1株珊瑚共附生真菌GXIMD 02504的次級代謝產(chǎn)物及抑菌活性研究

張艷婷?彭帥?黃炳耀?巫明媚?陳錦營?盧護木?高程海?劉永宏?羅小衛(wèi)

摘要：目的 開展1株北部灣來源珊瑚共附生真菌Talaromyces verruculosus GXIMD 02504的次級代謝產(chǎn)物及其抗菌活性研究。方法 采用多種現(xiàn)代色譜分離技術(shù)對菌株發(fā)酵產(chǎn)物進行分離純化，利用核磁共振技術(shù)和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比解析化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并采用濾紙片瓊脂擴散法和改良肉湯稀釋法測定其抑菌活性。結(jié)果 從其液體發(fā)酵產(chǎn)物中共分離鑒定了9個化合物，分別為chrodrimanins A-B， E-F， H（1～5）、芝麻素（6）、櫻黃素（7）、5，7，4-三羥基異黃酮（8）、N-acetyl-tryptamine（9）?；衔?顯示出對表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）的弱抑制活性，最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration， MIC）為78 μg/mL。結(jié)論 從菌株T. verruculosus GXIMD 02504中分離得到以chrodrimanin類混源萜為主的化合物9個，其中化合物6～8為首次從該屬中分離得到，且化合物8具有一定的抗表皮葡萄球菌活性。本研究豐富了該菌次級代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)多樣性。

關(guān)鍵詞：珊瑚共附生真菌；疣孢籃狀菌；次級代謝產(chǎn)物；抑菌活性

中圖分類號：R9文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Antibacterial secondary metabolites from a coral-derived fungus Talaromyces verruculosus GXIMD 02504

Zhang Yan-ting， Peng Shuai， Huang Bing-yao， Wu Ming-mei， Chen Jin-ying， Lu Hu-mu， Gao Cheng-hai，

Liu Yong-hong， and Luo Xiao-wei

（Institute of Marine Drugs/Affiliated International Zhuang Medicine Hospital， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530200）

Abstract Objective To investigate the secondary metabolites from the Beibu Gulf coral-derived fungus Talaromyces verruculosus GXIMD 02504 and their antibacterial activity. Methods The fermentation products of the strain were isolated and purified by various modern chromatographic separation techniques. Structures of the obtained compounds were identified by nuclear magnetic resonance data analysis as well as comparison of literature data. Their antibacterial activity was further evaluated by methods of the Kirby-Bauer test and the modified broth dilution. Results Nine compounds （1～9） were obtained from the liquid fermentation products， which were determined as chrodrimanins A～B， E～F， H （1～5）， sesamin （6）， prunetin （7）， 5，7， 4-trihydroxyisoflavone （8）， and N-acetyl-tryptamine （9）， respectively. Compound 8 showed weak antibacterial activity against Staphylococcus epidermidis， with minimal inhibitory concentration （MIC） of 78 μg/mL. Conclusion Nine compounds exemplified by chrodrimanin-type meroterpenoids were isolated from Talaromyces verruculosus GXIMD 02504， and meanwhile compounds 6～8 were obtained from the Talaromyces genus for the first time. In addition， compound 8 was found with antibacterial activity against S. epidermidis. This study would enrich the structural diversity of the strain.

Key words Coral-derived fungus; Talaromyces verruculosus; Secondary metabolites; Antibacterial activity

廣西北部灣地處熱帶和亞熱帶，擁有紅樹林、珊瑚礁、濱海濕地、海草床等典型海洋生態(tài)系統(tǒng)，是我國生物多樣性最為豐富的區(qū)域之一，近年來已成為海洋微生物資源與化學(xué)研究的熱點區(qū)域之一[1]。珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)具有很高的生物多樣性和生產(chǎn)力水平，珊瑚表面和內(nèi)部共附生有大量的微生物，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，這些微生物與宿主在長期的共同進化進程中形成了互惠共生的關(guān)系。宿主珊瑚為共生微生物提供居所，共生微生物通過產(chǎn)生化學(xué)防御物質(zhì)以護衛(wèi)宿主[2-4]。目前報道的珊瑚共附生微生物活性天然產(chǎn)物大多由真菌產(chǎn)生（85%以上），包括聚酮、萜類、生物堿、肽類、脂質(zhì)等結(jié)構(gòu)類型，具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒、抗炎及抗污損等生物活性[4-5]。

