急性氨氮脅迫對(duì)長(zhǎng)蛸鰓、肝臟和腎臟組織結(jié)構(gòu)的影響

陳智威， 許 然， 鄭小東

(1.中國(guó)海洋大學(xué)海洋生物多樣性與進(jìn)化研究所， 山東 青島 266003；2. 海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國(guó)海洋大學(xué))， 山東 青島 266003)

長(zhǎng)蛸(Octopusminor)廣泛分布于中國(guó)沿海，是重要的經(jīng)濟(jì)蛸類(lèi)[1]。由于營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、生長(zhǎng)周期短(通常為一年)且生長(zhǎng)速度快，因此被認(rèn)為是一種有推廣前景的養(yǎng)殖品種。長(zhǎng)蛸是肉食性動(dòng)物，其攝取的大量蛋白類(lèi)物質(zhì)最終代謝產(chǎn)物主要是氨，研究發(fā)現(xiàn)體質(zhì)量相當(dāng)?shù)尿兕?lèi)氨排泄量是魚(yú)類(lèi)的2～3倍[2]。長(zhǎng)蛸與甲殼類(lèi)的生活環(huán)境類(lèi)似，都是底棲或表現(xiàn)出掩埋行為的動(dòng)物，產(chǎn)生的代謝副產(chǎn)物使沉積物中的氨氮水平升高，這可能導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境中氨氮含量高于養(yǎng)殖水體的安全濃度[3]。養(yǎng)殖水體中的高濃度氨氮是水生動(dòng)物死亡的原因之一[4-5]。國(guó)內(nèi)外許多研究報(bào)道了急性氨氮脅迫對(duì)水生動(dòng)物組織結(jié)構(gòu)的影響，例如張武肖等[6]在研究氨氮脅迫對(duì)團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)幼魚(yú)鰓、肝和腎組織結(jié)構(gòu)的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)不同器官之間損傷程度不同，肝組織損傷最嚴(yán)重，其次是鰓和腎，且隨著脅迫時(shí)間延長(zhǎng)，組織受損增加，難以恢復(fù)；陳思涵等[7]研究了急性氨氮脅迫對(duì)虎斑烏賊(Sepiapharaonis)肝臟、鰓和腦組織結(jié)構(gòu)的影響，發(fā)現(xiàn)氨氮脅迫濃度相同時(shí)，不同組織器官的損傷程度有差異，其中肝臟對(duì)氨氮脅迫最敏感，損傷程度最大，其次是鰓和腦組織；Feyjoo等[8]闡述了氨氮對(duì)真蛸(Octopusvulgaris)幼體細(xì)胞色素的影響，結(jié)果顯示隨著氨濃度的增加，色素細(xì)胞在受刺激變暗后又回到透明狀態(tài)的時(shí)間明顯減少；Cong等[9]研究了氨氮毒性對(duì)菲律賓蛤仔(Ruditapesphili-ppinarum)鰓組織造成的損傷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組的鰓絲被拉伸或折斷，鰓絲內(nèi)部的基底細(xì)胞幾乎消失。大部分研究?jī)?nèi)容都包含了鰓組織，因?yàn)轹w是很多水生生物排出氨基酸并將其分解代謝產(chǎn)生氨的重要器官，同時(shí)存在被動(dòng)擴(kuò)散和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，在氨解毒代謝中具有重要作用[10]。此外，文獻(xiàn)[11]研究表明，虎斑烏賊(Sepiapharaonis)能在鰓組織的幫助下，將體內(nèi)有毒的游離氨轉(zhuǎn)換成無(wú)毒的谷氨酰胺儲(chǔ)存在體內(nèi)，以用于其他的機(jī)體代謝或最終合成尿素排出體外。

氨氮脅迫對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物組織結(jié)構(gòu)損害的研究主要集中于魚(yú)類(lèi)和甲殼類(lèi)，在頭足類(lèi)中研究甚少，蛸科幾乎沒(méi)有。本文通過(guò)對(duì)長(zhǎng)蛸進(jìn)行低、中、高3個(gè)不同濃度的氨氮脅迫，觀察不同濃度的氨氮脅迫對(duì)長(zhǎng)蛸鰓、肝臟以及腎臟組織學(xué)的影響，填補(bǔ)了蛸科動(dòng)物氨毒性組織學(xué)研究方面的空白，為深入研究長(zhǎng)蛸氨解毒代謝機(jī)制提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

