一種玉米種子細(xì)菌性病原菌的鑒定及其防治藥劑篩選

吳之濤，常 浩，李文學(xué)，楊克澤，馬金慧，徐志鵬，汪亮芳，任寶倉

(1.甘肅省農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究院，甘肅武威 733006；2.甘肅省特種藥源植物種質(zhì)創(chuàng)新與安全利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅武威 733006；3.甘肅省玉米病蟲害綠色防控工程研究中心，甘肅武威 733006；4.武威市玉米病蟲害綠色防控技術(shù)創(chuàng)新中心，甘肅武威 733006)

玉米(ZeamaysL.)屬禾本科玉蜀黍?qū)僖荒晟荼局参?，原產(chǎn)于墨西哥和中南美洲其他國家，因其具有良好的適應(yīng)性在熱帶和溫帶地區(qū)廣泛種植，是全球重要的糧食作物之一。在中國，玉米不僅是重要的糧飼兼用型作物，同時(shí)也是重要的化工原料，種植面積和總產(chǎn)量居四大主糧作物之首，在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)中具有極其重要的地位。因此，玉米的安全生產(chǎn)對于保障國家糧食安全、食品安全、能源安全等都具有重要意義[1-2]。近年來，隨著農(nóng)業(yè)種植產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，玉米種植區(qū)域范圍不斷擴(kuò)大、品種更替加快、氣候變化異常及耕作栽培模式轉(zhuǎn)變使玉米生產(chǎn)中面臨的病蟲害脅迫問題日益凸顯，嚴(yán)重影響玉米產(chǎn)業(yè)的健康高質(zhì)量發(fā)展[3]。迄今為止全世界報(bào)道的玉米侵染性病害有185種，其中細(xì)菌性病原侵染的病害僅有20種[4]，在國內(nèi)報(bào)道的玉米細(xì)菌病害主要有Acidovoraxavenaesubsp.avenae引起的細(xì)菌性條斑病[5]、Bacillusmegaterium引起的細(xì)菌性葉斑病[6]、Pseudomonassyringaepv.syringaeVan Hall引起的細(xì)菌性褐斑病[7]、Pseudomonasaeruginosa引起的細(xì)菌性莖腐病[8]、Pantoaeagglomerans引起的細(xì)菌性干莖腐病[9]等。目前關(guān)于玉米細(xì)菌性病害的研究報(bào)道相對較少，細(xì)菌性病害具有發(fā)病迅速、傳播速度快等特點(diǎn)，往往給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。甘肅省張掖市是全國最大的雜交玉米種子生產(chǎn)基地，制種面積常年維持在6.7萬hm2左右，種子產(chǎn)業(yè)已逐漸成為當(dāng)?shù)刂γ撠毠?jiān)，帶動農(nóng)民增收的重要支柱產(chǎn)業(yè)[10]。2020年6月，在部分制種田發(fā)現(xiàn)整株玉米矮化皺縮，葉片卷曲，沿葉脈兩側(cè)出現(xiàn)不規(guī)則油漬狀褪綠條斑，發(fā)病部位葉片組織發(fā)白變薄，發(fā)病較重的生長點(diǎn)組織壞死，部分莖髓組織缺失，形成不規(guī)則缺刻，心葉缺失或呈筒狀，植株生長點(diǎn)部位彎曲，部分病株出現(xiàn)分蘗。經(jīng)初步調(diào)查田間平均發(fā)病率在50%左右，嚴(yán)重時(shí)甚至絕產(chǎn)。為明確該病害的病原，本試驗(yàn)收集發(fā)病植株玉米種子，對種子胚芽組織和種植的幼苗心葉生長點(diǎn)組織進(jìn)行病原菌分離，結(jié)合致病性測定、病原菌形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀、生理生化特征及16S～23S rDNA間隔區(qū)序列比對分析對分離的病原菌進(jìn)行鑒定，并采用抑菌圈法對5種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，篩選出抑菌效果較好的藥劑，以期為該病害的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試材料：玉米種子，品種為‘N70’。