疣孢籃狀菌（Talaromyces verruculosus）主要來源于土壤[6]，少數(shù)自海洋環(huán)境中分離到[7-8]。該菌屬菌株被報道能夠產(chǎn)生多種農(nóng)業(yè)或工業(yè)用途降解酶，如纖維素酶、PHB解聚酶、可可堿降解酶等[7， 9-10]。疣孢籃狀菌能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)多樣且活性顯著的次生代謝產(chǎn)物，如萜類、聚酮類、香豆素類等，具有抗結(jié)核、抗腫瘤、抗菌等生物活性[8， 11-12]。本研究團隊一直致力于典型海洋生態(tài)系統(tǒng)來源微生物活性次級代謝產(chǎn)物的發(fā)掘研究[13-14]，從潿洲島鹿角杯形珊瑚（Pocillopora damicornis）中分離得到一株代謝產(chǎn)物豐富的真菌T. verruculosus GXIMD 02504。利用色譜分離技術(shù)從其發(fā)酵產(chǎn)物中獲得以chrodrimanin類混源萜為主的9個化合物（圖1），分別鑒定為：chrodrimanins A-B， E-F， H（1～5）、芝麻素（6）、櫻黃素（7）、5，7，4-三羥基異黃酮（8）、N-acetyl-tryptamine（9）。對所有化合物進行抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）等致病菌抑制活性研究，結(jié)果顯示化合物8對表皮葡萄球菌具有一定的抑制作用。

1 材料和方法

1.1 儀器試劑及測試病原菌

ZYJ-S型超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備公司）；中壓制備色譜儀（瑞士布奇公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Eyelan-1100V-W型，日本東京理化株式會社）；高效液相色譜儀（日本日立公司）；AVANCE-700超導(dǎo)核磁共振儀（TMS為內(nèi)標(biāo)，德國布魯克公司）；葡聚糖凝膠 Sephadex LH-20（法瑪西亞公司）；薄層色譜及柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；YMC-Pack ODS-A色譜柱（10 mm×250 mm， 5 μm，日本YMC公司）；分析純化學(xué)試劑（廣州化學(xué)試劑廠和天津富宇精細(xì)化工有限公司）；色譜純試劑（美國默克公司）。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus），銅綠假單胞菌（P. aeruginosa ATCC9027）和表皮葡萄球菌（S. epidermidis ATCC 12228）等3株測試病原菌購自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，菌株保藏于廣西中醫(yī)藥大學(xué)海洋藥物研究院菌種庫。

1.2 菌株來源及鑒定

菌株GXMID 02504分離自廣西北海潿洲島采集的鹿角杯形珊瑚（Pocillopora damicornis），菌種保存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)海洋藥物研究院北部灣海洋微生物資源庫中。利用PCR技術(shù)對菌株的18S rDNA進行擴增測序（上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司），通過Blast分析發(fā)現(xiàn)其ITS序列與菌株Talaromyces verruculosus AG67（accession No. KJ482652.1）的相似度高達(dá)100%，故初步將其鑒定為T. verruculosus GXMID 02504（疣孢籃狀菌）。

1.3 菌株的培養(yǎng)

將菌株接種在MB液體培養(yǎng)基中，28℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，然后將種子液接種至經(jīng)高壓蒸汽滅菌（116℃，20 min）的改良真菌2號液體培養(yǎng)基中（黃豆粉20 g，麥芽糖20 g，甘露醇20 g，葡萄糖10 g，味精5 g，細(xì)菌學(xué)蛋白胨5 g，酵母膏3 g，海鹽20 g，自來水1 L，pH 7.4）中。采用100個1 L錐形瓶（300 mL/瓶）對該菌株進行室溫靜置培養(yǎng)35 d，共發(fā)酵30 L。

