大組織切片技術(shù)用于前列腺癌診斷中的臨床價值

文/張萌

前列腺癌作為泌尿外科中一類常見病癥，好發(fā)于老年群體中，若不及早治療，錯過最佳治療時機(jī)具有較高的死亡率。雖然從整體上看我國前列腺癌的發(fā)病率比西方國家低一些，但是近幾年隨著人們飲食習(xí)慣的改變、人口老齡化趨勢加劇等，前列腺癌的發(fā)生率與死亡率呈現(xiàn)出日益升高的趨勢。早發(fā)現(xiàn)、早識別、早治療是改善前列腺癌患者預(yù)后以及降低死亡率的關(guān)鍵。當(dāng)前臨床診斷前列腺癌的方式較多，其中病理診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，也是評定其他診斷方式準(zhǔn)確性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。由于前列腺癌大多分散在患者整個前列腺組織內(nèi)，采用傳統(tǒng)組織切片技術(shù)需將患者前列腺切成20～40個組織塊后再進(jìn)行制片處理，這種操作會對前列腺組織的完整性造成破壞，從而降低了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。而大組織切片技術(shù)則是從患者前列腺的整個切面分層進(jìn)行取材，保留了前列腺的完整性，因此檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。本文采用分組的方式比較了在前列腺癌的診斷中分別應(yīng)用大組織切片技術(shù)與傳統(tǒng)組織切片技術(shù)進(jìn)行診斷的臨床價值，詳情見下文。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧分析2011年1月至2020年12月這段時間在病理科行切片技術(shù)診斷的前列腺癌患者臨床資料，根據(jù)患者病理組織切片方式的差異予以分組，抽取68例應(yīng)用傳統(tǒng)組織切片技術(shù)的患者作為參照組，再抽取68例應(yīng)用大組織切片技術(shù)的患者作為觀察組。參照組：最小年齡為58歲，最大年齡為75歲，平均年齡（68.24±4.36）歲，平均體重指數(shù)（23.16±1.08）kg/m。觀察組：最小年齡56歲，最大年齡78歲，平均年齡（68.31±4.25）歲，平均體重指數(shù)（23.18±1.11）kg/m；以數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件對兩組患者的一般資料開展統(tǒng)計學(xué)分析，得出P＞0.05，提示一般資料無顯著差異，具備可比性。

所有患者在術(shù)后經(jīng)病理診斷確診為前列腺癌，臨床資料完整，對本研究知情，簽署知情同意書。

排除合并其他惡性腫瘤、標(biāo)本缺失、伴有內(nèi)臟及骨骼轉(zhuǎn)移的患者。

1.2 方法

參照組的患者行傳統(tǒng)組織切片技術(shù)，觀察組患者則行大組織切片技術(shù)。

本次診斷所需的儀器包含：（1）奧林巴斯顯微鏡；（2）中威全自動脫水機(jī)；（3）徠卡CV全自動封片機(jī)；（4）徠卡RM2245石蠟切片機(jī)；（5）江蘇世泰公司提供的大組織包埋盒、載玻片、蓋玻片、染色劑；（6）中威PRS-B全自動染色機(jī)與PBM-B包埋機(jī)；（7）德國羅氏公司提供的CobasE601電化學(xué)發(fā)光儀；（8）由日本NanoZoomer公司提供的NDP20數(shù)字病理掃描儀；（9）北京中杉金橋公司提供的生物色標(biāo)劑；（10）青島海爾公司提供的超低溫冰箱。

通過手術(shù)的方式獲得患者前列腺標(biāo)本，確保該標(biāo)本完整，獲得標(biāo)本后立即送至病理科待檢。由病理科的醫(yī)務(wù)人員將其放置在取材本上，放置時注意將精囊腺向上，尖部尿道口則面向醫(yī)務(wù)人員，分別選擇紅色與黑色兩種顏色的特殊染料對標(biāo)本實(shí)施染色處理，分別將前列腺左右兩側(cè)標(biāo)記出來，通常左側(cè)為紅色，右側(cè)為黑色。待標(biāo)本自然吹干后，應(yīng)用濃度4%的中性甲醛溶液對其固定處理，時間應(yīng)＞12h。第2d將取出標(biāo)本，應(yīng)用取材刀將標(biāo)本的精囊腺離斷，從前列腺尖部開始直到基底部按照與尿道垂直的方向?qū)嵤┕跔钋忻?，盡量將每個組織片的厚度控制在3～4um，共為6～7塊即可，并按照先后順序依次標(biāo)號，再將組織切片放在大小為5*7cm的大組織網(wǎng)狀包埋盒內(nèi)，應(yīng)用鏤空板條將其固定好，再次將其置于甲醛溶液固定，放置時間宜＞12h，目的使標(biāo)本中央的組織充分固定。第2d將標(biāo)本取出，乙醇梯度脫水后，應(yīng)用二甲苯透明，選用高密度的石蠟浸漬處理，在將其置于組織脫水機(jī)中實(shí)施自動化處理，將試劑的溫度控制在45℃，將石蠟溫度控制在65℃左右。經(jīng)上述處理過后的組織片制作成大蠟塊，制作方法主要采用二次包埋法，通常是將切片與精囊腺最大切面實(shí)施包埋，而針對前列腺尖部與底部切緣同包埋垂直。對蠟塊進(jìn)行常規(guī)修正并鑲裝，石蠟大組織切片機(jī)連續(xù)勻速平推切片，將切片的厚度控制在5um，將切片放置在定制的大規(guī)格載玻片上，對其常規(guī)漂洗、HE染色后，實(shí)施數(shù)字病理掃描。

