HPLC-DAD法測(cè)定健心顆粒中人參皂苷Rg1、Rb1含量

張寬 鄭笈 謝玉和 謝晶心 嚴(yán)錦賢

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜測(cè)定健心顆粒中人參皂苷Rg1、Rb1含量的方法。方法： 色譜柱為SinoeChrom ODS-BP（4.6 mm×250 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm，流速：1 mL/min，柱溫25 ℃，流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫。結(jié)果： 人參皂苷Rg1回歸方程：y=92.687x+7.0482（r=0.9990），線性范圍為0.09143～2.744 mg/mL;人參皂苷Rb1回歸方程：y=14.55x+0.1452（r=0.9994），線性范圍為26.19～209.6 μg/mL，健心顆粒中人參皂苷Rb1含量為1.715 mg/mL，人參皂苷Rg1含量為22.88mg/mL。結(jié)論： 該法精密度高、準(zhǔn)確性良好，方法簡(jiǎn)便快捷，可用于評(píng)價(jià)健心顆粒中人參皂苷Rg1、Rb1的含量。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法;健心顆粒;人參皂苷Rg1;人參皂苷Rb1

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）16-0045-03

Qualitative Analysis of the Ginsenoside Rg1 And Ginsenoside Rb1 from Jianxin Granule by HPLC

ZHANG Kuan ZHENG Ji XIE Yuhe XIE Jingxin YAN Jinxian

The second Affiliated Hospital of Fujian University of traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350003，China

Abstract：Objective To establish an HPLC-DAD method for the determination of ginsenoside Rg1， ginsenoside Rb1 in Jianxin Granule. Method The analysis was performed on an SinoeChrom ODS-BP（4.6 mm×250 mm，5 μm）with gradient elution using acetonitrile-water as the mobile phase at the flow rate of 1 mL·min-1， the column temperature of 25 ℃.Result ginsenoside Rg1：y=92.687x+7.0482（r=0.9990），linear range：0.09143～2.744 mg/mL;ginsenoside Rb1：y=14.55x+0.1452（r=0.9994），linear range：26.19～209.6 μg/mL. Conclusion The method is accurate， simple and rapid， and can be used for the determination of the ginsenoside Rg1 and ginsenoside Rb1 in Jianxin Granule.

Key words：High Performance Liquid Chromatography;Jianxin Granule;Ginsenoside Rg1;Ginsenoside Rb1

健心顆粒是依據(jù)我院陳美華主任基于中醫(yī)辨證為“心陽氣虛，血瘀水?！钡慕?jīng)驗(yàn)方“健心湯”而制成的院內(nèi)制劑，臨床使用十余年，用于治療慢性心力衰竭療效顯著。方藥組成包括黃芪、紅參、丹參、豬苓、白術(shù)、葶藶子、蒲黃、桂枝共八味藥，具有益氣活血、溫陽利水之功效。健心顆粒是通過現(xiàn)代工藝技術(shù)加工制成的新型中藥制劑，與傳統(tǒng)湯劑相比，具有便于攜帶、使用方便、口感較好的特點(diǎn)，患者更易接受，因此對(duì)其指標(biāo)性成分進(jìn)行控制，保證制劑質(zhì)量的均一、安全、有效尤為重要。紅參為健心顆粒的君藥之一，且屬于貴重中藥，故擬制定HPLC測(cè)定人參皂苷Rg1、Rb1含量的方法，以期為該制劑的質(zhì)量控制提供有效手段。

1 儀器與試藥

戴安U3000高效液相色譜儀，PDA-100 光電二極管陣列檢測(cè)器（Somerfeld Fisher Scientfic（中國(guó)）有限公司）;SB-5200DT超聲波提取器（寧波新芝生物科技股份有限公司，批號(hào)：131897）;BSA224S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，批號(hào)：2014-03）。健心顆粒由福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院提供（批號(hào)：202007004、202009006、202011002）。人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)：181010），人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)：15102910）均購于中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純;水為超純水;其他其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為SinoeChrom ODS-BP（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～10 min，23%～25%A;10～20 min，25%～25%A;20～30 min，25%～30%A;30～45 min，30%～40%A）;流速：1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm;柱溫25 ℃;進(jìn)樣量10 μL。如圖1所示。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱定人參皂苷Rb1對(duì)照品0.0110 g于10 mL容量瓶中，加入甲醇，超聲溶解，定容，得到濃度為1.100 mg/mL的人參皂苷Rb1對(duì)照品貯備液。精密稱定人參皂苷Rg1對(duì)照品0.0096 g于10 mL容量瓶中，加入甲醇，超聲溶解，定容，得到濃度為0.9600 mg/mL的人參皂苷Rg1對(duì)照品貯備液。

