miR-29a基因敲除對C57BL/6小鼠腎小球結(jié)構(gòu)和功能的影響*

李 慧， 王 鑫， 王向東， 李 莉， 于小玲△， 鞏永鳳△

（1青島大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與病理生理學(xué)系，山東 青島 266073；2濱州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系，山東 煙臺 264000）

微小RNA（microRNA，miR）是內(nèi)源的?。?9～25個核苷酸）單鏈非編碼RNA 轉(zhuǎn)錄物，通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因的表達(dá)阻斷蛋白翻譯來調(diào)節(jié)正常的生理和病理過程［1-2］。越來越多的研究證明，一些關(guān)鍵miRNA的失調(diào)會導(dǎo)致進(jìn)行性腎小球和腎小管間質(zhì)纖維化，miRNA 在腎臟疾病中的作用已成為目前研究的熱點［3-5］。miR-29屬于miRNA 家族，miR-29家族在正常腎臟等組織中高度表達(dá)，在腎臟疾病的發(fā)病機(jī)理中起著重要的作用。已有研究顯示miR-29 與纖維化密切相關(guān)，miR-29 參與纖維化過程是通過抑制多種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的表達(dá)、調(diào)節(jié)多種與纖維化有關(guān)的信號通路來參與纖維化過程［6-8］。研究顯示，在鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的C57BL/6 小鼠糖尿病模型中miR-29a的表達(dá)下調(diào)，而miR-29a轉(zhuǎn)基因糖尿病小鼠的腎臟功能和腎小球足細(xì)胞存活率都有所改善［9］。也有研究證明在糖尿病小鼠中外源性誘導(dǎo)miR-29a過表達(dá)可以降低纖維化基因標(biāo)志物的表達(dá)，減弱Wnt/βcatenin 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性，起到減輕腎纖維化的作用［10］。腎小管上皮細(xì)胞中誘導(dǎo)miR-29a下調(diào)，會使腎小管細(xì)胞中IV 型膠原蛋白沉積［11］。以上的研究說明miR-29a與糖尿病腎病及腎臟纖維化有密切的關(guān)系，但先前的實驗并沒有證明miR-29a基因缺失是否會直接導(dǎo)致腎小球纖維化而影響腎小球的功能和結(jié)構(gòu)。因此，在本研究中，我們利用miR-29a基因敲除小鼠，檢測其發(fā)育至不同周齡的蛋白尿的變化，同時通過組織學(xué)染色觀察腎小球組織結(jié)構(gòu)改變，并進(jìn)一步通過電鏡觀察腎小球超微結(jié)構(gòu)，最后，探討miR-29a敲除小鼠腎小球足細(xì)胞標(biāo)志蛋白以及基底膜功能蛋白的變化。本研究初步探索了敲除miR-29a是否可以造成不同發(fā)育階段的小鼠出現(xiàn)腎小球功能障礙、結(jié)構(gòu)損傷以及纖維化，為miR-29a與慢性腎臟疾病尤其是纖維化提供參考資料。

材料和方法

1 實驗動物來源及分組

CRISPR/Cas9 技術(shù)敲除C57BL/6 小鼠的miR-29a基因，miR-29a敲除小鼠由比利時魯汶大學(xué)實驗室贈予，SPF 級別的4 周齡雄性小鼠2 只，體重分別為17.41 g、18.86 g。待敲除miR-29a雄性小鼠性成熟后，將其與野生型C57BL/6 的雌性小鼠雜交，獲取后代為雜合子的雄性和雌性小鼠，并讓其雜交，根據(jù)孟德爾遺傳定律，后代有1/4 的概率獲得miR-29a敲除小鼠。出生后1 周的小鼠剪取尾巴提取DNA，采用PCR 擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳確定其基因型。選擇miR-29a基因敲除型（miR-29aknock out，miR-29aKO）小鼠作為實驗組，未敲除型小鼠作為野生型（wild tyhpe，WT）對照組（n=30）。所有動物實驗均遵守實驗動物使用原則，保持無菌環(huán)境，給予適當(dāng)?shù)臏囟群蜐穸葪l件、自由攝取飼料和飲用水，維持晝夜正常。

