急性髓系白血病患者血漿IL-10水平的變化與意義研究＊

文/王玉芳，齊福，王朝喆，孫瑞婧, 王靜，王希娣

白細(xì)胞介素 10 (IL-10) 是一種多效性細(xì)胞因子，主要由2型輔助細(xì)胞 (Th2)，單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，以及正常和惡性B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。 IL-10可以通過抑制 Th1型細(xì)胞因子而發(fā)揮免疫抑制作用，包括干擾素-γ和白細(xì)胞介素-2。因此，作為免疫紊亂的急性髓系白血病，與免疫功能密切相關(guān)的IL-10表達(dá)水平可能發(fā)生病理性改變。我們針對(duì)文獻(xiàn)關(guān)于白血病與IL-10水平關(guān)系報(bào)道的異質(zhì)性，選擇了部分急性髓系白血病患者進(jìn)行了治療前后的血漿水平檢測，以便進(jìn)一步明確IL-10的變化特點(diǎn)。

1 材料方法

1.1 研究對(duì)象

按照國際上統(tǒng)一的FAB診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇門診或住院急性髓系白血病患者35例，并作為檢測和研究的對(duì)象。35例類AML患者，男18例，女17例，年齡21-61歲。25例健康查體者為正常對(duì)照組，男14例，女11例，年齡27-58歲。根據(jù)臨床診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)，判斷治療效果。標(biāo)本收集均按照兩個(gè)醫(yī)院的醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定進(jìn)行。

1.2 樣本處理

抽取患者或正常健康查體人群的外周血5-6ml，室溫放置15分鐘，自凝后，2000rp離心20分鐘，分離血清后，-20℃冰箱保存。標(biāo)準(zhǔn)曲線：IL-10的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度分別為320 pg/ml, 160 pg/ml, 80 pg/ml，40 pg/ml，20 pg/ml，10 pg/ml，0 pg/ml。

1.3 ELISA檢測

按照試劑盒說明書，在96孔酶標(biāo)板上加入樣品稀釋液稀釋5倍的樣品50 μl。輕輕搖動(dòng)，充分混勻。同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔。待用封板膜封板后，放在保濕盒中，放置37℃恒溫箱中，進(jìn)行30分鐘的溫育。依次經(jīng)過洗滌3次后，拍手。每個(gè)實(shí)驗(yàn)孔中加入酶標(biāo)試劑50 μl。按照上述溫育方法進(jìn)行30分鐘溫育。溫育后，同法進(jìn)行3次洗滌。結(jié)果顯色：每孔依次加入入顯色劑A 50 μl，再加入顯色劑B 50 μl，在 37℃條件下，避光顯色，定時(shí)右眼觀察，約15分鐘時(shí)，加入終止液50 μl。最后用空白空調(diào)零，450 nm波長下測量各孔吸光度。其中，濃度檢測高于標(biāo)準(zhǔn)上限時(shí)，繼續(xù)稀釋后再做檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 白血病患者血漿IL-10水平的變化

檢測結(jié)果表明，正常對(duì)照組的血清 IL-10水平為(26.99±17.17) pg/ml, 初發(fā)急性髓系白血病的血清 IL-10水平為(77.20±63.27) pg/ml，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析，初發(fā)白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于正常健康人對(duì)照組的血清 IL-10水平，t=2.996,P=0.0096, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1）。

圖1 正常對(duì)照組和初發(fā)急性髓系白血病的血清 lL-10水

2.2 白血病患者治療前后血漿IL-10水平的變化

選擇一組化療后完全緩解組的白血病患者，對(duì)緩解前后的血清 IL-10水平進(jìn)行了對(duì)比性檢測，結(jié)果表明治療前白血病患者的血清IL-10水平為(73.73±29.67) pg/ml, 完全緩解時(shí)病的血清 IL-10水平為(50.76±11.38) pg/ml，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析，治療前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于完全緩解組的血清 IL-10水平，t=2.489,P=0.0271, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2）。骨髓移植治療前和取得完全緩解后的白血病患者血清IL-10水平分別為(88.45±76.06) pg/ml和(60.92±23.73) pg/ml，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析，移植前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于移植后完全緩解組的血清 IL-10水平，t=2.099,P=0.0438, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3）。

圖2 治療前與完全緩解組急性髓系白血病的血清 lL-10水平變化（pg/ml）（*，P＜0.05）

圖3 骨髓移植前后急性髓系白血病的血清 lL-10水平變化（pg/ml）（*，P＜0.05）

3 討論

白細(xì)胞介素 10 (IL-10) 是一種多效性細(xì)胞因子，主要由2型輔助細(xì)胞 (Th2)，單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，以及正常和惡性B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。IL-10是細(xì)胞因子家族的創(chuàng)始成員，還包括 IL-19、IL-20、IL-22、IL-24、IL-26、IL-28A、IL-28B 和 IL-29。無論是在動(dòng)物模型和人體研究，發(fā)現(xiàn)IL-10參與許多疾病的發(fā)生與發(fā)展過程。然而，盡管 IL-10 生物學(xué)取得了相當(dāng)大的進(jìn)展，許多懸而未決的問題仍然存在。主要的原因之一是IL-10 產(chǎn)生的細(xì)胞比較廣泛，對(duì)IL-10 反應(yīng)的細(xì)胞種類較多，其介導(dǎo)的免疫反應(yīng)往往取決于不同疾病、不同組織環(huán)境。在該領(lǐng)域的研究方面，需要更深入的了解IL-10 生物學(xué)的地位，特別是控制 IL-10 產(chǎn)生和作用的分子機(jī)制，以及這種細(xì)胞因子在不同情況下可能發(fā)揮的具體作用。

IL-10可以通過抑制 Th1型細(xì)胞因子而發(fā)揮免疫抑制作用，包括干擾素-γ和白細(xì)胞介素-2。IL-10對(duì)細(xì)胞具有比較廣泛的活性。IL-10 可顯著抑制人單核細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的 IL-1α等細(xì)胞因子，由于其對(duì)上述細(xì)胞因子合成的抑制作用，IL-10 可能是一種具有免疫功能的負(fù)調(diào)控因子。但是，其在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的變化和意義仍然在不斷地明確過程中。因此，作為免疫紊亂的急性髓系白血病患者，與免疫功能密切相關(guān)的IL-10表達(dá)水平變化值得進(jìn)一步研究。我們針對(duì)文獻(xiàn)關(guān)于白血病與IL-10水平關(guān)系報(bào)道的異質(zhì)性，選擇了部分急性髓系白血病患者進(jìn)行了治療前后的血漿水平檢測，以便進(jìn)一步明確IL-10的變化特點(diǎn)。結(jié)果表明，初發(fā)白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于正常健康人對(duì)照組的血清 IL-10水平, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)發(fā)現(xiàn)治療前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于完全緩解組的血清 IL-10水平。移植前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于移植后完全緩解組的血清 IL-10水平。結(jié)果表明白血病患者血清IL-10水平降低與白血病的發(fā)生和病期有關(guān)，其血清水平的恢復(fù)可以作為病情檢測的生物學(xué)指標(biāo)。