1.4 發(fā)酵產(chǎn)物的提取分離

發(fā)酵結(jié)束后，收獲發(fā)酵液及菌體，加入等體積的乙酸乙酯，用紗布過濾，濾液利用乙酸乙酯反復(fù)萃取提取多次至溶液顏色變淺。菌體利用丙酮超聲提取3遍經(jīng)減壓蒸餾后得到相應(yīng)浸膏，將得到的粗浸膏與前者合并得到總浸膏共12 g。將總浸膏用100～200目的硅膠拌樣，經(jīng)中壓正相硅膠柱色譜（200～300目正相硅膠）分離，采用梯度洗脫（石油醚/二氯甲烷，100：0～0：100和二氯甲烷/甲醇，100：0～1：1，V/V），對所有收集的流分經(jīng)TLC色譜分析后合并得到9個流分。根據(jù)HPLC-DAD指紋圖譜，選取代謝產(chǎn)物較為豐富的流分Fr.6和Fr.8進行分離純化。Fr.6經(jīng)半制備高效液相色譜（CH3CN/H2O， 46： 54， 2 mL/min）分離得到化合物8（Rt=13 min， 27 mg）、化合物1（Rt=19 min， 16 mg）和流分Fr.6-1（Rt=9 min， 10 mg）。流分Fr.6-1繼續(xù)采用半制備高效液相色譜（CH3OH/H2O， 56： 44， 1.5 mL/min）純化得到化合物9（Rt=12 min， 3mg）和化合物7（Rt=16 min， 1 mg）。流分Fr.8經(jīng)半制備高效液相色譜（CH3CN/H2O， 45： 55， 2 mL/min） 得到化合物4（Rt=19 min， 26 mg）、化合物5（Rt=24 min， 9 mg）、化合物6（Rt=37 min， 11 mg）及流分Fr.8-4 （Rt=29 min， 25 mg）。流分Fr.8-4繼續(xù)采用半制備高效液相色譜（CH3OH/H2O， 75： 25， 2 mL/min）純化得到化合物2 （Rt=22 min， 14 mg）和化合物3（Rt=27 min， 3 mg）。

1.5 抑菌活性實驗

1.5.1 濾紙片法篩選抑菌活性化合物

參考文獻(xiàn)報道的實驗方法[15]。將耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）3株病原菌分別接種于LB液體培養(yǎng)基（胰蛋白胨0.3 g、酵母膏0.15 g、NaCl 0.15 g、蒸餾水30 mL、pH7.4）中，37 ℃、180 r/min培養(yǎng)4h，取360 μL新鮮菌液加入360 mL LB固體培養(yǎng)基（45℃～55℃，胰蛋白胨3.6 g、酵母膏1.8 g、NaCl 1.8 g、瓊脂6.5 g、蒸餾水360 mL、pH7.4）混勻后迅速倒平板。將待測化合物配制成濃度為20 mg/mL的甲醇溶液，氨芐西林（1 mg/mL甲醇溶液）作為陽性對照。分別用移液槍吸取5 μL待測化合物溶液置于直徑為6 mm的無菌濾紙片上，待甲醇揮干后，用無菌鑷子將濾紙片貼于含有菌液的LB固體培養(yǎng)基上。于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)24 h，每12 h觀察一次，根據(jù)抑菌圈的大小初步判斷化合物的抑菌活性。

1.5.2 改良肉湯稀釋法測定活性化合物的MIC值

對具抑菌活性的化合物進一步采用改良肉湯稀釋法測定MIC值[15]。簡言之，采用2倍稀釋法將陽性對照（氨芐西林）和待測化合物用DMSO溶解并稀釋，其中氨芐西林（1.250～0.0013 mg/mL）和待測化合物（10.00～0.010 mg/mL）均設(shè)置11個濃度梯度。向96孔板中加入190 μL含菌的LB液體培養(yǎng)基和10 μL的待測化合物溶液，設(shè)置3個平行。于37℃培養(yǎng)12～24 h，使用酶標(biāo)儀在600 nm處測量各孔的吸光度，每12 h觀察一次，對比陽性和陰性對照，培養(yǎng)孔中無細(xì)菌生長最小化合物濃度是該化合物的MIC值。

