桑黃提取物的體外抗氧化、降血糖及降尿酸活性

李雨鴻，殷朝敏，范秀芝，史德芳，姚芬，李晨，劉穎，程雅清，高虹,3*

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北武漢 430070）（2.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所，湖北武漢 430064）（3.湖北省林下經(jīng)濟(jì)工程研究中心，湖北武漢 430064）

桑黃，又稱(chēng)桑耳、桑臣和胡孫眼，在分類(lèi)學(xué)上隸屬于擔(dān)子菌門(mén)Basidiomycota、傘菌綱Agaricomycetes、銹革菌目 Hymenochaetales、銹革菌科Hymenochaetaceae、桑黃屬Sanghuangporus，是一類(lèi)珍貴的藥用真菌[1]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，桑黃中含有多糖、黃酮、三萜、多酚類(lèi)、吡喃酮類(lèi)和呋喃類(lèi)等多種活性物質(zhì)，因此具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、抗腫瘤和抗癌等多種功效[2,3]。呂國(guó)英等[4]與Zheng等[5]研究表明桑黃醇提物中的黃酮與酚類(lèi)化合物可能對(duì)抗氧化性起著主要作用，胡曉彤等[6]發(fā)現(xiàn)純化后的桑黃多糖具有一定的抗氧化活性；Feng等[7]發(fā)現(xiàn)桑黃多糖能夠有效改善小鼠胰島素抗性，從而降低小鼠的血糖濃度，而Wang等[8]的研究同時(shí)也驗(yàn)證了桑黃醇提物能顯著改善糖尿病狀況。最近，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)桑黃提取物可能具有一定的降尿酸活性并具有抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎功效[9]，而關(guān)于桑黃多糖的降尿酸活性研究鮮有報(bào)道。

近年來(lái)，隨著桑黃藥理作用研究的不斷深入及其天然抗癌產(chǎn)品屬性的深入人心，桑黃已經(jīng)為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥制劑和保健品行業(yè)研究開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)。目前，楊樹(shù)桑黃（Sanghuangporus vaninii）人工馴化栽培已經(jīng)獲得成功[10]，因此可以從楊樹(shù)桑黃子實(shí)體中大量提取生物活性物質(zhì)。本研究制備了楊樹(shù)桑黃子實(shí)體醇提物和粗多糖，比較分析了二者體外抗氧化、降血糖及降尿酸等功效，為充分利用桑黃資源、開(kāi)發(fā)桑黃功能性食品或醫(yī)藥保健品提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與設(shè)備

桑黃子實(shí)體（S. vaninii）購(gòu)自吉林省長(zhǎng)白縣林豐菌業(yè)有限公司；果膠酶、纖維素酶、木瓜蛋白酶和Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自Solarbio公司；α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶購(gòu)自Sigma公司；黃嘌呤氧化酶購(gòu)自Roche公司；其余試劑均購(gòu)自于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

SPARK多功能酶標(biāo)儀，日本島津有限公司；UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津有限公司；KS-300VDE/3超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

桑黃子實(shí)體經(jīng)50 ℃烘干、粉碎、過(guò)篩（40目）后獲得桑黃子實(shí)體干粉，于4 ℃保藏備用。桑黃子實(shí)體粉以1:40（m/V）的料液比加入95%乙醇，在功率為300 W的條件下超聲20 min，然后離心（8000 r/min，20 min）收集上清液，殘?jiān)^續(xù)用95%乙醇提取3次，合并上清液，旋蒸濃縮至一定體積后，凍干得到桑黃醇提物。

殘?jiān)鼡]干乙醇后，按1:40的料液比加入熱水（80 ℃）浸泡1 h，冷卻后加入混合酶液（果膠酶、纖維素酶和木瓜蛋白酶），使其終濃度達(dá)到200 U/mL并在37 ℃水浴1 h；隨后在功率為300 W的條件下超聲20 min，離心（8000 r/min，20 min）并收集上清液；殘?jiān)^續(xù)用水提取3次，合并上清液，旋蒸濃縮至一定體積，加入4倍無(wú)水乙醇并于4 ℃過(guò)夜；離心后將沉淀低溫烘干得到桑黃粗多糖。

