液態(tài)發(fā)酵雞樅菌的條件優(yōu)化

趙志琴，張 寧，王 晨，呂榮玉，范志華,2,*，孫 溪,2

（1.天津農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津 300392；2.天津市農(nóng)副產(chǎn)品深加工技術(shù)工程中心，天津 300392）

雞樅菌（Collybia albuminosa）屬傘菌亞綱傘菌目蟻巢傘屬[1]，又名雞宗、雞絲菇、蟻縱等，夏秋季生長(zhǎng)于白蟻巢，并且必須與白蟻共生。雞樅菌含有較高含量的多糖、多種氨基酸，以及K、Fe、Cu 等多種礦物質(zhì)元素[2-3]，是一種珍貴的食藥真菌[4-5]。雞樅菌主要分布在我國(guó)高海拔的西南、東南地區(qū)，如云南、貴州、四川、西藏等省區(qū)，我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)也有分布[6]。

研究表明，多糖具有多種生理功能，如降血脂、預(yù)防動(dòng)脈硬化[7]、抗菌消炎、抗氧化[8]、保護(hù)肝臟等，尤其具有抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用[9]。從20 世紀(jì)60 年代開(kāi)始，多糖活性得到國(guó)內(nèi)外深入的研究，多糖的營(yíng)養(yǎng)保健、輔助治療等功能突出，富含多糖的各種天然食品受到人們的推崇。雞樅菌多糖主要是從菌絲體[10]和子實(shí)體[11]中提取，其生物多糖常見(jiàn)的提取方法有水提法、酸提法等[12]。王化遠(yuǎn)等[13]測(cè)定出雞樅菌菌絲體中多糖含量達(dá)6.33%。近年研究發(fā)現(xiàn)，超聲波[14]和微波輔助提取[15]均能提高多糖得率。張恒等[16]優(yōu)化了超聲輔助提取雞樅菌多糖工藝，并對(duì)其抗氧化特性進(jìn)行研究，結(jié)果表明：雞樅菌中生物多糖具有較強(qiáng)的抗氧化特性，這也是雞樅菌具有一定的醫(yī)療保健作用的原因之一。

多年來(lái)，雞樅菌以采集野生為主[17]。由于生物多樣性的變化，導(dǎo)致野生雞樅菌的生存壓力不斷加大，這給野生雞樅菌資源收集帶來(lái)巨大危機(jī)。此外，從相關(guān)雞樅菌資料來(lái)看，國(guó)外尚未有人工栽培雞樅菌的成功案例。至今國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上也沒(méi)有人工栽培成功并批量生產(chǎn)，表明人工栽培雞樅菌存在一定難度[18]。另外，相比傳統(tǒng)栽培，菌種液態(tài)發(fā)酵是一種更高效且更易于控制的方式[19]。因此，采用液態(tài)發(fā)酵法對(duì)雞樅菌資源開(kāi)發(fā)和針對(duì)提高其生物多糖含量開(kāi)展研究具有重要意義。本研究以單因素試驗(yàn)為基礎(chǔ)，通過(guò)響應(yīng)面分析法探究提高雞樅菌生物多糖含量的最佳液態(tài)發(fā)酵條件，為工廠化生產(chǎn)獲取雞樅菌生物多糖提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

雞樅菌菌種（Collybia albuminosa TZJ816），由研究單位代謝調(diào)控實(shí)驗(yàn)室保存。

葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、NaCl、苯酚、濃硫酸，均為分析純。

馬鈴薯采購(gòu)于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

1.1.2 儀器與設(shè)備

DK-S24 水浴鍋：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；UV-1800 分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限公司；H2050R 離心機(jī)：長(zhǎng)沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司；SHZ-A 水浴振蕩器，DHP-9162 恒溫培養(yǎng)箱：上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；SCIENTZ-ⅡD超聲波細(xì)胞粉碎儀：北京海天友誠(chéng)科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方

綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA 培養(yǎng)基）：20%馬鈴薯，2.0%葡萄糖，0.5%蛋白胨，0.3%瓊脂，0.5%KH2PO4，0.3%MgSO4。

基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：20%馬鈴薯，2.0%葡萄糖，0.2%蛋白胨。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20%馬鈴薯，2.0%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.5%KH2PO4，0.3%MgSO4，0.02%NaCl。