2 結(jié)果

2.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：分子式為C25H30O7（442.2）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 11.09 （1H， br s， 4'-OH）， 7.39 （1H， d， J=10.3 Hz， H-1）， 6.29 （1H， s， H-5'）， 5.89 （1H， d， J=10.3 Hz， H-2）， 5.07 （1H， d， J=1.6 Hz， H-7'）， 4.63 （1H， td， J=6.5， 1.7 Hz， H-8'）， 4.03 （1H， dd， J=8.6， 3.6 Hz， H-7）， 3.16 （1H， dd， J=16.0， 4.9 Hz， H-11a）， 2.58 （1H， t， J=16.0 Hz， H-11b）， 2.20 （1H， m， H-6a）， 2.17 （1H， m， H-5）， 2.12 （1H， dd， J=14.4， 5.2 Hz， H-9）， 1.69 （1H， td， J=14.0， 2.5? Hz， H-6b）， 1.44 （3H， d， J=6.5 Hz， H-9'）， 1.35 （3H， s， H-12）， 1.18 （3H， s， H-15）， 1.05 （6H， s， H-13， 14）; 13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 203.1（C， C-3）， 169.5（C， C-10'）， 160.7 （C， C-4'）， 159.9 （C， C-6'）， 158.1 （CH， C-1）， 141.8 （C， C-2'）， 126.0 （CH， C-2）， 112.2 （C， C-1'）， 103.5 （CH， C-5'）， 100.6 （C， C-3'）， 79.5 （C， C-8）， 77.7 （CH， C-8'）， 70.2 （CH， C-7）， 61.8 （CH， C-7'）， 44.1 （C， C-4）， 42.0 （CH， C-5）， 38.2 （C， C-10）， 29.0 （CH2， C-6）， 27.6 （CH3， C-15）， 27.0 （CH3， C-14）， 21.2 （CH3， C-13）， 21.1 （CH3， C-12）， 20.6 （CH2， C-11）， 16.1 （CH3， C-9'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道的基本一致， 鑒定為chrodrimanin A。

化合物2：分子式為C27H32O8（484.2）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 10.97 （1H， s， 4'-OH）， 7.16 （1H， d， J=10.3 Hz， H-1）， 6.40 （1H， s， H-5'）， 6.24 （1H， d， J=1.7 Hz， H-7'）， 5.90 （1H， d， J=10.3 Hz， H-2）， 5.08 （1H， s， 7-OH）， 4.89 （1H， qd， J=6.5， 1.7 Hz， H-8'）， 4.01 （1H， J=8.6， 3.6 Hz， H-7）， 2.82 （1H， dd， J=15.6， 5.1 Hz， H-11a）， 2.66 （1H， t， J=14.3 Hz， H-11b）， 2.16 （2H， m， H-6a， H-5）， 2.15 （3H， s， H-12'）， 2.12 （1H， dd， J=13.7， 5.1 Hz， H-9）， 1.67 （1H， td， J=14.1， 2.6 Hz， H-6b）， 1.34 （3H， d， J=6.6 Hz， H-9'）， 1.31 （3H， s， H-12）， 1.19 （3H， s， H-15）， 1.06 （3H， s， H-14）， 1.04 （3H， s， H-13）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 203.0（C， C-3）， 170.4（C， 7'-OCCH3）， 168.5（C， C -10'）， 161.0（C， C-4'）， 160.1（C， C-6'）， 157.3（CH， C-1）， 136.5（C， C-2'）， 126.2（CH， C-2）， 113.2（C， C-1'）， 104.9（CH， C-5'）， 101.5（C， C-3'）， 79.7 （C， C-8）， 75.9（CH， C-8'）， 70.1（CH， C-7）， 63.8 （CH， C-7'）， 44.1（C， C-4）， 41.8（CH， C-5）， 41.6（CH， C-9）， 38.2（C， C-10）， 27.6（CH2， C-6）， 27.0（CH3， C-14）， 26.8（CH3， C-15）， 21.2（CH3， C-12）， 21.1（CH2， C-11）， 21.0（CH3， C-13）， 20.5（CH3， 7'-OCCH3）， 15.9（C-9'）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]中的基本一致， 鑒定為chrodrimanin B。