1.2.2 多糖化學(xué)組成分析

以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量[11]；以BSA為標(biāo)準(zhǔn)品，采用Bradford試劑盒測(cè)定桑黃粗多糖的蛋白質(zhì)含量[12]；以半乳糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用硫酸-間羥聯(lián)苯法測(cè)定桑黃粗多糖的糖醛酸含量[13]；以硫酸鉀為標(biāo)準(zhǔn)品，采用氯化鋇-明膠比濁法測(cè)定桑黃粗多糖的硫酸基含量[14]。

1.2.3 醇提物活性成分分析

以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用福林-酚法[15]測(cè)定桑黃醇提物的總酚含量；以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法[16]測(cè)定桑黃醇提物的黃酮含量；以熊果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用香草醛-高氯酸比色法[17]測(cè)定桑黃醇提物總?cè)坪浚灰喳溄晴薮紴闃?biāo)準(zhǔn)品，采用香草醛-高氯酸比色法[18]測(cè)定桑黃醇提物總甾醇含量。

1.2.4 抗氧化活性測(cè)定

以Vc作為陽(yáng)性對(duì)照，按照Chen等[19]的方法測(cè)定DPPH自由基清除活性、還原能力以及羥基自由基清除活性，按照Shang等[20]的方法測(cè)定ABTS自由基清除活性。

1.2.5 降血糖活性測(cè)定

1.2.5.1α-淀粉酶抑制活性測(cè)定

α-淀粉酶抑制率的測(cè)定根據(jù)王靜等[21]的方法稍作修改。取不同濃度的樣液20.00 μL和α-淀粉酶溶液（5.00 U/mL）20.00 μL于1.50 mL離心管中渦旋混勻，在37 ℃條件下水浴10 min；完成后加入1.00%淀粉溶液40.00 μL，37 ℃條件下繼續(xù)反應(yīng)10 min；最后加入80.00 μL DNS試劑終止反應(yīng)，在沸水浴中加熱5 min后取出，于冰水浴中迅速冷卻，最后加入1.00 mL水稀釋。以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照，在波長(zhǎng)540 nm處測(cè)定吸光值。α-淀粉酶抑制率的計(jì)算公式如下：

式中：

A——加酶不加樣品管吸光值；

B——不加酶不加樣品管吸光值；

C——加酶加樣品管吸光值；

D——不加酶加樣品管吸光值。

1.2.5.2α-淀粉酶的抑制作用類(lèi)型分析

固定淀粉酶濃度（5.00 U/mL），分別加入不同濃度（0.00、1.00和3.00 mg/mL）的多糖和醇提物溶液，測(cè)定可溶性淀粉溶液濃度分別為0.50、0.75、1.00、2.50、5.00和10.00 mg/mL 時(shí)的初速率，按Lineweaver-Burks雙倒數(shù)作圖法，以初速率（V）的倒數(shù)對(duì)底物濃度[S]的倒數(shù)作圖，判斷多糖和醇提物對(duì)α-淀粉酶的抑制類(lèi)型。

1.2.5.3α-葡萄糖苷酶抑制率的測(cè)定

α-葡萄糖苷酶抑制率的測(cè)定根據(jù)劉合生等[22]的方法稍作修改。取磷酸緩沖液（0.10 mol/L，pH=6.80）0.70 mL，不同濃度的樣液0.10 mL和α-葡萄糖苷酶溶液（0.24 U/mL）0.10 mL于1.50 mL離心管中渦旋混勻，在37 ℃條件下水浴10 min；然后加入0.10 mL pNPG溶液（2.50 mmol/L），37 ℃下繼續(xù)反應(yīng)20 min；最后加入0.40 mL Na2CO3溶液（0.20 mol/L）終止反應(yīng)。以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照，在波長(zhǎng)405 nm處測(cè)定吸光值。α-葡萄糖苷酶抑制率的計(jì)算公式如下：

式中：

A——加酶不加樣品管吸光值；

B——不加酶不加樣品管吸光值；

C——加酶加樣品管吸光值；

D——不加酶加樣品管吸光值。

1.2.5.4α-葡萄糖苷酶的抑制作用類(lèi)型分析

固定α-葡萄糖苷酶濃度（0.24 U/mL），分別加入不同濃度的多糖（0.00、1.00和3.00 mg/mL）和醇提物溶液（0.00、50.00和100.00 μg/mL），測(cè)定pNPG濃度分別為0.50、1.00、1.50、2.00、2.50和3.00 mmol/L時(shí)的初速率，按Lineweaver-Burks雙倒數(shù)作圖法，以初速率（V）的倒數(shù)對(duì)底物濃度[S]的倒數(shù)作圖，判斷多糖和醇提物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制類(lèi)型。