1.2.2 雞樅菌培養(yǎng)及生物多糖提取

1.2.2.1 分離純化與種子培養(yǎng)

純化：將雞樅菌菌種接入CDPA 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)1 d 后，利用涂布平板法，吸取1 mL 培養(yǎng)好的菌液置于提前準(zhǔn)備好的CDPA 培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基放置在23 ℃恒溫條件下培養(yǎng)，待長(zhǎng)出白色菌絲，挑取其單菌落劃線分離純化，待菌絲滿管后置于4 ℃環(huán)境下保藏備用。

種子培養(yǎng)：挑取雞樅菌菌絲，接入基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基搖瓶（250 mL 三角燒瓶裝液100 mL）中。搖瓶密封后以140 r/min 于26 ℃恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)，待出現(xiàn)較多微小菌絲球后置于4 ℃冰箱中保藏備用。

1.2.2.2 液體種培養(yǎng)

分別配制不同碳源添加量、氮源添加量和初始pH 值的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，將1 mL 液體種接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基搖瓶（500 mL 三角燒瓶瓶裝液量為150 mL）中。設(shè)置不同的培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)溫度，搖瓶密封后置于140 r/min 的搖床中振蕩培養(yǎng)。

1.2.2.3 生物多糖的分離提取

對(duì)培養(yǎng)結(jié)束的液體發(fā)酵培養(yǎng)基取樣，體積記為V，3 000 r/min 離心15 min，分離上清液，用于測(cè)定胞外總糖，差量法測(cè)出沉淀物質(zhì)量（M0），加入20 倍蒸餾水，超聲波破碎10 min，然后于95 ℃恒溫水浴浸提3 h，再以3 000 r/min 離心10 min，去沉淀，保留上清液，用于測(cè)定胞內(nèi)多糖。

1.2.3 碳源添加量的篩選

使用液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)雞樅菌，其中葡萄糖作為優(yōu)先碳源，添加量分別為1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%，pH 值自然，轉(zhuǎn)速140 r/min，培養(yǎng)溫度26 ℃，培養(yǎng)3 d 后立即測(cè)定胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和菌體單位體積濕重，篩選適宜的碳源添加量。

1.2.4 氮源添加量的篩選

使用液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)雞樅菌，其中蛋白胨作為優(yōu)先氮源，添加量分別為0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%，pH 值自然，轉(zhuǎn)速140 r/min，培養(yǎng)溫度26 ℃，培養(yǎng)3 d 后立即測(cè)定胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和菌體單位體積濕重，篩選適宜的氮源添加量。

1.2.5 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.5.1 培養(yǎng)時(shí)間的篩選

選擇液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)雞樅菌，轉(zhuǎn)速140 r/min，培養(yǎng)溫度26 ℃，pH 值自然，分別培養(yǎng)1、3、5、7、9 d，測(cè)定胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和菌體單位體積濕重，篩選適宜培養(yǎng)時(shí)間。

1.2.5.2 發(fā)酵液初始pH 值的篩選

選擇液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)雞樅菌，轉(zhuǎn)速140 r/min，培養(yǎng)溫度26 ℃，初始pH 值為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，培養(yǎng)3 d 后立即測(cè)定胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和菌體單位體積濕重，篩選適宜的發(fā)酵液初始pH 值。

1.2.5.3 培養(yǎng)溫度的篩選

液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)雞樅菌，轉(zhuǎn)速140 r/min，pH值自然，培養(yǎng)溫度分別為22、24、26、28、30 ℃，培養(yǎng)3 d 后立即測(cè)定胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和菌體單位體積濕重，篩選適宜的培養(yǎng)溫度。

1.2.6 響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

通過(guò)單因素試驗(yàn)，確定出培養(yǎng)條件的大致水平，以培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、初始pH 為主要影響因素，以雞樅菌多糖含量為響應(yīng)值，根據(jù)Box-Benhnken 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用Design-Expert 11.0 軟件進(jìn)行三因素三水平試驗(yàn)[21]，確定液態(tài)培養(yǎng)雞樅菌的最佳培養(yǎng)條件。響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels of response surface experiment