NA培養(yǎng)基：牛肉浸膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、瓊脂18 g、蒸餾水定容至1 000 mL，pH 7.0～7.2；KB培養(yǎng)基：胰蛋白胨20 g、K2HPO41.5 g、MgSO4·7H2O 1.5 g、甘油15 mL、瓊脂15 g、蒸餾水定容至1 000 mL；LB液體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、NaCl 10 g、蒸餾水定容至 1 000 mL，pH 7.0～7.2。

結(jié)晶紫染劑，溶液Ⅰ：結(jié)晶紫2.0 g，乙醇(95%)20 mL；溶液Ⅱ：草酸銨0.8 g，蒸餾水80 mL。碘液：碘1.0 g、碘化鉀2.0 g，蒸餾水300 mL。復(fù)染劑：2.5%番紅乙醇溶液20 mL，蒸餾水80 mL。氧化酶試劑：1%鹽酸四甲基對苯撐二胺。接觸酶試劑：3%～10%過氧化氫。1%溴百里酚藍(lán)水溶液：先用少量95%乙醇溶解，再加蒸餾水配成1%的水溶液。格里斯試劑，溶液Ⅰ：對氨基苯磺酸0.5 g，稀醋酸(10%左右)150 mL；溶液Ⅱ：α-萘胺0.1 g、蒸餾水20 mL，稀醋酸(10%左右)150 mL。碳素化合物：D-半乳糖、海藻糖、D-甘露糖、D-果糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、麥芽糖、D-纖維二糖；1%鹽酸四甲基對苯撐二胺、溴百里酚藍(lán)、對氨基苯磺酸、α-萘胺、D-半乳糖、海藻糖、D-甘露糖、D-纖維二糖、L-阿拉伯糖購于Takara公司。其他試劑購于天津市凱通化學(xué)試劑有限公司。

分子生物學(xué)試驗(yàn)試劑及儀器：Mix(含MgCl2)，DNA Marker購于生工生物工程(上海)股份有限公司；T100 PCR儀及凝膠成像系統(tǒng)，美國Bio-Rad公司；721分光光度計(jì)，日本島津儀器公司；Ni-U顯微鏡，日本Nikon公司。

供試殺菌劑：10%中生·寡糖素可濕性粉劑，江蘇明德立達(dá)作物科技有限公司；47%春雷·王銅可濕性粉劑，江門市植保有限公司；3%噻霉酮可濕性粉劑，陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司； 0.3%四霉素水劑，遼寧微科生物工程股份有限公司；2%春雷霉素水劑，江門市植保有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 病原細(xì)菌的分離純化 將玉米種子(品種為‘N70’)先用體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液表面消毒處理5 min，再用3% NaClO水溶液表面消毒處理5 min，最后用無菌水沖洗3次，然后加入適量 0.01 mol/L磷酸緩沖液(PBS，pH為7.2)在 4 ℃無菌條件下浸泡12 h。用無菌手術(shù)刀切取大小為3 mm×3 mm的胚芽組織塊置于加有300 μL滅菌水的白瓷板中充分研磨，用滅菌環(huán)蘸取研磨液在NA平板上劃線分離，置于光照培養(yǎng)箱中在28 ℃下培養(yǎng)48 h，挑取形態(tài)大小一致的單菌落進(jìn)行純化，將純化的菌株在NA和KB培養(yǎng)基上培養(yǎng)72 h后，觀察菌落形態(tài)大小、顏色、表面光滑度。

玉米種子(品種為‘N70’)經(jīng)3%NaClO水溶液表面消毒處理10 min后，用無菌水沖洗3遍，播種于裝有滅菌營養(yǎng)土的花盆中(d=30 cm)，待玉米長出4～5片真葉后，采集矮化皺縮植株的心葉生長點(diǎn)組織進(jìn)行病原分離。幼苗心葉生長點(diǎn)組織用體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液表面消毒處理 1 min，無菌水沖洗3次，用滅菌手術(shù)刀切取大小為5 mm×5 mm的組織塊置于加有300 μL滅菌水的白瓷板中充分研磨，用滅菌環(huán)蘸取研磨液在NA平板上劃線分離，置于光照培養(yǎng)箱中在28 ℃下培養(yǎng)48 h，挑取形態(tài)大小一致的單菌落進(jìn)行純化，將純化的菌株在NA和KB培養(yǎng)基上培養(yǎng) 72 h后，觀察菌落形態(tài)大小、顏色、表面光滑度。