化合物3：分子式為C25H30O6（426.2）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 11.07 （1H， s， 4'-OH）， 7.43 （1H， d， J=10.3 Hz， H-1）， 6.20 （1H， s， H-5'）， 5.87 （1H， d， J=10.2 Hz， H-2）， 5.06 （1H， s， 7-OH）， 4.73 （1H， m， H-8'）， 4.03 （1H， dd， J =8.4， 2.4 Hz， H-7）， 3.09 （1H， dd， J=16.8， 3.3 Hz， H-7'）， 2.90 （1H， dd， J =15.4， 5.1 Hz， H-11a）， 2.78 （1H， dd， J =16.8， 12.0 Hz， H-7'）， 2.46 （1H， t， J=15.4 Hz， H-11b）， 2.19 （1H， dd， J=5.2， 2.1 Hz， H-5）， 2.18 （1H， m， H-6a）， 2.13 （1H， dd， J=13.5， 5.2 Hz， H-9）， 1.69 （1H， td， J=14.0， 2.3 Hz， H-6b）， 1.46 （3H， d， J=6.3 Hz， H-9'）， 1.35 （3H， s， H-12）， 1.17 （3H， s， H-15）， 1.06 （3H， s， H-14）， 1.04 （3H， s， H-13）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 203.0（C， C-3）， 169.7（C， C-10'） 161.2（C， C-4'）， 159.8（C， C-6'）， 158.3（CH， C-1）， 140.6（C， C-2'）， 125.8（CH， C-2）， 111.9（C， C-1'）， 102.3（CH， C-5'）， 101.3（C， C-3'）， 79.3（C， C-8）， 74.8（CH， C-8'）， 70.0（CH， C-7）， 44.0（C， C-4）， 42.2（CH， C-5）， 41.6（CH， C-9）， 38.2（C， C-10）， 31.0（CH2， C-7'）， 27.6（CH3， C-14）， 26.8（CH3， C-15）， 26.8（CH2， C-6）， 21.8（CH2， C-11）， 21.2（CH3， C-13）， 20.9（CH3， C-12）， 20.6（C-9'）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]中的基本一致， 鑒定為chrodrimanin E。

化合物4：分子式為C25H34O6（430.2）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 11.04 （1H， s， 4'-OH）， 6.17 （1H， s， H-5'）， 4.72 （1H， s， 7-OH）， 4.67 （1H， m， H-8'）， 3.90 （1H， dd， H-7）， 2.99 （1H， dd， J=16.8， 3.3 Hz， H-7'）， 2.74 （1H， dd， J=16.8， 12.1 Hz， H-7'）， 2.47 （2H， m， H-11），? 2.09 （2H， m， H-6）， 1.95 （1H， dd， J=13.6， 5.6 Hz， H-9）， 1.58 （2H， m， H-2）， 1.54 （2H， m， H-1）， 1.44 （3H， d， J=6.3 Hz， H-9'）， 1.30 （1H， dd， J=13.5， 4.9 Hz， H-5）， 1.18 （3H， s， H-12）， 1.11 （3H， s， H-15）， 0.88 （3H， s， H-14）， 0.74 （3H， s， H-13）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 169.8（C， C-10'）， 161.0（C， C-4'）， 159.9（C， C-6'）， 140.2（C， C-2'）， 112.2（C， C-1'）， 102.1（CH， C-5'）， 100.9（C， C-3'）， 79.7（C， C-8）， 76.9（CH， C-3）， 74.8（CH， C-8'）， 71.1（CH， C-7）， 43.5（CH， C-5）， 42.8（CH， C-9）， 38.9（C， C-4）， 35.4（C， C-10）， 33.7（CH2， C-1）， 30.9（CH2， C-7'）， 28.7（CH3， C-14）， 28.0（CH2， C-2）， 27.6（CH2， C-6）， 24.1（CH3， C-15）， 21.4（CH3， C-12）， 20.5（CH3， C-9'）， 19.9（CH2， C-11）， 16.1（CH3， C-13）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]中的基本一致， 鑒定為chrodrimanin F。