1.2.7 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.2.7.1 菌體單位體積濕重

采用離心法測(cè)定。計(jì)算公式如下：

式中：ρ 為菌體濕重，g/L；M0離心后菌體質(zhì)量，g；V 為培養(yǎng)結(jié)束后的培養(yǎng)基的取樣體積，L。

1.2.7.2 胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量

以葡萄糖計(jì)，采用硫酸苯酚法[20]測(cè)定。稱取葡萄糖0.1 g，轉(zhuǎn)移到50 mL 容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，得到濃度為2 mg/mL 的葡萄糖溶液，再取葡萄糖溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于試管中，加蒸餾水至2 mL，得到濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 的葡萄糖溶液，加入5%苯酚1.0 mL，3.0 mL 濃硫酸，搖勻，靜置5 min，沸水浴15 min，冷卻至室溫。以空白為對(duì)照，在490 nm 處測(cè)定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得到回歸方程：y=0.681 6x+0.057 5，R2=0.998 5。取待測(cè)液0.2 mL，用蒸餾水稀釋成2 mL，按照上述方法測(cè)定雞樅菌胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量。

圖1 測(cè)定雞樅菌生物多糖（以葡萄糖計(jì)）含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve for determination of biological polysaccharide content(calculated by glucose)of Collybia albuminosa

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS26.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，利用Design-Expert 11.0 軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 優(yōu)先碳源添加量對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響

如圖2 所示，葡萄糖添加量低于2.5%時(shí)，隨著葡萄糖添加量的增加，菌體單位體積濕重和胞內(nèi)多糖含量呈逐漸上升趨勢(shì)，胞外總糖含量呈下降趨勢(shì)，此時(shí)雞樅菌可能處于對(duì)數(shù)期和穩(wěn)定前期，作為優(yōu)先碳源利用，呈現(xiàn)葡萄糖效應(yīng)；葡萄糖添加量為2.5%時(shí)，胞內(nèi)多糖含量達(dá)到最大值3.23 g/L；葡萄糖添加量高于2.5%時(shí)，菌體單位體積濕重和胞內(nèi)多糖呈下降趨勢(shì)，胞外多糖呈上升趨勢(shì)，此時(shí)雞樅菌處于穩(wěn)定后期和逐漸進(jìn)入衰亡期，代謝產(chǎn)物可能會(huì)引起反饋調(diào)節(jié)，葡萄糖消耗量較少，或者葡萄糖添加量超過(guò)2.5%抑制了雞樅菌的生長(zhǎng)，造成雞樅菌死亡。因此，葡萄糖添加量為2.5%時(shí)，最適合雞樅菌的生長(zhǎng)，此結(jié)論與王坤等[22]的結(jié)論相似。

圖2 葡萄糖添加量對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響Fig.2 Effect of glucose addition on extracellular total sugar,intracellular polysaccharide contents and wet weight per unit volume in Collybia albuminosa fermentation liquid

2.2 優(yōu)先氮源添加量對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響

由圖3 可以看出，蛋白胨添加量低于0.25%時(shí)，菌體單位體積濕重和胞內(nèi)多糖含量隨蛋白胨添加量的增加呈上升趨勢(shì)，胞外總糖含量呈下降趨勢(shì)，可能是蛋白胨含量過(guò)低不能支持雞樅菌的生長(zhǎng)，當(dāng)?shù)鞍纂撕吭黾訒r(shí)，雞樅菌生長(zhǎng)加快，菌絲體開(kāi)始積累，胞外總糖逐漸被消耗；當(dāng)?shù)鞍纂颂砑恿繛?.25%時(shí)，菌體單位體積濕重達(dá)到最大值27 g/L，此時(shí)菌絲體產(chǎn)生量最多；但蛋白胨添加量超過(guò)0.25%后，菌體單位體積濕重和胞外多糖含量呈下降趨勢(shì)，胞內(nèi)多糖含量呈上升趨勢(shì)。這是因?yàn)榈鞍纂颂砑舆^(guò)量可能抑制雞樅菌的生長(zhǎng)，或者使雞樅菌破壁死亡，也可能在雞樅菌生長(zhǎng)后期，菌種處于老化階段。由此可見(jiàn)，氮源添加量為0.25%時(shí)最適合雞樅菌的生長(zhǎng)。

圖3 氮源添加量對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響Fig.3 Effect of nitrogen addition on extracellular total sugar,intracellular polysaccharide contents and wet weight per unit volume in Collybia albuminosa fermentation liquid