1.2.2 致病性測定 將“1.2.1”中純化的菌株挑取單菌落接種于裝有LB液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在28 ℃、200 r/min條件下?lián)u培24 h，制成菌液懸浮液。用分光光度計(jì)測定菌液懸浮液OD600nm的吸光度值，當(dāng)數(shù)值達(dá)到0.3時(shí)，細(xì)菌懸浮液的濃度為3×108CFU/mL，備用。

玉米種子(品種為‘N70’)經(jīng)3%NaClO水溶液表面消毒處理10 min后，用無菌水沖洗3遍，將種子置于恒溫干燥箱內(nèi)(溫度為65 ℃)干熱消毒1 h，播種于裝有滅菌營養(yǎng)土的花盆中(d=30 cm)，每盆播種20粒，置于相對濕度65%～75%、溫度15～25 ℃、自然光照的日光溫室中進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)玉米長到4～5片真葉時(shí)進(jìn)行間苗，剔除弱苗，每盆保留10株長勢一致的植株進(jìn)行致病性測定。采用噴霧法接種，用無菌噴壺將濃度為3×108CFU/mL的細(xì)菌懸浮液均勻噴灑在玉米葉片上，每盆噴10 mL，以噴等量無菌水作為對照，每個(gè)菌株接種30株，接種后套袋保濕培養(yǎng)，3 d后觀察植株發(fā)病情況。

1.2.3 病原細(xì)菌生理生化特征測定 參照常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定方法[11-12]對分離純化的病原細(xì)菌菌株分別進(jìn)行革蘭氏染色試驗(yàn)、熒光產(chǎn)生試驗(yàn)、煙草過敏反應(yīng)試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、接觸酶試驗(yàn)、41 ℃下生長試驗(yàn)、耐鹽性試驗(yàn)、馬鈴薯腐敗試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、H2S產(chǎn)生試驗(yàn)及對D-半乳糖、海藻糖、D-甘露糖、D-果糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、麥芽糖、D-纖維二糖等碳源的利用試驗(yàn)，每個(gè)菌株3次重復(fù)。

1.2.4 病原細(xì)菌分子生物學(xué)鑒定 選取從玉米種子胚芽組織和幼苗心葉生長點(diǎn)組織分離純化的細(xì)菌菌株進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。采用CTAB法[13]提取細(xì)菌菌株基因組DNA，利用植物病原細(xì)菌16S～23S rDNA間隔區(qū)序列的通用引物L(fēng)1：5′-AGTCGTAACAACGTAGCCGT-3′和L2：5′-GTGCCAAGGCATCC-ACC-3′對細(xì)菌菌株基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系(25 μL)為：引物L(fēng)1和L2各1 μL，細(xì)菌菌株基因組DNA 1 μL，Mix(含MgCl2)12.5 μL，ddH2O 9.5 μL。PCR擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)變性300 s； 94 ℃變性30 s，60 ℃退火60 s，72 ℃延伸90 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸600 s。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測，之后送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序。登錄NCBI網(wǎng)站(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)將測序結(jié)果與GenBank中相關(guān)核苷酸序列進(jìn)行BLAST比對，利用MEGA5.0軟件(最大似然法Maximum Lik-elihood)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定細(xì)菌菌株的 種屬。

1.2.5 病原細(xì)菌室內(nèi)毒力測定 選擇5種殺菌劑對從玉米種子胚芽組織分離純化的菌株進(jìn)行室內(nèi)毒力測定。采用抑菌圈法[14]，參照“1.2.2”的方法配置濃度為1×108CFU/mL的菌液懸浮液，待NA培養(yǎng)基冷卻至40 ℃與菌懸液混合均勻(體積比為10∶1)后制成含菌平板。在每個(gè)含菌NA平板上分別放置3片單層無菌濾紙片(d=5 mm)，以等邊三角形的方式排列。根據(jù)供試藥劑的推薦劑量每種藥劑配置成5個(gè)不同濃度，其中10%中生·寡糖素可濕性粉劑濃度分別為250、500、1 000、2 000和3 000 μg/mL，3%噻霉酮可濕性粉劑濃度分別為1 000、2 000、3 000、4 000和5 000 μg/mL，2%春雷霉素水劑濃度分別為 2 000、4 000、6 000、8 000和10 000 μg/mL，47%春雷·王銅可濕性粉劑和0.3%四霉素水劑濃度分別500、1 000、2 000、3 000和4 000 μg/mL。在含菌NA平板濾紙片上分別滴加10 μL不同濃度藥液，以滴加等量無菌水為空白對照，之后將培養(yǎng)皿置于光照培養(yǎng)箱中在28 ℃培養(yǎng)48 h，采用十字交叉法測量各藥劑濃度處理的抑菌圈直徑，計(jì)算抑菌率。抑菌率=(處理抑菌圈直徑-對照抑菌圈直徑)/(處理抑菌圈直徑-紙碟直徑)×100%。