化合物5：分子式為C25H32O6（428.2）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 11.05 （1H， s， 4'-OH）， 6.23 （1H， s， H-5'）， 4.67 （1H， ddd， J=12.1， 6.2， 3.3 Hz， H-8'）， 3.85 （1H， t， J=7.6 Hz， H-7）， 3.00 （1H， dd， J=16.8， 3.3 Hz， H-7'a）， 2.80 （2H， m， H-7'b， H-2）， 2.28 （1H， ddd， J=12.3， 9.4， 4.9 Hz， H-6a）， 2.05 （1H， m， H-1a）， 1.96 （1H ， dd， J=12.3， 2.9 Hz， H-5）， 1.60 （1H， ddd， J=12.8， 9.4， 4.7 Hz， H-6b）， 1.44 （3H， d， J=6.3 Hz， H-9'）， 1.38 （1H， td， J=13.8， 7.1 Hz， H-1b）， 1.29 （3H， s， H-12）， 1.03 （3H， s， H-14）， 0.96 （3H， s， H-13）， 0.92 （3H， s， H-15）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 217.3（C， C-3）， 169.8（C， C-10'）， 161.0（C， C-4'）， 159.5（C， C-6'）， 140.1（C， C-2'）， 111.0（C， C-1'）， 101.9（CH， C-5'）， 101.0（C， C-3'）， 78.5（C， C-8）， 74.8（CH， C-8'）， 72.3（CH， C-7）， 46.2（C， C-4）， 42.5（CH， C-5）， 40.7（CH， C-9）， 35.3（C， C-10）， 33.4（CH2， C-2）， 31.3（CH2， C-1）， 30.8（CH2， C-7'）， 28.6（CH3， C-14）， 27.9（CH2， C-6）， 22.9（CH3， C-12）， 22.4（CH3， C-15）， 20.5（CH3， C-9'）， 19.8（CH3， C-13）， 18.8（CH2， C-11）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]中的基本一致， 鑒定為chrodrimanin H。

化合物6：分子式為C20H18O6（354.1）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH：6.92（2H， s， H-2， 2'）， 6.86（2H， d， J=7.9 Hz， H-5， 5'）， 6.83 （2H， d， J=8.0， H-6， 6'）， 5.99 （4H， s， H-10， 10'）， 4.64 （2H， d， J=4.1 Hz， H-7， 7'）， 4.11 （2H， m， H-9e， 9e'）， 3.75 （2H， dd， J=9.1， 3.6 Hz， H-9a， 9a'）， 2.99 （2H， m， H-8， 8'）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 147.4（C， C-4， 4'）， 146.5（C， C-3， 3'）， 135.5（C， C-1， 1'）， 119.4（CH， C-6， 6'）， 108.0（CH， C-5， 5'）， 106.6（CH， C-2， 2'）， 100.9（CH2， C-10， 10'）， 84.8（CH2， C-7， 7'）， 71.0（CH， C-9， 9'）， 53.8（CH， C-8， 8'）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]中的基本一致， 鑒定為芝麻素。

化合物7：分子式為C16H12O5（284.1）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 8.02 （1H， s， H-2）， 7.3 （2H， d， J=8.6 Hz， H-2'， 6'）， 7.18 （1H， s， H-8）， 6.77 （2H， d， J=8.5 Hz， H-3'， 5'）， 6.37 （1H， s， H-6）， 3.78 （3H， s， O-CH3）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC：173.6（C， C-4）， 156.9（C， C-7）， 154.2（C， C-5）， 154.3（C， C-4'）， 150.7（C， C-9）， 150.0（CH， C-2）， 130.0（CH， C-2'， 6'）， 123.7（C， C-1'）， 122.4（C， C-3）， 114.8（CH， C-3'， 5'）， 102.7（C， C-10）， 101.4（CH， C-8， C-6）， 55.3（CH3， 7-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[20]基本一致， 鑒定為櫻黃素。