于山東省榮成市月湖海區(qū)采捕野生的、體質(zhì)健壯的成熟長(zhǎng)蛸，長(zhǎng)蛸的平均體質(zhì)量為 (180.2±30.5) g，在馬山集團(tuán)育苗廠(chǎng)內(nèi)暫養(yǎng)。自然海水經(jīng)沉淀、曝氣和消毒后使用。水溫為(20.8±0.5)℃, 每天更換的水量約為養(yǎng)殖池水量的 1/3。投喂肉球近方蟹1次/d。暫養(yǎng)期間長(zhǎng)蛸活力旺盛, 死亡率低于5%。暫養(yǎng)一周后, 將其轉(zhuǎn)移至長(zhǎng)×寬×高為67 cm×45 cm×47 cm 的方桶中, 每桶放置長(zhǎng)蛸8只, 養(yǎng)殖環(huán)境和管理方法與養(yǎng)殖池保持一致, 持續(xù)充氧, 暫養(yǎng)一周。實(shí)驗(yàn)前停食一天, 選擇身體健康、活力旺盛的個(gè)體隨機(jī)分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

參考陳智威等[12]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 選擇48 h作為脅迫時(shí)間，同時(shí)從中選取3個(gè)適宜濃度(即脅迫48 h長(zhǎng)蛸不會(huì)完全死亡的濃度)用于實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高3個(gè)濃度實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組, 其總氨氮(Total-NH3, TAN)濃度分別為: 87.0 mg/L(低濃度組)、143.5 mg/L(中濃度組)、204.0 mg/L(高濃度組)和0(對(duì)照組, 自然海水養(yǎng)殖下氨氮濃度)。使用NH4Cl控制3個(gè)實(shí)驗(yàn)組的總氨氮濃度，將NH4Cl放入加水的方桶中，攪拌均勻，利用氨氮儀(哈納 HI96715)檢測(cè)至要求濃度。每個(gè)方桶分為一組，每組個(gè)體數(shù)均為 8 只，每個(gè)濃度組設(shè)2個(gè)平行重復(fù)組。每天檢測(cè)總氨氮濃度, 維持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的氨氮濃度不變。實(shí)驗(yàn)期間，長(zhǎng)蛸處于停食狀態(tài), 每24 h更換1/2體積的水, 持續(xù)充氧，及時(shí)撈出死亡的個(gè)體，脅迫48 h后取樣，每一濃度取樣6只。

為減少樣品痛苦并嚴(yán)格遵守科研道德程序，在解剖組織之前采用7.5%氯化鎂對(duì)個(gè)體進(jìn)行麻醉[13-14]。解剖取出鰓、肝臟和腎臟，波恩氏液固定，然后酒精梯度脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，連續(xù)切片(厚度4～5 μm)，蘇木精-伊紅(HE)染色(染色步驟參照文獻(xiàn)[15])。光鏡觀察、拍攝，用Photoshop軟件測(cè)量細(xì)胞形態(tài)數(shù)據(jù)，每一濃度組取6張不同個(gè)體的片子，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果

87.0 mg/L的氨氮溶液脅迫下，實(shí)驗(yàn)初期長(zhǎng)蛸活力旺盛，與對(duì)照組無(wú)差別，游泳能力正常，直至48 h時(shí)出現(xiàn)死亡(見(jiàn)表1)，水體未出現(xiàn)顏色變化和異味；143.5 mg/L的氨氮溶液脅迫下，實(shí)驗(yàn)初期長(zhǎng)蛸偶爾出現(xiàn)躁動(dòng)現(xiàn)象，即突然地竄動(dòng)，水體顏色未有明顯變化，48 h時(shí)長(zhǎng)蛸出現(xiàn)噴墨現(xiàn)象，開(kāi)始有長(zhǎng)蛸死亡(見(jiàn)表1)，存活個(gè)體臥于方桶底部或蜷縮至角落，幾乎不能游動(dòng)，水體顏色變黃；204.0 mg/L的氨氮溶液脅迫下，實(shí)驗(yàn)初期長(zhǎng)蛸就出現(xiàn)躁動(dòng)不安的情況，大部分長(zhǎng)蛸出現(xiàn)急速游泳和噴墨的現(xiàn)象，24 h時(shí)長(zhǎng)蛸開(kāi)始死亡，48 h時(shí)出現(xiàn)大量死亡(見(jiàn)表1)，水面浮有泡沫，水體渾濁，帶有腥味。