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行毒力回歸方程數(shù)據(jù)分析，藥劑濃度換算成對數(shù)值作為自變量x，抑菌率的幾率值作為因變量y，建立毒力回歸方程，通過毒力回歸方程計(jì)算各藥劑抑制中濃度(EC50)值。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害田間癥狀

2020 年6月在調(diào)查玉米制種田病害時(shí)發(fā)現(xiàn)玉米植株生長點(diǎn)壞死，無心葉病株(圖1)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)部分玉米病株整株矮化，葉片卷曲，沿葉脈兩側(cè)出現(xiàn)不規(guī)則油漬狀褪綠條斑，發(fā)病部位葉片組織發(fā)白變?。粍冮_葉鞘后，在心葉生長點(diǎn)部位零星出現(xiàn)黃褐色病斑，發(fā)病較重時(shí)生長點(diǎn)壞死，部分莖髓組織缺失，形成不規(guī)則缺刻，心葉缺失或呈筒狀，植株生長點(diǎn)部位彎曲，部分病株出現(xiàn)分蘗。

A.植株矮化；B、C.心葉缺失、壞死；D.異常分蘗A.Plant dwarfing；B,C.Absence and necrosis of plant heart leaves；D.Abnormal tillering圖1 病害田間癥狀Fig.1 Symptoms of maize bacterial disease in field

2.2 病原細(xì)菌形態(tài)特征

采用平板劃線分離法對玉米種子胚芽組織、幼苗心葉生長點(diǎn)組織進(jìn)行分離和純化得到培養(yǎng)性狀一致的2株菌株，分別命名為YM-001和YM-002。在NA培養(yǎng)基上生長48 h后，2株菌株菌落顏色呈淡黃色，圓形，稍凸起，表面光滑，邊緣整齊，在培養(yǎng)基上不產(chǎn)生其他色素，菌落呈半透明，質(zhì)地較軟微粘。在100倍油鏡下觀察發(fā)現(xiàn)YM-001和YM-002菌體形態(tài)呈短桿狀，單生或?qū)ι?，大小分別為0.28～0.85 μm×1.11～1.81 μm和 0.21～0.78 μm×1.13～1.83 μm；在紫外燈下觀察KB培養(yǎng)基上生長的菌株，YM-001和YM-002均產(chǎn)生黃綠色熒光(圖2)。

A、B.菌株YM-001、YM-002菌落形態(tài)；C、D.菌株YM-001、YM-002革蘭氏染色形態(tài)；E、F.菌株YM-001、YM-002熒光觀察A,B.Colony morphology of strains YM-001 and YM-002；C,D.Gram staining morphology of strains YM-001 and YM-002；E,F.Fluorescence observation of strains YM-001 and YM-002圖2 病原細(xì)菌菌落形態(tài)特征Fig.2 Colony morphology of pathogenic bacteria

2.3 分離菌株的致病性測定

帶菌種子播種后，苗期發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為植株矮化、葉片皺縮且邊緣出現(xiàn)缺刻，葉片表面出現(xiàn)褪綠透明白色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)背面呈水漬狀，心葉卷曲(圖3-A)；成株期葉鞘部位沿葉脈兩側(cè)出現(xiàn)不規(guī)則油漬狀褪綠黃褐色條斑，剝開葉鞘后，在心葉生長點(diǎn)部位零星出現(xiàn)黃褐色病斑，心葉壞死卷曲，植株沿生長點(diǎn)缺失部位彎曲(圖3-B)。菌株YM-001和YM-002的菌懸液噴霧接種后第3天，接種植株的部分葉片零星出現(xiàn)不規(guī)則油漬狀褪綠病斑，接種后第7天，油漬狀褪綠病斑沿葉脈擴(kuò)展產(chǎn)生白色條狀病斑，發(fā)病部位葉片組織變薄卷曲枯死，邊緣出現(xiàn)缺刻，部分植株生長點(diǎn)組織壞死，心葉皺縮缺失，異常矮化(圖3-C、3-D和3-E)。接種植株發(fā)病癥狀與田間癥狀基本一致，對照植株生長正常未見明顯異常。對發(fā)病植株的心葉生長點(diǎn)組織進(jìn)行再次分離，重新進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，結(jié)果表明分離菌株與接種菌株病原一致。