通過手術(shù)的方式獲得參照組患者新鮮且完整的前列腺標(biāo)本，獲得標(biāo)本后立即將其送至病理科待檢，標(biāo)本切片前處理方法與觀察組處理方法相同，應(yīng)用甲醛溶液將標(biāo)本充分固定后，將精囊腺離斷，切取前列腺尖部與底部，切片的厚度控制在2～3um，剩余的部分左右側(cè)分開，依次將其切成體積≤15cm×10cm×5cm的組織塊，數(shù)量約40～60塊。分別取前列腺尖部、底部切緣、精囊腺、輸尿管、穿刺定位的病灶組織塊，將其依次標(biāo)號，置于普通包埋盒內(nèi)，采用觀察組相同的方法對包埋組織實(shí)施連續(xù)切片，將切面置于一般規(guī)格的載玻片上，處理后實(shí)施數(shù)字病理掃描。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）對比兩組病理切片的情況。

（2）對比兩組病理診斷結(jié)果，內(nèi)容包含切緣陽性所占比例、微小病灶所占比例、精囊侵犯所占比例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移所占比例。

（3）統(tǒng)計兩組患者腫瘤分期。關(guān)于前列腺癌GS的評分標(biāo)準(zhǔn)主要是參照腫瘤分化的程度判定為1～5分，其中1分代表分化好，惡性程度低；5分表示分化差，惡性程度高。將所占比例最高的癌灶分化分組當(dāng)作主要結(jié)構(gòu)評分，主要結(jié)構(gòu)評分+次要結(jié)構(gòu)評分為總分，單一分化時需要將分?jǐn)?shù)重疊相加，三種及以上分化時，則需要將所占比例最小但是評分最高級別的腫瘤分化數(shù)當(dāng)作次要結(jié)構(gòu)評分，總分為2～10分，將評分＞8分記作高危。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組病理切片情況分析

結(jié)果顯示：兩組切面均未見褶皺或者收縮，擁有完整的結(jié)構(gòu)，可清晰地觀察到細(xì)胞形態(tài)。而觀察組能夠全面且多層地觀察到前列腺病變情況，明確病灶所在的部位，并對前列腺切緣是否陽性以及微小病灶進(jìn)行直觀辨別，具體見圖1所示。而傳統(tǒng)組織切片技術(shù)由于遭受切緣取材的限制，不能全面觀察到前列腺病變情況及其與周圍組織的關(guān)系，無法明確腫瘤與切緣間的距離和切緣是否為陽性。

圖1 蘇木精——伊紅染色切片

2.2 兩組病理診斷結(jié)果比較

根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示：觀察組病理切緣陽性所占比例、微小病灶所占比例均高于參照組，且P＜0.05，而在精囊侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移所占比例無顯著差異（P＞0.05），見表1。

表1 兩組病理診斷結(jié)果比較[n（%）]

2.3 兩組患者腫瘤分期比較

根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示，兩組患者各個腫瘤分期所占的比例無顯著差異（P＞0.05），見表2。

表2 兩組患者腫瘤分期比較[n（%）]

3 討論

前列腺癌作為泌尿系統(tǒng)中發(fā)病率最高的一類惡性腫瘤，在男性惡性腫瘤中所占比例為13.5%，其中95%以上為前列腺腺癌，在老年男性群體中具有較高的發(fā)病率與死亡率，威脅患者生命安全。迄今為止，前列腺癌的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，但是大部分學(xué)者認(rèn)為遺傳因素、性生活頻繁、長期食用高脂肪食物是該病的危險因素。由于前列腺癌具有潛伏期生長緩慢的特征，因此早診斷、早發(fā)現(xiàn)、早治療是改善前列腺癌預(yù)后的關(guān)鍵。以往臨床上診斷前列腺癌的方法較多，例如直腸指檢、PSA檢測、直腸超聲穿刺活檢等。其中直腸指檢對外周病灶檢出缺乏敏感性，并且檢查結(jié)果容易受到個體差異的影響，從而限制了其在前列腺癌診斷中的應(yīng)用。而血清PSA作為篩查前列腺癌的一種基礎(chǔ)指標(biāo)，容易遭受各種因素的影響，因此特異度與敏感度偏低。例如，如果PAS的水平為4～10ng/ml時，前列腺癌的檢出率僅僅為25%，假如根據(jù)這一診斷結(jié)果實(shí)施穿刺活檢，具有較強(qiáng)的隨機(jī)性與盲目性，可能出現(xiàn)過度診療的現(xiàn)象，引起患者醫(yī)療費(fèi)用支出增加。而切片技術(shù)作為臨床上診斷惡性腫瘤的重要病理技術(shù)，發(fā)揮重要作用，大組織切片技術(shù)在我國的開展時間較短。