2 主要試劑

PowerUp?SYBR?Green 預(yù)混液、Dynabeads?M-450 Tosylactivated 微 珠、RIPA 裂 解 液 和Trizol Reagent（Thermo Fisher）；PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser（TaKaRa）；ELISA Starter Accessry Kit E101（Bethyl）；Western Lightning?Plus ECL（Perkinelmer）；AB-PAS 染色試劑盒和小鼠肌酐（creatinine，Cr）ELISA 試劑盒（江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司）；引物（上海生工生物工程股份有限公司）。

3 主要方法

3.1 蛋白尿定性和定量檢測 分別在3、12 和24 周用代謝籠收集miR-29aKO 組和WT 組小鼠24 h 尿液，考馬斯亮藍(lán)染色觀察小鼠是否出現(xiàn)蛋白尿。根據(jù)ELISA 試劑盒的說明書測量尿白蛋白和尿肌酐的濃度，并計算不同年齡段小鼠尿白蛋白/肌酐比值（urinary albumin/creatinine ratio，UACR）。

3.2 PAS 染色后組織學(xué)觀測 取3、12 和24 周miR-29aKO 組和WT 組小鼠，通過腹腔注射戊巴比妥鈉（50 mg/kg）麻醉，然后用10 mL 0.1 mol/L PBS 和20 mL 4%多聚甲醛進(jìn)行心臟灌注，一側(cè)腎臟用于電鏡實驗，一側(cè)腎臟置于4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，連續(xù)切4 μm 厚薄片，用于PAS 染色，普通顯微鏡下觀察拍照。

3.3 電鏡進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察 灌注后取一側(cè)腎臟腎皮質(zhì)區(qū)域，去除包膜，切成1 mm×1 mm×1 mm 的小塊，部分固定，在2%多聚甲醛+2%戊二醛溶液，經(jīng)脫水、浸透、包埋、組織切片染色等，在JEM-1400 透射顯微鏡（JEOL）下觀察并拍照分析；另一部分固定在2.5%戊二醛中，置于干冰或者液氮中進(jìn)行冰凍，按照冷凍蝕刻技術(shù)操作說明制備樣本［12］，在透射電鏡下觀察并拍照分析。

3.4 腎小球分離和檢測 另取一組24 周的小鼠，腹腔內(nèi)注射4%水合氯醛（10 mL/kg）麻醉小鼠，預(yù)冷的20 mL HBSS 稀釋200 μL 免疫磁珠（Dynabeads?M-450 Tosylactivated 微珠）進(jìn)行心臟灌注。隨后取雙側(cè)腎臟，切碎后用20 mL HBSS 轉(zhuǎn)移到100 μm 細(xì)胞篩，研磨過濾至50 mL 的離心管中，離心棄上清，HBSS 重懸并置于磁體上，磁吸2 min，棄液并收集含有Dynabead 的腎小球。重復(fù)至少3 次，全程都在冰上進(jìn)行。

3.5 RNA 提取以及RT-qPCR 實驗 取上述分離的腎小球，用Trizol 提取總RNA。取1 μg 的總RNA 按照PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser 試劑盒說明書逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，參照PowerUp?SYBR?Green 預(yù)混液試劑盒說明書制備20 μL 反應(yīng)體系，經(jīng)RT-qPCR 確定各基因的相對水平。用于RT-qPCR 擴(kuò)增的序列特異性引物見表1。

表1 RT-qPCR引物序列Table 1. Sequences of the primers for RT-qPCR

3.6 免疫組織化學(xué)染色法 24 周小鼠實行安樂死后立馬取出全腎置于有OCT 的包埋盒中并切成8 μm 的切片。-20 ℃甲醇固定20 min，10% FBS 室溫封閉1 h?？筺ephrin、podcin、COL4α3以及LAMB2抗體均以1∶1 000 稀釋。Ⅰ抗4 ℃過夜，PBS 洗3 次，Ⅱ抗室溫孵育2 h，PBS 洗滌后，防熒光猝滅劑Mowiol封片，LSM880 激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察與拍照。