化合物8：分子式為C15H10O5（270.1）；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 12.96 （1H， s， 5-OH）， 8.29 （1H， s， H-2）， 7.38 （2H， d， J=8.6 Hz， H-2'， 6'）， 6.83 （2H， d， J=8.6 Hz， H-3'， 5'）， 6.37 （1H， d， J=2.1 Hz， H-8）， 6.22 （1H， d， J=2.1 Hz， H-6）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC：180.1（C， C-4）， 165.0（C， C-7）， 162.0（C， C-4'）， 157.7（C， C-9）， 157.4（C， C-5）， 153.8（CH， C-2）， 130.2（CH， C-2'， 6'）， 122.3（C， C-1'）， 121.3（C， C-3）， 115.1（CH， C-3'， 5'）， 104.3（C， C-10）， 99.2（CH， C-6）， 93.8（CH， C-8）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]中基本一致， 鑒定為5， 7， 4'-三羥基異黃酮。

化合物9：分子式為C12H14N2O， 分子量202.1；1H NMR（700 MHz， DMSO-d6）， δH： 10.80 （1H， s， 12-NH）， 7.93 （1H， s， 1-H）， 7.51 （1H， d， J=7.8 Hz， H-4）， 7.33 （1H， d， J=8.1 Hz， H-7）， 7.14 （1H， d， J=2.2 Hz， H-2）， 7.06 （1H， ddd， J=8.1， 6.9， 1.2 Hz， H-6）， 6.97 （1H， ddd， J=7.9， 6.9， 1.0 Hz， H-5）， 3.31 （2H， m， H-11）， 2.81 （2H， m， H-10）， 1.80 （3H， s， CH3-14）；13C NMR （175 MHz， DMSO-d6）， δC： 169.0（C， C-13）， 136.2（C， C-8）， 127.2（C， C-9）， 122.6（CH， C-6）， 120.9（CH， C-5）， 118.2（CH， C-4）， 111.9（C， C-3）， 111.3（CH， C-7）， 40.0（CH2， C-11）， 25.2（CH2， C-10）， 22.7（CH3， C-14）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報道基本一致， 鑒定為N-acetyl-tryptamine。

2.2 化合物抑菌活性結(jié)果分析

濾紙片瓊脂擴散法篩選抑菌活性化合物的結(jié)果如圖2所示，化合物8對表皮葡萄球菌具有弱抑制作用。用改良肉湯稀釋法測定其MIC值，結(jié)果顯示，化合物8的最小抑菌濃度值為78 μg/mL，陽性對照氨芐西林的MIC值為2.5 μg/mL。與化合物8相比，化合物7沒有顯示出抗菌活性，說明化合物8中的7位羥基有利于提高其抗菌活性。

3 討論

本文從廣西北海潿洲島珊瑚來源的真菌Talaromyces verruculosus GXMID 02504中分離到5個混源萜類化合物（1～5）、1個苯丙素類化合物（6）、2個黃酮類化合物（7～8）和1個吲哚生物堿（9），化合物6～8為首次從該屬中分離得到，并測試了抗病原菌活性，其中化合物8對表皮葡萄球菌具有弱抑制作用，7位羥基有利于提高其抗菌活性，黃酮類化合物7和8可能來自添加黃豆粉的改良真菌2號液體培養(yǎng)基。Chrodrimanins類化合物屬于由C10聚酮單元和倍半萜部分組成的混源萜類結(jié)構(gòu)，文獻(xiàn)報道化合物2～4對甲型流感病毒（H1N1）具有抑制活性，其IC50值分別為21， 55和57 μmol/L[23]。另外，化合物2對家蠶幼蟲（Bombyx mori）具有毒殺活性，LD50值（半數(shù)致死量）為10 mg/g[24]。本研究豐富了該菌次級代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)多樣性，也為進一步發(fā)現(xiàn)抗菌化學(xué)成分提供了參考。

參 考 文 獻(xiàn)

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收稿日期：2021-08-12

基金項目：廣西自然科學(xué)基金-創(chuàng)新研究團隊項目（No. 2020GXNSFGA297002）；廣西科技基地和人才專項（No. 桂科AD19110013）；廣西

高校中青年教師科研基礎(chǔ)能力提升項目（No. 2021KY0315）；廣西中醫(yī)藥大學(xué)校級科研項目（No. 2020QN025）

作者簡介：張艷婷，女，生于1997年，在讀碩士研究生，研究方向為海洋微生物活性次級代謝產(chǎn)物，E-mail： ting9097@163.com

*通訊作者，E-mail： luoxiaowei1991@126.com