在上文中，對比了在前列腺癌患者診斷中，分別應(yīng)用傳統(tǒng)組織切片技術(shù)與大組織切片技術(shù)的診斷結(jié)果，結(jié)果顯示：大組織切片技術(shù)診斷切緣陽性所占比例、微小病灶所占比例41.48%、35.59%均高于傳統(tǒng)組織切片技術(shù)14.71%、5.88%，且P＜0.05。其中傳統(tǒng)前列腺癌病理切片技術(shù)主要是將前列腺組織切成數(shù)個組織塊，致使前列腺喪失了本身的完整性，增加了從整體對腫瘤分布、腫瘤負(fù)荷、切緣等進(jìn)行觀察的難度。而大切片技術(shù)相比于傳統(tǒng)的切片技術(shù)，制片的數(shù)量較少，充分確保前列腺的完整性，方便相關(guān)醫(yī)師借助顯微鏡直觀地觀察整個前列腺標(biāo)本橫斷面，并準(zhǔn)確勾畫出腫瘤所在的范圍，準(zhǔn)確定位腫瘤，對前列腺各區(qū)、精囊腺的累及情況、切緣等進(jìn)行觀察，同時還方便與CT、MRI等影像學(xué)診斷進(jìn)行對比，提高了患者檢查的準(zhǔn)確性與連貫性。

雖然大切片組織技術(shù)相比于傳統(tǒng)組織切片技術(shù)存在一定的優(yōu)勢，但是由于該技術(shù)對病理科醫(yī)師的專業(yè)水平要求較高，稍有不慎，便可能因?yàn)椴僮鞑划?dāng)影響診斷結(jié)果，歸納起來常見的問題包含：（1）取材問題。開展病理組織切片制作的第一個步驟便是取材，取材過程中比較常見的問題有病變組織變形或者壞死、切片組織的厚薄不均勻、體積大小不當(dāng)?shù)?，這些因素均會影響制片質(zhì)量。另外描述病變組織部位不正確、記載差異等等也是影響制片質(zhì)量的重要因素。針對這一問題，可采取相應(yīng)的解決措施，首先科學(xué)地確定組織標(biāo)本的體積，獲得標(biāo)本后要立即對其進(jìn)行處理，以免保存不當(dāng)致使標(biāo)本被污染，降低了制片的質(zhì)量。除此之外，在記錄過程中還應(yīng)當(dāng)注意對標(biāo)本的具體情況進(jìn)行清晰描述，取材時注意避免標(biāo)本被污染。（2）對于新鮮的組織標(biāo)本，需要對其實(shí)施固定處理以后才能維持細(xì)胞原有的固定形態(tài)，否則可能發(fā)生組織自溶的情況。所以，待組織離體后需要盡快將其放置在固定液內(nèi)實(shí)施固定處理，保證其固定充分，一般情況下，小標(biāo)本固定的時間為4～6h，大標(biāo)本固定的時間為12～24h。染色的效果主要取決于染色試劑，在對組織標(biāo)本開展脫水、浸蠟、包埋、切片等制作過程中，需要結(jié)合臨床需求選擇最佳的試劑，并及時更新過期的透明用酒精、二甲苯等，結(jié)合蘇木精著色的能力確定細(xì)胞染色的時間，從而保證切片的質(zhì)量。（3）在對患者組織切片實(shí)施染色操作時，需要嚴(yán)格按照規(guī)定的路徑開展，保證組織切片獲得滿意的染色效果，以免發(fā)生假陽性片或者無色片的現(xiàn)象。在進(jìn)行抗原修復(fù)時，為了確保獲得滿意的染色效果與著色質(zhì)量，應(yīng)當(dāng)選擇顯色良好的染色劑，以獲得高質(zhì)量的病理組織切片。在開展抗原陽性與陰性的對照試驗(yàn)過程中，需要嚴(yán)格控制好切片染色的時間，操作人員必須嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)流程與規(guī)范進(jìn)行制片，注意避免病理組織被污染，全面提升制片的質(zhì)量。

綜上所述，在前列腺癌的診斷中應(yīng)用大組織切片技術(shù)，相比于傳統(tǒng)的切片技術(shù)，能夠更加全面地觀察到前列腺組織，便于直觀觀察病灶的數(shù)量、切緣情況、空間分布的情況，提高切緣陽性、微小病灶以及精囊侵犯的檢出率，為前列腺癌患者術(shù)后局部精準(zhǔn)治療提供病理依據(jù)。