表1 氨氮脅迫48 h后不同濃度組的死亡率Tabel 1 Mortality of O. minor at 48 h in different concentration of ammonia

表1顯示，在脅迫24 h時(shí)，87.0和143.5 mg/L實(shí)驗(yàn)組中均無(wú)死亡個(gè)體，意味著其氨毒性未積累到一定程度，對(duì)長(zhǎng)蛸而言可以忍受；脅迫48 h時(shí)，3個(gè)濃度的氨溶液中均有長(zhǎng)蛸死亡，且隨著脅迫濃度的升高而逐漸增加，組織學(xué)結(jié)果顯示氨毒已經(jīng)對(duì)長(zhǎng)蛸的組織器官產(chǎn)生了影響(見(jiàn)圖1～3)。

(a. 對(duì)照組; B. 87.0 mg/L脅迫組; C. 143.5 mg/L脅迫組; D. 204.0 mg/L脅迫組。 N: 細(xì)胞核; NH: 細(xì)胞核腫大; CV: 細(xì)胞空泡化; K:細(xì)胞核溶解。 標(biāo)尺=20 μm。A. The control group; B. 87.0 mg/L stress group; C. 143.5 mg/L stress group; D. 204.0 mg/L stress group. N: Nuclear; NH: Nuclear hypertrophy; CV: Cellular vacuolation; K:Karyolysis. Scale bar=20 μm.)圖1 氨氮脅迫下長(zhǎng)蛸鰓的組織切片圖Fig.1 Details of the gill micrographs in O. minor under the stress of ammonia

(a. 對(duì)照組; B. 87.0 mg/L脅迫組; C. 143.5 mg/L脅迫組; D. 204.0 mg/L脅迫組。 N: 細(xì)胞核; HC:肝小葉; K:細(xì)胞核溶解; CV: 細(xì)胞空泡化; HS:肝血竇; SV:中央靜脈。 標(biāo)尺=20 μm。A. The control group; B. 87.0 mg/L stress group; C. 143.5 mg/L stress group; D. 204.0 mg/L stress group. N: Nuclear; HC: Hepatic contour; K: Karyolysis; CV: Cellular vacuolation; HS: Hepatic sinusoid; SV: Central vein. Scale bar=20 μm.)圖2 氨氮脅迫下長(zhǎng)蛸肝臟的組織切片圖Fig.2 Detail of the liver micrographs in O. minor under the stress of ammonia

(a. 對(duì)照組; B. 87.0 mg/L脅迫組; C. 143.5 mg/L脅迫組; D. 204.0 mg/L脅迫組。 N: 細(xì)胞核; RT:腎小管;RC:腎細(xì)胞; IF:組織液。 標(biāo)尺=20 μm。A. The control group; B. 87.0 mg/L stress group; C. 143.5 mg/L stress group; D. 204.0 mg/L stress group. N:Nuclear; RT:Renal tubules; RC:Renal cells; IF:Interstitial fluid. Scale bar=20 μm.)圖3 氨氮脅迫下長(zhǎng)蛸腎臟的組織切片圖Fig.3 Detail of the kidney micrographs in O. minor under the stress of ammonia

對(duì)照組(見(jiàn)圖1A)中鰓組織結(jié)構(gòu)較完整、緊致，鰓細(xì)胞排列整齊，無(wú)空泡；低濃度脅迫組(見(jiàn)圖1B)中鰓細(xì)胞漲大，細(xì)胞核腫脹排列不整齊；中濃度脅迫組(見(jiàn)圖1C)中鰓細(xì)胞具有空泡化結(jié)構(gòu)，可觀察到細(xì)胞間滲出的組織液；高濃度脅迫組(見(jiàn)圖1D)中鰓細(xì)胞出現(xiàn)大量空泡結(jié)構(gòu)，鰓細(xì)胞排列松散，表現(xiàn)出一定程度的損傷。從對(duì)照組到高濃度脅迫組，氨氮脅迫濃度依次升高，細(xì)胞核直徑不斷增加，細(xì)胞中空泡直徑也不斷增加(見(jiàn)表2)。由此可以認(rèn)為，不同濃度的氨氮溶液對(duì)長(zhǎng)蛸鰓組織產(chǎn)生了不同程度的影響和破壞，主要表現(xiàn)為細(xì)胞核體積增大，排列不整齊，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡，排列松散，且空泡的數(shù)量和直徑不斷增加。