A.苗期癥狀；B.成株期癥狀；C.接種菌株YM-001；D.接種菌株YM-002；E.接種菌株YM-001和YM-002發(fā)病癥狀；F.清水對照A.Seedling symptoms；B.Adult symptoms；C.Inoculation strain YM-001；D.Inoculation strain YM-002；E.Symptoms of inoculated strains YM-001 and YM-002；F.Control圖3 病原細(xì)菌致病性測定Fig.3 Pathogenicity determination of pathogenic bacteria

2.4 病原細(xì)菌生理生化特征

病原細(xì)菌生理生化特征測定結(jié)果表明，供試菌株YM-001和YM-002均為革蘭氏陽性、兼性厭氧型細(xì)菌；煙草過敏反應(yīng)試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)及硝酸鹽還原試驗(yàn)結(jié)果均呈陽性；馬鈴薯腐敗試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)及明膠液化試驗(yàn)結(jié)果均呈陰性，不能利用胱氨酸產(chǎn)生H2S；在 41 ℃不能培養(yǎng)生長，在20～40 g/L NaCl溶液中可以生長；能利用半乳糖、海藻糖、D-甘露糖、D-果糖、蔗糖、L-阿拉伯糖及麥芽糖作為碳源產(chǎn)酸，不能利用D-纖維二糖產(chǎn)酸(表1)。

表1 供試菌株生理生化特征Table 1 Physiological and biochemical characteristics of tested strains

2.5 病原細(xì)菌分子生物學(xué)鑒定

采用16S～23S rDNA間隔區(qū)序列通用引物L(fēng)1/L2對供試菌株YM-001和YM-002的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測序獲得核苷酸序列(約900 bp)，將其與GenBank中提交的核苷酸序列進(jìn)行同源性比對，結(jié)果顯示病原細(xì)菌與水稻、棉花、香蕉等寄主植物上分離的分散泛菌(Pantoeadispersa)的同源性達(dá)到100%。采用 MEGA5.0軟件的Maximum Likelihood法對泛菌屬3個(gè)不同種(P.agglomerans、P.ananatis、P.dispersa)、黃單胞菌屬(Xanthomonasoryzae)、芽孢桿菌屬(Bacillussubtilis)與供試菌株YM-001、YM-002構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明YM-001和YM-002與登錄號為MK156738、MT367860、MK905711、MG450362的P.dispersa聚在一個(gè)分支上，置信度達(dá)到100(圖4)，同時(shí)結(jié)合菌落形態(tài)特性和生理生化特征，將菌株YM-001和YM-002鑒定為Pantoeadispersa。

圖4 基于16S～23S rDNA間隔區(qū)序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree based on 16S-23S rDNA sequence

2.6 病原細(xì)菌室內(nèi)毒力測定

采用抑菌圈法進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，結(jié)果顯示(表2)5種殺菌劑對菌株YM-001均有一定的抑菌效果，其中0.3%四霉素水劑和47%春雷·王銅可濕性粉劑的抑菌率分別為75.52%和 70.53%。0.3%四霉素水劑EC50值最小為 670.84 μg/mL，47%春雷·王銅可濕性粉劑次之，為920.99 μg/mL。

表2 不同藥劑對玉米細(xì)菌菌株的毒力Table 2 Toxicity test of different bactericides on maize bacterial strains

