金合歡素對大腸桿菌感染小鼠腸道的保護作用

李朝一 張慧敏 李振坤 牧書豪 李麗娟

摘要：探索金合歡素對感染大腸桿菌腸道小鼠腸道的保護作用，觀察小鼠腸道HE染色情況，用藥前后的體重對比、白細胞的變化，對比單一腸道感染大腸桿菌的小鼠，實驗表明金合歡素對小鼠腸道黏膜有保護作用。

關鍵詞：腸道;大腸桿菌;金合歡素

中圖分類號：S816文獻標識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.02.003

Protective Effect of Acacia on Intestinal Tract of mice Infected with Eschrichia Coli

LI Zhaoyi，ZHANG Huimin，LI Zhenkun，MU Shuhao，LI Lijuan

（Jinzhong Information Institute in Taigu District，Taigu Shanxi 030801，China）

Abstract：To explore the protective effect of acacia on intestinal tract of mice infected with E. Coli，and to observe the changes of intestinal HE staining，body weight and white blood cells before and after administration of Acacia，and to compare the effect of acacia on intestinal tract of mice infected with E. coli alone，the results showed that Leucaena had protective effect on Intestinal Mucosa of mice.

Keywords：Intestinal tract，escherichia coli，acacia

0引言

采用藥敏試驗觀察金合歡素體外抑菌作用;采用單因素隨機試驗設計將實驗小鼠隨機分為3組：空白組、金合歡素組和大腸桿菌組，預飼1周，試驗期為7 d，測量試驗前后體重，肉眼觀察，采集腸道制作病理切片分析不同處理腸道黏膜形態(tài)結構。藥敏試驗表明：金合歡素有體外抑制大腸桿菌作用[1];體內試驗表明：肉眼觀察到空白組腸壁有明顯的肌理、更有彈性、更厚的組織層，是正常的白色健康組織;金合歡素組腸壁的環(huán)狀皺褶趨向光滑，呈半透明狀，可見輕度腹水;大腸桿菌組管通透，有大量積水和少量血管，無彈性，易斷裂，損傷較重。病理切片鏡下觀：空白對照組的腸絨毛排列整齊，黏膜，粘膜下層清晰可見，界面齊整[2];金合歡素組個別絨毛破碎，分離，略浮于上面，但整體可見，大部分腸絨毛還是黏著排列在一起，大腸桿菌則腸絨毛全部紊亂，分散，黏膜，粘膜下層開始漂浮，破壞嚴重⑶。

1材料與方法

1.1材料

取SPF級雌性ICR小鼠20只，體重18～22 g，購自山西醫(yī)科大學。

1.2方法

1.2.1復蘇菌

將高壓滅菌后的液體培養(yǎng)基分裝入10 mL的試管中，放入37 ℃培養(yǎng)箱中，震蕩搖晃12 h，得到原菌液。

1.2.2倍比稀釋

將原菌液倍比稀釋為2¹，2²，2³，2⁴，2⁵，2⁶，2⁷，2⁸，2⁹，2¹⁰即1024倍，從2¹⁰試管中抽取5 μL涂布于固體培養(yǎng)基中，再次放入37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1晚，之后用菌落計數(shù)器數(shù)出菌落數(shù)，取平均值，得出23試管中的最大感染菌落數(shù)。同時涂布原菌液放入藥敏片，確定金合歡素對大腸桿菌是否有抑菌作用。

1.2.3藥物制備

聚乙二醇（PEG）以0.05 g/100mL，用蒸餾水溶解;取金合歡素的最大溶解度60 mg/kg，用PEG溶劑分化;苦味酸標記液按苦味酸：甲醛：冰醋酸=15：5：1配置。