2.3 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響

如圖4 所示，雞樅菌單位體積濕重呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，接種孢子培養(yǎng)7 d，雞樅菌單位體積濕重積累達(dá)到峰值，為23 g/L。培養(yǎng)前期（0～3 d），雞樅菌快速生長(zhǎng)，以消耗碳源為主；進(jìn)入旺盛期至穩(wěn)定期（3～7 d），代謝較為旺盛，碳源氮源消耗最大，菌絲積累較多，胞外總糖和胞內(nèi)多糖出現(xiàn)極值；培養(yǎng)7 d 后，進(jìn)入衰亡期，細(xì)胞可能破壁自溶而溶出多糖。因而雞樅菌培養(yǎng)液離心測(cè)定上清液胞外總糖含量呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，而胞內(nèi)多糖含量反之，說(shuō)明雞樅菌較為適宜的培養(yǎng)時(shí)間為7 d。

圖4 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響Fig.4 Effect of culture time on extracellular total sugar,intracellular polysaccharide contents and wet weight per unit volume in Collybia albuminosa fermentation liquid

2.3.2 初始pH 對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響

由圖5 可見(jiàn)，初始pH 從5 升高到6，雞樅菌單位體積濕重和胞內(nèi)多糖含量呈上升趨勢(shì)，胞外多糖含量呈下降趨勢(shì)。羅海凌等[23]研究表明，pH 值對(duì)食用菌菌絲生長(zhǎng)影響較大。本試驗(yàn)中初始pH 值從5 升至6時(shí)，菌體單位濕重呈先增加后減小的趨勢(shì)，說(shuō)明雞樅菌不適合強(qiáng)酸性條件下生長(zhǎng)；初始pH 值超過(guò)6，雞樅菌單位體積濕重和胞內(nèi)多糖均呈下降趨勢(shì)，胞外多糖呈上升趨勢(shì)，說(shuō)明初始pH＞6 已經(jīng)不適合雞樅菌的生長(zhǎng)，此時(shí)雞樅菌生長(zhǎng)代謝緩慢。因此，pH=6 最適合雞樅菌的生長(zhǎng)。

圖5 初始pH 對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響Fig.5 Effect of initial pH on extracellular total sugar,intracellular polysaccharide contents and wet weight per unit volume in Collybia albuminosa fermentation liquid

2.3.3 培養(yǎng)溫度對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響

由圖6 可見(jiàn)，當(dāng)培養(yǎng)溫度低于26 ℃時(shí)，雞樅菌單位體積濕重和胞內(nèi)多糖含量呈上升趨勢(shì)，胞外總糖含量呈下降趨勢(shì)，這是因?yàn)榕囵B(yǎng)溫度較低，雞樅菌活性較低，生長(zhǎng)速度較慢；隨著培養(yǎng)溫度的升高，雞樅菌活性增強(qiáng)，26 ℃時(shí)雞樅菌單位體積濕重達(dá)到最大值25 g/L，胞外總糖含量達(dá)到最小值1.012 g/L，胞內(nèi)多糖含量達(dá)到最大值2.76 g/L；當(dāng)培養(yǎng)溫度高于26 ℃時(shí)，雞樅菌單位體積濕重和胞內(nèi)多糖含量呈下降趨勢(shì)，胞外總糖含量呈上升趨勢(shì)，這是因?yàn)榕囵B(yǎng)溫度過(guò)高會(huì)造成雞樅菌活性下降或失活，其利用培養(yǎng)基中葡萄糖的能力降低。說(shuō)明培養(yǎng)溫度為26 ℃時(shí)最適合雞樅菌的生長(zhǎng)。

圖6 培養(yǎng)溫度對(duì)雞樅菌液胞外總糖、胞內(nèi)多糖含量和單位體積濕重的影響Fig.6 Effect of culture temperature on extracellular total sugar,intracellular polysaccharide contents and wet weight per unit volume in Collybia albuminosa fermentation liquid

2.4 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果

2.4.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與方差分析

試驗(yàn)以隨機(jī)次序進(jìn)行，將試驗(yàn)所得的多糖含量用Design-Expert 11.0 軟件進(jìn)行分析，并得出響應(yīng)面分析圖、回歸擬合方程，以及方差分析表。響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)對(duì)表2 試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，擬合得出關(guān)于培養(yǎng)時(shí)間（X1）、培養(yǎng)溫度（X2）、初始pH（X3）的二次多項(xiàng)式方程：