2.3 供試品溶液制備 取健心顆粒粉末5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇，稱定重量，放置過夜，超聲處理30 min（250 W 40 kHz），放至室溫，甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，過濾，取上清液，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密量取人參皂苷Rb1、Rg1對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，置于5 mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。得到含有人參皂苷Rb1、Rg1混合對(duì)照品溶液，其中人參皂苷Rb1的濃度為209.5 μg/mL，人參皂苷Rg1的濃度為2.744 mg/mL，稀釋成一系列對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品溶液濃度（C）為橫坐標(biāo)x，峰面積（A）為縱坐標(biāo)y，得回歸方程：人參皂苷Rg1：y=92.687x+7.0482（r=0.9990），線性范圍為0.09143～2.744 mg/mL;人參皂苷Rb1回歸方程：y=14.55x+0.1452（r=0.9994），線性范圍為26.19～209.6 μg/mL。如圖2所示。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。人參皂苷Rb1峰面積RSD為1.45%;保留時(shí)間（tR）RSD為1.71%，人參皂苷Rg1峰面積RSD為0.60%;保留時(shí)間（tR）RSD為1.26%，表明該儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱定健心顆粒約5.0 g，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。人參皂苷Rb1峰面積RSD為1.13%，人參皂苷Rg1峰面積RSD為1.27%，說明該供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱定健心顆粒約5.0g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，平行操作6次。人參皂苷Rb1的平均含量為1.734 mg/g，RSD為1.71%，人參皂苷Rg1的平均含量為22.53 mg/g，RSD為1.25%，說明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同批健心顆粒6份，每份約5.0 g，均精密加入人參皂苷Rb1、Rg1對(duì)照品溶液適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。人參皂苷Rb1的平均加樣回收率為102.0%，RSD為1.76%，人參皂苷Rg1的平均加樣回收率為101.3%，RSD為1.49%，說明該方法準(zhǔn)確性高。

2.9 樣品含量測(cè)定 取3個(gè)批次健心顆粒（批號(hào)為202007004、202009006、202011002），分別按上述方法制備供試品溶液，并測(cè)定人參皂苷Rb1、Rg1含量。結(jié)果見表1及圖3所示。

3 討論

3.1 人參皂苷Rg1、Rb1可作為健心顆粒制劑的質(zhì)量標(biāo)志物 健心顆粒是我院治療慢性心力衰竭的常用制劑，研究[1-3]證實(shí)，其可以改善心衰大鼠左室功能，并能減少尾加壓素Ⅱ（UⅡ）、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（CaN）的表達(dá)，在抗心肌纖維化及抗心肌重構(gòu)方面發(fā)揮顯著作用。此外，健心顆粒還可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的KLF4 mRNA表達(dá)，進(jìn)而干預(yù)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷[4]。為保證制劑在臨床發(fā)揮穩(wěn)定的療效，對(duì)制劑的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控的重要手段是對(duì)制劑中有效成分進(jìn)行含量控制[5]。筆者對(duì)健心顆粒建立了HPLC法測(cè)定其君藥紅參中主成分人參皂苷Rg1、Rb1的含量，由于人參皂苷Re峰較難檢出，不利于定量分析方法的建立，故排除其作為指標(biāo)成分。文獻(xiàn)報(bào)道顯示：人參皂苷Rg1、Rb1都是人參治療心衰的活性成分[6-7]，人參皂苷Rb1能夠從抑制心肌組織TGF-β1含量、影響periostin蛋白表達(dá)進(jìn)而調(diào)控TGF-β信號(hào)通路，抑制心室重構(gòu)，防治心力衰竭[8]。人參皂苷Rg1可改善心衰大鼠的心功能，此外對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌肥厚也具有保護(hù)作用[6，8]。因此，從藥效學(xué)角度考慮，人參皂苷Rg1、Rb1可作為健心顆粒制劑的質(zhì)量標(biāo)志物。

3.2 提取方法考察 試驗(yàn)考察了藥典方法[9]和超聲提取法，結(jié)果顯示，兩種方法對(duì)人參皂苷Rg1、Rb1的提取率差別不大，而超聲提取法操作步驟更簡(jiǎn)單，有機(jī)溶劑使用較少，更適合作為健心顆粒制劑質(zhì)量質(zhì)控的提取方法。

3.3 后期工作方向 紅參是人參的常用炮制品，蒸制過程中，部分化學(xué)成分發(fā)生變化，因此在質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，也可以選擇紅參特有的化學(xué)成分如20（S）-ginsenoside Rh1與20（S）-ginsenoside Rh2[10]作為檢測(cè)指標(biāo)，該內(nèi)容可作為后期工作的一個(gè)研究方向。

綜上所述，人參皂苷Rg1、Rb1色譜峰在203 nm有較大的吸收峰，且分離度較高、峰形良好無干擾，經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，精密度高、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)單，以人參皂苷Rg1、Rb1為指標(biāo)性成分對(duì)3批健心顆粒進(jìn)行考察，三批制劑成分含量差異不大，說明制劑生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠，可為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

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（收稿日期：2021-12-07 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：福建省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（2021J01871）。

作者簡(jiǎn)介：張寬（1987-），女，漢族，碩士，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)及機(jī)制。E-mail：358499722@qq.com