3.7 Western blot 取上述分離的腎小球，分別加入50 μL 組織裂解液提取總蛋白。使用BCA 蛋白檢測試劑盒（TaKaRa）測其濃度。將蛋白溶解在4×SDS上樣緩沖液中，并在100 ℃或沸水浴中加熱5～10 min。等量加入到SDS-PAGE 分離蛋白，轉(zhuǎn)膜后5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，分別孵育Ⅰ抗nephrin、COL4α3以及LAMB2（1∶1 000），4 ℃過夜，TBST 洗膜后，Ⅱ抗室溫孵育2 h。洗膜后電化學(xué)發(fā)光法（ECL）顯色，用FluorChem M化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)拍照并分析。

4 統(tǒng)計學(xué)處理

使用GraphPad prism 7 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM）表示。采用t檢驗比較兩組數(shù)據(jù)，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1 miR-29a基因敲除小鼠的鑒定

基因鑒定結(jié)果顯示，miR-29aKO 組等位基因的大小為717 bp，而野生型等位基因的大小為480 bp。泳道1、4 和10 代表mR-29a KO 小鼠；2、6、7 和9 為WT 小鼠；3、5、8 為雜合子小鼠（圖1A）。RT-qPCR 結(jié)果顯示，與WT 組相比，miR-29aKO 組小鼠腎小球中miR-29a的mRNA 水平顯著下調(diào)（圖1B），而miR-29家族中的miR-29c水平在兩組之間無顯著差異，表明敲除miR-29a并不影響miR-29c的mRNA 水平（圖1B）。

Figure 1. Gene identification results. A：the results of agarose gel staining. KO：1 ，4 and 10；WT：2，6，7 and 9；heterozygotes：3，5 and 8. B：mRNA expression of miR-29a and miR-29c in glomeruli. WT：wild-type；KO：miR-29a knockout. Mean±SEM. n=5.**P＜0.01 vs WT group.圖1 基因鑒定結(jié)果

2 miR-29a敲除小鼠產(chǎn)生蛋白尿以及纖維化

考馬斯亮藍(lán)染色法分析小鼠24 h 尿液結(jié)果顯示，WT 組小鼠無蛋白尿，而miR-29aKO 組小鼠出現(xiàn)蛋白尿（圖2A）。UACR 結(jié)果顯示，miR-29aKO 組小鼠在3周時UACR值與WT組相比無顯著性差異（P＞0.05），而在12 周時UACR 值與WT 組相比有顯著性差異（P＜0.01）；24 周miR-29aKO 組小鼠WT 組相比進(jìn)一步加重（圖2B）。PAS 染色觀察小鼠腎小球結(jié)構(gòu)，miR-29aKO 組小鼠在3 周時普通顯微鏡下未見明顯病理變化，12 周和24 周時，miR-29aKO 組小鼠腎小球表現(xiàn)出更多的纖維性糖原沉積，主要是在腎小球和擴(kuò)張的系膜中，并有基底膜增厚（圖2C）。

3 miR-29a敲除小鼠腎小球超微結(jié)構(gòu)的變化

冷凍蝕刻電鏡下觀察小鼠腎小球超微結(jié)構(gòu)的變化，24 周時miR-29aKO 組小鼠的足細(xì)胞足突排列紊亂、有足突融合及足突脫落現(xiàn)象，足突數(shù)量減少以及腎小球基底膜增厚（圖3A）。標(biāo)準(zhǔn)透射電鏡觀察到，在3 周時miR-29aKO 組小鼠的足細(xì)胞足突排列較為紊亂、足突有輕微融合的現(xiàn)象，在12 周時miR-29aKO 組小鼠足突融合消失、足細(xì)胞數(shù)量減少以及腎小球基底膜增厚，24周上述變化更加明顯（圖3B）。

4 小鼠腎小球足細(xì)胞的標(biāo)志物nephrin 和podocin的變化

RT-qPCR 結(jié)果表明，與WT 組相比，敲除miR-29a顯 著 降 低nephrin 的mRNA 水 平（P＜0.05，圖4A），podocin 的mRNA 表達(dá)水平也呈下降趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，圖4A）。Western blot 和免疫熒光染色結(jié)果顯示，與WT 組相比，miR-29aKO 組小鼠足細(xì)胞nephrin 和podocin 蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.05，圖4B、4C）。