表2 氨氮脅迫下長(zhǎng)蛸鰓組織結(jié)構(gòu)形態(tài)比較數(shù)據(jù)Table 2 Comparative data on the morphology in the gill structure of O. minor under the stress of ammonia

對(duì)照組(見(jiàn)圖2A)中肝組織結(jié)構(gòu)完整，中空部位為中央靜脈，圍繞中央靜脈細(xì)胞排列一圈的細(xì)胞為中央靜脈管壁，對(duì)照組圖片顯示管壁細(xì)胞完整、排列整齊；在低濃度脅迫組(見(jiàn)圖2B)中管壁部分細(xì)胞核溶解，逐漸產(chǎn)生空泡化結(jié)構(gòu)；與對(duì)照組相比，中濃度脅迫組(見(jiàn)圖2C)中樣品中央靜脈管壁細(xì)胞核排列松散，但結(jié)構(gòu)依然較完整，其余部位的細(xì)胞核有溶解現(xiàn)象；高濃度脅迫組(見(jiàn)圖2D)與中濃度脅迫組相似，中央靜脈管壁細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)較完整，但組織空泡化較明顯。從對(duì)照組到高濃度脅迫組，氨氮脅迫濃度依次升高，細(xì)胞核直徑略有增加，但對(duì)照組和低濃度脅迫組、中濃度脅迫組和高濃度脅迫組之間的增加趨勢(shì)不明顯，中央靜脈管壁的直徑不斷增加(見(jiàn)表3)。以上現(xiàn)象表明，隨著脅迫濃度的增加，細(xì)胞排列逐漸松散，中央靜脈管壁的完整度逐漸降低，導(dǎo)致肝組織的部分結(jié)構(gòu)損壞，這可能是導(dǎo)致長(zhǎng)蛸死亡的因素之一。

表3 氨氮脅迫下長(zhǎng)蛸肝組織結(jié)構(gòu)形態(tài)比較數(shù)據(jù)Table 3 Comparative data on the morphology in the liver structure of O. minor under the stress of ammonia

對(duì)照組(見(jiàn)圖3A)的腎組織結(jié)構(gòu)完整，腎小管之間幾乎不存在縫隙，腎細(xì)胞形狀圓潤(rùn)完整，細(xì)胞核基本位于細(xì)胞中央；低濃度脅迫組(見(jiàn)圖3B)中腎細(xì)胞形狀變扁，部分細(xì)胞呈破碎狀態(tài)，細(xì)胞核逸出，腎小管之間產(chǎn)生空隙，且組織液滲出，管中央空隙不斷增大；中濃度脅迫組(見(jiàn)圖3C)中腎細(xì)胞逐漸拉長(zhǎng)、扁平，組織液開(kāi)始滲出；高濃度脅迫組(見(jiàn)圖3D)中腎細(xì)胞不斷縮小，腎小管之間空隙更大，大量組織液滲出，且中央部位產(chǎn)生了更大的空隙。從對(duì)照組到高濃度脅迫組，氨氮脅迫濃度依次升高，細(xì)胞核直徑無(wú)明顯差異，但腎細(xì)胞直徑呈降低趨勢(shì)，同時(shí)細(xì)胞擴(kuò)散，腎小管直徑不斷增加，與對(duì)照組相比高濃度組增加值最大(見(jiàn)表4)。

表4 氨氮脅迫下長(zhǎng)蛸腎組織結(jié)構(gòu)形態(tài)比較數(shù)據(jù)Table 4 Comparative data on the morphology in the kidney structure of O. minor under the stress of ammonia