1.2.4正式試驗

小鼠按體重隨機分配，一組5只，用苦味酸標記液，按一定順序染色背毛，做好標記?？瞻讓φ战M連續(xù)灌胃PEG7 d，金合歡素組連續(xù)灌胃金合歡素6 d，造模成功，腹腔注射大腸桿菌1d。大腸桿菌組連續(xù)灌胃PEG6 d，隨后1 d腹腔注射大腸桿菌。見表1。

1.3實驗動物處置

處死前稱取體重，與分組時的體重相比較。眼眶采血，測出白細胞指數(shù)，病理解剖，取結腸做石蠟切片。

1.4統(tǒng)計學方法

結果表示均采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行反差分析和檢驗，用t檢驗法進行比較，以ρ<0.05認為有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1預實驗

觀察到正常組活潑好動，背毛柔順，反應迅速，感染大腸桿菌的小鼠呆立不動，背毛紊亂，眼睛睜不開，肛門糞便粘滯。打開腹腔，正常組腸道無明顯異常，而模型組腸壁變薄，變透。見圖1。

2.2正式試驗

第一張圖片為空白對照下的腸道，腸壁組織紋理清晰可見，彈性較大，組織層較厚，為白色健康正常組織;第二張圖片組織層相較于第一張變薄，腸壁的環(huán)形褶皺趨于平滑，為半透明顏色，見于輕微腹水;第三張為單一腹腔注射大腸桿菌下的腸道，腸道透明，積水嚴重，見輕微血絲，彈性消失，容易斷開，病變嚴重。見圖2。

2.3HE染色顯微鏡觀察

空白對照下的腸絨毛排列整齊，黏膜下層清晰可見;金合歡素治愈的第2張圖片，個別絨毛破碎，而第3 張大腸桿菌則腸絨毛全部紊亂，分散，黏膜，粘膜下層開始漂浮，破壞嚴重。見圖3。

2.4白細胞分析

小鼠正常的白細胞值為2.5～15.0，在第1組中，我們發(fā)現(xiàn)白細胞值在5～10，說明全部正常;第2組有80%處于正常值，20%超過正常值，說明金合歡素對大腸桿菌有一定抑菌作用;第3組100%超過范圍，提示炎癥癥狀嚴重。見圖4。

3討論

大腸桿菌屬于腸道中本身存在的細菌，從糞便中提取容易，數(shù)量過多會導致腸道緊張性收縮和容受性舒張消失，內容物變成糊狀導致壓力過大，肛門括約肌承受不住壓力，直接腹瀉不止，脫水，Na-K失衡;數(shù)量過少則使腸道的分節(jié)運動減慢，糞便阻塞腸道，導致便秘。選用小鼠作為大腸桿菌的感染模型原因有3方面。一是哺乳動物更接近人類;二是體型小，容易飼養(yǎng)和控制;三是小鼠更敏感，產(chǎn)生級聯(lián)放大發(fā)應，效果更顯著。灌胃金合歡素模擬口服給藥，確保劑量，使藥物利用最大化，但是灌胃中不可避免對小鼠食道造成損害，可能也會導致食欲不佳，體重下降。當前對耐藥性的研究中，中藥是個很好的選擇，性價比較高，標本兼治，通過藥敏實驗觀察金合歡素是否對大腸桿菌有抑菌性，確?？尚行?。

4結束語

通過肉眼觀察的狀態(tài)、顯微鏡下的形態(tài)觀察、白細胞指數(shù)變化等多方面對金合歡素的功能進行評判，金合歡素組的白細胞指標相對于單一大腸桿菌組的指標明顯趨于正常，金合歡素對大腸桿菌感染小鼠腸道的保護作用效果顯著。

參考文獻

[1]李麗娟，喬熠杰.刺槐素對禽源性大腸桿菌的抑菌作用及耐藥性消除的研究[J].畜牧獸醫(yī)科學（電子版），2021（4）：23-25.

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[3]馬納.金合歡素對視網(wǎng)膜氧化損傷保護作用的機制研究[D].北京：中國中醫(yī)科學院，2019.