5 miR-29a 敲除小鼠腎小球COL4α3、COL4α4 和COL4α5及LAMB2的變化

RT-qPCR 結(jié)果顯示，與WT 組小鼠相比，miR-29aKO 組COL4α3、COL4α4、COL4α5 和LAMB2 的mRNA 表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05，圖5A）。免疫熒光結(jié)果顯示，COL4α3 和LAMB2 的表達(dá)上調(diào)（圖5C），COL4α3 與nephrin 的熒光基本重合，LAMB2 與nephrin 的熒光部分重合。Western blot 結(jié)果顯示，miR-29aKO 組小鼠腎小球中COL4α3/4/5 和LAMB2 蛋白表達(dá)也顯著上調(diào)（P＜0.05，圖5B）。

討論

研究顯示，miRNA 在腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用，已有很多研究顯示，多種miRNA 具有促纖維化作用［13］，失調(diào)的miRNA 通過調(diào)控足細(xì)胞相關(guān)分子的表達(dá)損傷足細(xì)胞、減少足細(xì)胞的數(shù)量［14］。文獻(xiàn)表明腎小球成體足細(xì)胞也表達(dá)具有抗纖維化和促凋亡活性的miR-29 家族成員（miR-29a，miR-29b 和miR-29c），且已有證據(jù)表明這種表達(dá)在幾種影響腎臟的疾病中失調(diào)［15］。與糖尿病野生型小鼠相比，糖尿病miR-29a轉(zhuǎn)基因小鼠具有更高的足細(xì)胞存活率以及較輕的腎小球纖維化，miR-29a的過表達(dá)減弱了與糖尿病有關(guān)的組蛋白去乙?；福╤istone deacetylase，HDAC）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，腎素泛素化和尿中腎素排泄的促進(jìn)，并恢復(fù)了腎素乙酰化。抑制miR-29a促進(jìn)HDAC4 活性，導(dǎo)致足細(xì)胞凋亡，蛋白尿和隨后加重的腎功能障礙［9］。

Figure 2. Proteinuria and glomerular fibrosis. A：the results of urine protein by Coomassie brilliant blue staining（n=4. M：marker；M1：albumin positive control）；B：miR-29a KO mice display significant increase in albuminuria at 12 and 24 weeks of age（n=5）；C：PAS-stained images of kidney cortex from WT and miR-29a KO mice at the 3rd，12 th and 24 th weeks（n=3. left scale bar=100 μm；right scale bar=50 μm）. WT：wild-type；KO：miR-29a knockout. Mean±SEM.**P＜0.01 vs WT group.圖2 蛋白尿以及腎小球纖維化結(jié)果