3 討論

鰓不僅是水生動(dòng)物攝取食物、進(jìn)行呼吸作用的重要器官，在動(dòng)物體內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)中也起著重要作用[16-17]。鰓組織病變會(huì)影響水生動(dòng)物攝食、呼吸、排泄以及調(diào)節(jié)酸堿和離子平衡等生理活動(dòng)[18]。Zhou等[19]發(fā)現(xiàn)氨氮脅迫使草魚(yú)(Ctenopharyngodonidella)鰓細(xì)胞核顏色逐漸變淺，鰓細(xì)胞內(nèi)部出現(xiàn)空白，胞核邊緣不清，并觀察到次級(jí)鰓片的水腫和融合；陳思涵等[7]發(fā)現(xiàn)急性氨氮脅迫下虎斑烏賊的鰓組織出現(xiàn)泌氯細(xì)胞溶解，上皮細(xì)胞核溶解、空泡化、排列紊亂及鰓絲淤血、壞死和脫落的現(xiàn)象。說(shuō)明氨氮脅迫會(huì)破壞水生動(dòng)物的鰓結(jié)構(gòu)，破壞其上皮細(xì)胞核，使其逐漸溶解，產(chǎn)生空泡化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鰓細(xì)胞核出現(xiàn)溶解，細(xì)胞數(shù)量變少，從而導(dǎo)致鰓細(xì)胞邊緣開(kāi)始模糊(見(jiàn)圖1)；氨氮脅迫導(dǎo)致鰓內(nèi)部細(xì)胞核腫脹，細(xì)胞空泡化嚴(yán)重，且空泡直徑整體呈增加趨勢(shì)(見(jiàn)表2)。但表2顯示中濃度脅迫組的空泡平均直徑小于其他各組，推測(cè)可能是細(xì)胞不斷溶解后，細(xì)胞內(nèi)液體堆積，導(dǎo)致鏡檢可見(jiàn)的空泡直徑減小(見(jiàn)圖1C)。長(zhǎng)蛸鰓組織損傷情況隨氨氮脅迫濃度的升高和脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，且高濃度脅迫組與對(duì)照組相比較，鰓組織損傷情況較明顯，低、中濃度脅迫組與對(duì)照組相比較，鰓組織損傷程度稍小。

肝臟在水生動(dòng)物的代謝﹑免疫和解毒等方面具有非常重要的作用。在鯉(Cyprinuscarpio)幼魚(yú)和羅非魚(yú)(Oreochromismossambicus)的研究中發(fā)現(xiàn)，氨氮經(jīng)血液運(yùn)輸?shù)礁闻K后，利用肝臟中的酶將高毒性的非離子氨通過(guò)解毒作用轉(zhuǎn)化為低毒性的尿素釋放出來(lái)，且損傷后的肝臟也會(huì)影響其體內(nèi)解毒代謝的正常進(jìn)行[20-21]。陳思涵等[7]研究發(fā)現(xiàn)，急性氨氮脅迫后，肉眼可以觀察到高濃度組虎斑烏賊肝臟顏色鮮紅，出現(xiàn)腫脹、糜爛等現(xiàn)象，鏡檢發(fā)現(xiàn)肝小葉破裂，肝血竇擴(kuò)張；郝小鳳等[22]對(duì)急性氨氮脅迫后的泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)的肝組織進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察，發(fā)現(xiàn)在高氨氮濃度脅迫后，泥鰍肝臟的細(xì)胞核形狀異常，細(xì)胞空泡化嚴(yán)重，細(xì)胞核內(nèi)容物大量外泄。說(shuō)明氨氮脅迫會(huì)破壞水生動(dòng)物的肝臟結(jié)構(gòu)，使其顏色改變、內(nèi)部結(jié)構(gòu)腫脹破裂，導(dǎo)致肝細(xì)胞核變形。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著氨氮濃度的增加，肝小葉排列逐漸松散，邊緣模糊，中央靜脈管壁的完整度逐漸降低(見(jiàn)圖2)，肝血竇、中央靜脈管壁直徑也不斷增加(見(jiàn)表3)。表3顯示，肝細(xì)胞核的平均直徑略有變化，其中低濃度脅迫組中核直徑比對(duì)照組小，可能是在氨氮脅迫初期，肝細(xì)胞中的抗氧化酶活性提高，為了減輕細(xì)胞腫大對(duì)肝組織影響， 使細(xì)胞核直徑略有下降，張武肖等[6]實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明抗氧化酶能夠降低氨氮脅迫對(duì)團(tuán)頭魴肝組織的毒性作用。與鰓組織結(jié)構(gòu)損傷情況比較發(fā)現(xiàn)，同種氨氮濃度脅迫下，肝組織的結(jié)構(gòu)損傷較為明顯，可以推測(cè)氨毒入侵長(zhǎng)蛸體內(nèi)時(shí)，肝組織是受到主要損傷的部位之一。