表2 中心組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Experimental results of central combination design

對(duì)模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回歸模型方差分析Table 3 Regression model variance analysis

由表3 可知，該回歸模型是極顯著的（P＜0.01），X1對(duì)響應(yīng)值影響顯著（P＜0.05），X2、X3、X1X3、X21、X22對(duì)響應(yīng)值影響極顯著（P＜0.01），X1X2、X2X3、X23對(duì)響應(yīng)值影響不顯著，同時(shí)由各因素均方值可以得出影響雞樅菌生物多糖含量的各因素排序?yàn)椋篨3＞X2＞X1。該模型失擬項(xiàng)P 值為0.592 7，失擬項(xiàng)用來(lái)表示所用模型與試驗(yàn)擬合的程度，這意味著失擬項(xiàng)是不顯著的，即模型與試驗(yàn)值的差異較小。同時(shí)模型的決定系數(shù)R2＝0.962 6，說(shuō)明雞樅菌生物多糖含量的試驗(yàn)值與預(yù)測(cè)值之間有很好的擬合度。

2.4.2 各因素交互作用的響應(yīng)面分析

響應(yīng)面圖形是響應(yīng)值Y 對(duì)各試驗(yàn)因子X(jué)1、X2、X3的函數(shù)圖形，從響應(yīng)面圖形上可以形象地看出最佳參數(shù)及各參數(shù)之間的相互作用[24]。響應(yīng)面分析等高圖直觀地反映出各因素交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響[25]。圖8～10中的響應(yīng)面展示了某兩個(gè)因素的交互作用對(duì)液體培養(yǎng)雞樅菌生物多糖含量的影響。由等高線圖可知，多糖含量Y 存在最高值，各因素均有一個(gè)對(duì)應(yīng)的最適值。

圖7 培養(yǎng)時(shí)間與培養(yǎng)溫度的交互作用對(duì)雞樅菌多糖含量影響的響應(yīng)面圖Fig.7 Response surface diagram of effect of culture time and temperature interaction on polysaccharide content in Collybia albuminosa

圖8 培養(yǎng)溫度與初始pH 的交互作用對(duì)雞樅菌多糖含量影響的響應(yīng)面圖Fig.8 Response surface diagram of effect of culture temperature and initial pH interaction on polysaccharide content in Collybia albuminosa

圖9 培養(yǎng)時(shí)間與初始pH 的交互作用對(duì)雞樅菌多糖含量影響的響應(yīng)面圖Fig.9 Response surface diagram of effect of culture time and initial pH interaction on polysaccharide content in Collybia albuminosa

2.4.3 最佳培養(yǎng)條件的確定

對(duì)方程進(jìn)行最優(yōu)求解得到，培養(yǎng)條件的最優(yōu)組合為：培養(yǎng)時(shí)間7.65 d，培養(yǎng)溫度27.60 ℃，初始pH為7，預(yù)測(cè)的生物多糖含量為2.67 g/L?？紤]到實(shí)際操作，將最優(yōu)解修正，即：培養(yǎng)時(shí)間8 d，培養(yǎng)溫度27.60 ℃，初始pH 為7。為了檢驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果的可靠性，采用修正后的組合條件進(jìn)行3 次平行試驗(yàn)，得出雞樅菌生物多糖平均含量為2.71 g/L，與理論預(yù)測(cè)值2.67 g/L基本吻合。因此，利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化得到的雞樅菌的培養(yǎng)條件真實(shí)可靠，具有很好的實(shí)用價(jià)值。

3 結(jié)論

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、初始pH 為試驗(yàn)因素，根據(jù)Box-Benhnken 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用Design-Expert 11.0 軟件進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)，以多糖含量為考察指標(biāo)，對(duì)雞樅菌液體培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。響應(yīng)面試驗(yàn)得到雞樅菌液體培養(yǎng)的最佳條件為：葡萄糖添加量2.50%，蛋白胨添加量0.25%，培養(yǎng)時(shí)間8 d，培養(yǎng)溫度27.6 ℃，初始pH 為7，在此條件下，雞樅菌生物多糖含量為2.71 g/L。