已有研究證明，在1 型和2 型糖尿病小鼠腎臟中miR-29a的表達(dá)是下降的，這表明miR-29a與腎臟疾病有關(guān)［9］。但miR-29a的下降與腎小球功能和結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系并不明確，目前沒有證據(jù)表明敲除miR-29a基因可以直接導(dǎo)致腎臟功能或結(jié)構(gòu)的變化。在此研究中，我們構(gòu)建了miR-29aKO 小鼠，觀察與WT組小鼠相比，miR-29aKO 組小鼠是否會導(dǎo)致腎小球功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生變化?？捡R斯亮藍(lán)染色以及UACR的結(jié)果顯示，與WT 組小鼠相比，miR-29aKO 組小鼠出現(xiàn)蛋白尿，隨著周齡的增加，蛋白尿更加明顯。蛋白尿產(chǎn)生的主要原因是腎小球濾過膜通透性增加。腎小球濾過的機(jī)械和電荷屏障主要組成部分由足細(xì)胞、基底膜和內(nèi)皮細(xì)胞，這三層結(jié)構(gòu)的損傷都可能會導(dǎo)致蛋白尿的形成［16］。為了進(jìn)一步了解腎小球組織結(jié)構(gòu)的變化，進(jìn)行了PAS 染色，結(jié)果顯示，在3 周時miR-29aKO 組小鼠未見腎小球明顯損傷，12 周和24周可見明顯變化，miR-29aKO 組小鼠出現(xiàn)了腎小球纖維性膠原沉積增多，系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)增多等腎小球病理變化，并且腎小球結(jié)構(gòu)的變化隨著周齡的增加而加重，這與出現(xiàn)蛋白尿的時間和程度基本相一致。腎纖維化代表大多數(shù)腎臟疾病的病理變化，并伴隨細(xì)胞外基質(zhì)成分的積累，導(dǎo)致腎功能的進(jìn)行性和不可逆轉(zhuǎn)的下降［17］。為了進(jìn)一步觀察小球超微結(jié)構(gòu)的病理變化，我們進(jìn)行了冷凍蝕刻電鏡和標(biāo)準(zhǔn)透射電鏡實驗，結(jié)果顯示，miR-29aKO組小鼠腎小球超微結(jié)構(gòu)明顯發(fā)生的變化，3周出現(xiàn)足細(xì)胞足突輕微融合，24 周出現(xiàn)足細(xì)胞突起排列較為紊亂，足突融合，足細(xì)胞數(shù)量減少以及GBM 呈局灶性或彌漫性不規(guī)則增厚。上述實驗結(jié)果表明，敲除miR-29a導(dǎo)致小鼠腎小球發(fā)生結(jié)構(gòu)損傷，尤其是纖維化，同時導(dǎo)致功能障礙，主要表現(xiàn)為蛋白尿。

Figure 3. Changes of glomerular ultrastructure in mice. A：observation results of cryo-etching electron microscopy of mouse glomeruli at 24 weeks（scale bar=50 nm）；B：the changes of the glomerular ultrastructure observed by transmission electron microscopy（FP：podocyte foot process；POD：podocyte；GBM：basement membrane；EC：endothelial cell；FEN：endothelial cell window；scale bar=2 μm）. WT：wild-type；KO：miR-29a knockout.圖3 小鼠腎小球超微結(jié)構(gòu)的變化

大量研究證實足細(xì)胞的損傷在腎小球疾病如糖尿病腎病等都發(fā)揮著重要的作用，足細(xì)胞的凋亡是蛋白尿的重要標(biāo)志［18-19］。本研究通過RT-qPCR 結(jié)果顯示，與WT 對照組小鼠相比，miR-29aKO 組小鼠足細(xì)胞的標(biāo)志性分子nephrin 在miR-29aKO 組小鼠中轉(zhuǎn)錄水平下降，免疫熒光以及Western blot 結(jié)果表明nnephrin 和podocin 在miR-29aKO 組小鼠蛋白表達(dá)下調(diào)，這與上述足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化相吻合，進(jìn)一步證實小鼠體內(nèi)缺失miR-29a會造成足細(xì)胞的損傷，進(jìn)而損害小鼠腎小球功能。

研究顯示，miR-29a可以直接引起多種膠原蛋白改變［20］，高糖誘導(dǎo)miR-29a的下調(diào)可以增加人腎小管上皮細(xì)胞HK-2 中Ⅳ型膠原的表達(dá)［11］。也有研究顯示，二肽基肽-4（dipeptidyl peptidase 4，DPP-4）抑制劑利格列?。?inagliptin）目前被用作抗糖尿病藥物，在糖尿病小鼠模型中通過誘導(dǎo)miR-29上調(diào)、改善纖維化而發(fā)揮保護(hù)腎臟的作用［21］。