對(duì)于腎臟組織，研究較多的物種主要是魚(yú)類(lèi)，在頭足類(lèi)中的研究較少見(jiàn)。腎臟是水生動(dòng)物較常見(jiàn)的排泄器官，利用腎臟的排泄功能，水生動(dòng)物可以將其新陳代謝產(chǎn)生的物質(zhì)排出體外，同時(shí)腎臟與鰓有著部分相似的功能，即可以調(diào)節(jié)生物體內(nèi)離子平衡和滲透壓，因此水生動(dòng)物的腎臟損傷程度可以作為檢測(cè)環(huán)境污染的指標(biāo)之一[6,23]。張武肖等[6]研究發(fā)現(xiàn)，水中高濃度氨氮使團(tuán)頭魴幼魚(yú)的腎小球萎縮、壞死，腎小管上皮細(xì)胞腫大、空泡化、充血嚴(yán)重。說(shuō)明氨氮脅迫同樣會(huì)破壞水生動(dòng)物的腎臟功能，這在上皮細(xì)胞中表現(xiàn)明顯，氨氮脅迫下上皮細(xì)胞會(huì)不斷腫大，空泡化嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)中，氨氮對(duì)長(zhǎng)蛸腎臟產(chǎn)生的主要影響為細(xì)胞核逸出，組織液大量滲出(見(jiàn)圖3C、3D)，腎細(xì)胞直徑明顯縮短，腎小管之間產(chǎn)生空隙且直徑不斷增加(見(jiàn)表4)。表4顯示不同濃度的氨氮脅迫下，腎細(xì)胞核直徑變化不顯著，但細(xì)胞直徑逐漸縮短，部分細(xì)胞核變?yōu)闄E圓形，導(dǎo)致低濃度實(shí)驗(yàn)組的核直徑大于對(duì)照組，但在脅迫濃度升高后，細(xì)胞開(kāi)始破裂，細(xì)胞核逸出，其形態(tài)和直徑略有變化，表現(xiàn)為直徑縮短。以上現(xiàn)象表明，隨著氨氮濃度的升高，腎臟的結(jié)構(gòu)損傷會(huì)越發(fā)嚴(yán)重，張武肖等[6]也在文章中解釋氨氮脅迫后腎臟的自我恢復(fù)能力較鰓和肝臟差。

研究發(fā)現(xiàn)，氨氮脅迫導(dǎo)致水生動(dòng)物死亡的原因主要有三種：一是氨氮毒性物質(zhì)導(dǎo)致肝臟和腎臟的器官病變；二是氨氮毒性物質(zhì)擾亂了鰓組織上皮細(xì)胞的排列方式，導(dǎo)致鰓細(xì)胞中細(xì)胞器受損，降低氧氣的輸送效率，通過(guò)影響呼吸作用導(dǎo)致生物死亡；三是氨氮毒性物質(zhì)導(dǎo)致腦細(xì)胞腫脹破損，從而導(dǎo)致生物死亡[7,21-22]。根據(jù)以上發(fā)現(xiàn)，可以推測(cè)高濃度氨氮導(dǎo)致長(zhǎng)蛸死亡的原因可能是其使長(zhǎng)蛸的鰓、肝臟和腎臟產(chǎn)生了不可逆轉(zhuǎn)的病變，從而使得長(zhǎng)蛸在調(diào)節(jié)滲透壓、解毒排泄和呼吸作用方面產(chǎn)生障礙，進(jìn)而對(duì)機(jī)體造成損害。

4 結(jié)論

(1)不同濃度的氨氮脅迫48 h后，長(zhǎng)蛸組織器官損傷程度與氨氮脅迫濃度呈正相關(guān)，即隨著脅迫濃度的升高，組織損傷程度越來(lái)越明顯。

(2)腎臟的組織結(jié)構(gòu)損傷程度較大，鰓和肝臟次之。

(3)隨著氨氮脅迫濃度的升高，鰓和肝組織細(xì)胞核直徑逐漸增大，組織細(xì)胞排列逐漸松散，部分細(xì)胞核開(kāi)始溶解，導(dǎo)致空泡化不斷加劇，腎組織細(xì)胞液外滲。