料中添加甲基睪酮能夠促進(jìn)阿里雌魚生長且呈現(xiàn)出雄魚金屬藍(lán)體色。已有多項(xiàng)研究證實(shí)，甲基睪酮在羅非魚、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)魚苗雄性化應(yīng)用方面能夠消除完畢[27-29]，不會(huì)有殘留。魚類體內(nèi)吸收的甲基睪酮可通過代謝而逐漸消除[30]，這可以從增色后的阿里雌魚體色后期有變淺的趨勢(shì)得到印證，阿里雌魚體內(nèi)的甲基睪酮到底多長時(shí)間能夠消除完畢還有待進(jìn)一步研究。

另外，應(yīng)用甲基睪酮對(duì)觀賞魚增色時(shí)，可以在功能飼料表面包裹一層薄膜，以防止功能性添加劑在魚類攝食的過程中溶失至水中，造成養(yǎng)殖環(huán)境的污染；同時(shí)堅(jiān)持少量多次的投飼習(xí)慣，確保所投喂的飼料均能夠在短時(shí)間內(nèi)被魚類攝食利用，避免對(duì)環(huán)境的污染。

4 結(jié) 論

飼料中添加甲基睪酮不僅可以促使阿里雌魚生長速度加快，而且可以使其呈現(xiàn)雄魚金屬藍(lán)體色，適宜添加量為12 mg/kg，增色8周后的阿里體色能夠穩(wěn)定4周以上。