基底膜增厚是慢性腎臟疾病的主要病理變化，基底膜由層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白及硫酸肝素蛋白多糖等物質(zhì)組成［22］。在本實驗中，與WT 組相比，miR-29aKO組小鼠腎小球基底膜增厚，我們推測基底膜增厚是由于基底膜中主要蛋白成分的增加。為了進(jìn)一步驗證我們的推測，進(jìn)行了RT-qPCR檢測，結(jié)果顯示，miR-29aKO 組小鼠腎小球IV 型膠原的主要成分Col4α3、Col4α4、Col4α5 和LAMB2 在mRNA水 平 上 調(diào)，Western blot 結(jié)果 顯 示COL4α3/4/5 和LAMB2 蛋白的表達(dá)在miR-29aKO 組小鼠腎小球中表達(dá)增加。由于COL4α3/4/5 為成熟基底膜致密層特有的成分，COL4α3/4/5在腎臟僅由足細(xì)胞合成；層粘連蛋白與細(xì)胞表面受體（整合蛋白）結(jié)合，可以介導(dǎo)上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞黏附于基底膜，因而本研究將COL4α3/COL4α4 與nephrin 免 疫 熒 光 共 染，LAMB2 與nephrin 共染。結(jié)果顯示，足細(xì)胞產(chǎn)生的表達(dá)明顯上調(diào)，熒光與nephrin 基本重合；LAMB2 的表達(dá)顯著增加，熒光與nephrin 部分重合，說明在miR-29aKO 組小鼠，足細(xì)胞合成和分泌COL4α3/4/5 增多。通過本研究結(jié)果，可以推測，miR-29aKO首先導(dǎo)致腎小球足細(xì)胞受損，同時足細(xì)胞合成和分泌IV 型膠原蛋白增多，進(jìn)而導(dǎo)致腎小球基底膜增厚甚至纖維化。但是由于miR-29a作用機(jī)制比較復(fù)雜，腎小球基底膜增厚究竟是由miR-29a直接靶向Ⅳ型膠原蛋白，還是由miR-29a缺失通過足細(xì)胞分泌間接作用的結(jié)果，這需要進(jìn)一步深入研究。

Figure 4. Changes in relative levels of signature proteins in glomerular podocytes. A：relative mRNA expression of podocin and nephrin in glomeruli；B：the protein levels of nephrin and podocin were determined by Western blot；C：immunofluorescence staining dernonstrating the abundance of nephrin and podocin（scale bar=50 μm）. WT：wild-type；KO：miR-29a knockout. Mean±SEM. n=3.*P＜0.05 vs WT group.圖4 腎小球足細(xì)胞標(biāo)志性蛋白相對水平的變化

Figure 5. Changes of COL4α3，COL4α4，COL4α5 and LAMB2. A：relative mRNA expression of COL4α3，COL4α4，COL4α5 and LAMB2；B：Western blot analysis for COL4α3/4/5 and LAMB2 of isolated glomerulus from WT and KO mice；C：representative confocal microscopic images showing the expression of COL4α3，LAMB2 and nephrin in kidney sections from WT and KO mice（scale bar=50 μm）. WT：wild-type；KO：miR-29a knockout. Mean±SEM. n=3.*P＜0.05，**P＜0.01 vs WT group.圖5 COL4α3、COL4α4、COL4α5及LAMB2的變化

綜上所述，本研究檢測敲除miR-29a后，會造成小鼠的腎小球功能改變，主要表現(xiàn)為蛋白尿；同時引起腎小球結(jié)構(gòu)改變尤其是纖維化；而且隨著小鼠老齡化，上述損傷加重。本研究同時觀察到足細(xì)胞的標(biāo)志性分子nephrin 和podocin 表達(dá)下調(diào)，而COL4α3/4/5 以及LAMB2 表達(dá)上調(diào)。究竟是由miR-29a缺失通過改變上述分子進(jìn)而引起腎小球結(jié)構(gòu)改變，還是腎小球結(jié)構(gòu)改變的結(jié)果，尚需進(jìn)一步研究。本研究對于體內(nèi)miR-29a基因缺失直接導(dǎo)致腎小球功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷提供了直接證據(jù)，這有助于我們進(jìn)一步認(rèn)識腎臟病變尤其纖維化的機(jī)制，也使miR-29a有望成為治療腎臟疾病潛在的靶點。但是，miR-29a在腎臟疾病的發(fā)病機(jī)制中的信號通路變化是復(fù)雜的，在腎小球中確切的作用機(jī)制尚不清楚，需要更系統(tǒng)研究了解miR-29a下游調(diào)控基因以及信號通路。