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)通過病原細(xì)菌菌落形態(tài)特征、生理生化特征及16S-23S rDNA間隔區(qū)序列基因組測定和比對分析，將供試玉米種子細(xì)菌性病原初步鑒定為分散泛菌(P.dispersa)，雖然與前人報(bào)道的玉米細(xì)菌性褐腐病病原一致，但病害的危害時(shí)期、田間表現(xiàn)癥狀都存在很大差異。該病害主要在玉米拔節(jié)前期危害心葉生長點(diǎn)組織，造成植株皺縮矮化、心葉缺失、異常分蘗，顧沁等[15]報(bào)道的玉米細(xì)菌性褐腐病主要在灌漿期發(fā)生，使植株莖稈表面出現(xiàn)黃褐色干腐、葉梢枯死。相關(guān)研究表明，泛菌屬細(xì)菌是一種腐生菌或植物病斑上的次生菌，在水中、土壤中和動植物傷口中都能分離到[16]，目前關(guān)于泛菌屬細(xì)菌在玉米上引起的病害也有報(bào)道。王玲等[17]研究表明玉米細(xì)菌性枯萎病的病原為斯氏泛菌(P.stewartii)，由于其侵染危害性較強(qiáng)，已被我國列為檢疫性病害對象，曹慧英[9]研究發(fā)現(xiàn)成團(tuán)泛菌(P.agglomerans)可引起玉米細(xì)菌性干莖腐病。國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)引起玉米葉疫病和細(xì)菌性枯萎病的病原為成團(tuán)泛菌(P.agglomerans)[18]，引起玉米細(xì)菌性褐腐病的病原為菠蘿泛菌(P.ananatis)[19]，其中斯氏泛菌(P.stewartii)和菠蘿泛菌(P.ananatis)復(fù)合侵染高粱也會引起葉斑病[20]。近年來，在國內(nèi)外由泛菌屬細(xì)菌引起的植物病害發(fā)生面積和危害程度逐漸擴(kuò)大，越來越受到人們的關(guān)注，目前由分散泛菌(P.dispersa)引起的水稻葉枯病、棉花鈴腐病、香蕉腐爛病已有報(bào)道，但在玉米上引起的病害則鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)對玉米種子(品種為‘N70’)種植后進(jìn)行帶菌檢測，發(fā)現(xiàn)幼苗發(fā)病率達(dá)15.28%，同時(shí)對種子胚芽組織和幼苗心葉生長點(diǎn)組織進(jìn)行病原分離與純化，獲得菌落形態(tài)特性一致的2株菌株進(jìn)行致病性測定，結(jié)果顯示植株在溫室中的發(fā)病癥狀與田間癥狀基本一致，經(jīng)鑒定分離的病原菌與接種的病原菌相同。初步明確病原從種子內(nèi)部開始侵染，種子帶菌可能是該病害初侵染的主要來源。由于制種玉米田連作年限較長導(dǎo)致土壤菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，致病菌增多，土壤中是否存在分散泛菌(P.dispersa)侵染玉米種子而引起病害癥狀還有待進(jìn)一步研究。同時(shí)，本試驗(yàn)僅對玉米種子細(xì)菌性病原進(jìn)行了鑒定，而由該菌引起的整個(gè)病害侵染過程還需要設(shè)計(jì)系統(tǒng)試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

目前，生產(chǎn)上用于細(xì)菌病害防治的藥劑較少，主要選用抗生素類藥劑或銅制劑對病害進(jìn)行防治。本試驗(yàn)選用5種殺菌劑對病原細(xì)菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，試驗(yàn)結(jié)果表明抗生素類藥劑的抑菌效果優(yōu)于非抗生素類藥劑且用量較少，其中0.3%四霉素水劑抑菌率最高為75.52%，抑制中濃度EC50最低為670.84 μg/mL，其次為47%春雷·王銅可濕性粉劑，這與前人在番茄細(xì)菌性葉斑病[21]、糜子細(xì)菌性條斑病[22]上報(bào)道的研究結(jié)果相一致?？紤]到該病害可能是由種子帶菌引起的，在生產(chǎn)上可以采取種子包衣的措施對病害進(jìn)行有效防治。0.3%四霉素水劑和47%春雷·王銅可濕性粉劑殺菌譜廣、持效期較長、具有內(nèi)吸傳導(dǎo)特性，對作物安全、促進(jìn)作物生長，同時(shí)對該病原具有較好的抑菌效果，可以作為該病的田間防治藥劑，但田間防效還有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。