1.2.6 降尿酸活性測(cè)定

1.2.6.1 黃嘌呤氧化酶抑制活性

黃嘌呤氧化酶抑制率的測(cè)定根據(jù)萬(wàn)茵等[23]的方法略作改動(dòng)。取磷酸緩沖液（0.10 mol/L，pH=8.50）0.60 mL，黃嘌呤溶液（2.00 mmol/L）0.20 mL以及不同濃度的樣液0.10 mL于1.50 mL離心管中渦旋混勻；然后加入0.20 mL黃嘌呤氧化酶液（0.10 U/mL）并在25 ℃水浴反應(yīng)30 min；完成后加入0.20 mL的HCl溶液（1.00 mol/L）終止反應(yīng)。以別嘌呤醇作為陽(yáng)性對(duì)照，于波長(zhǎng)290 nm處測(cè)定吸光值。黃嘌呤氧化酶抑制率的計(jì)算公式如下：

式中：

A——加酶不加樣品管吸光值；

B——不加酶不加樣品管吸光值；

C——加酶加樣品管吸光值；

D——不加酶加樣品管吸光值。

1.2.6.2 黃嘌呤氧化酶的抑制作用類(lèi)型分析

固定黃嘌呤氧化酶濃度（0.10 U/mL），分別加入不同濃度（0.00、1.00和3.00 mg/mL）的多糖和醇提物溶液，測(cè)定黃嘌呤溶液濃度分別為0.25、0.50、1.00、1.50、2.00和 2.50 mmol/L 時(shí)的初速率，按Lineweaver-Burks雙倒數(shù)作圖法，以初速率（V）的倒數(shù)對(duì)底物濃度[S]的倒數(shù)作圖，判斷多糖和醇提物對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制類(lèi)型。

1.2.7 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用Origin 2021軟件進(jìn)行進(jìn)行繪圖與方程擬合。

2 結(jié)果與分析

2.1 粗多糖與醇提物的成分及含量分析

桑黃粗多糖中總多糖、糖醛酸、蛋白質(zhì)和硫酸根的含量如表1所示。桑黃與一般食用菌不同，子實(shí)體木質(zhì)化比較嚴(yán)重，其多糖含量較低，實(shí)驗(yàn)中桑黃多糖提取率僅有2.57%。此外，本實(shí)驗(yàn)中桑黃粗多糖的總糖含量為74.87%，顯著高于王欽博等[24]采用熱水浸提法得到的桑黃水溶性多糖（56.70%）。桑黃粗多糖中蛋白質(zhì)含量為6.61%，與Yang等[25]的研究結(jié)果類(lèi)似（5.60%）。糖醛酸和硫酸根含量較少，分別為4.84%和2.59%。

表1 桑黃兩種提取物成分Table 1 Two extracts of S. vaninii (%±SD, n=3)

表1 桑黃兩種提取物成分Table 1 Two extracts of S. vaninii (%±SD, n=3)

指標(biāo) 粗多糖 指標(biāo) 醇提物 得率 2.57±0.17 得率 6.22±0.66總糖 74.87±4.86 總酚 35.72±0.65蛋白質(zhì) 6.61±0.24 總黃酮 8.98±0.14糖醛酸 4.84±0.61 總?cè)?5.82±0.18硫酸根 2.59±0.48 總甾醇 7.36±0.26

在桑黃醇提物中，黃酮、三萜和酚類(lèi)物質(zhì)為其主要的活性成分。相較于粗多糖，醇提物的得率較高，為6.22%。桑黃醇提物的酚類(lèi)物質(zhì)含量較多，含量為35.72%，黃酮含量為8.98%，總?cè)坪涂傜薮嫉暮糠謩e為5.82%和7.36%，均高于葉玉潔等[26]所測(cè)定桑黃醇提物的黃酮類(lèi)和總?cè)坪浚?.94%和2.20%）。除此之外，醇提物成分復(fù)雜，還含有其他化學(xué)成分，如香豆素類(lèi)、生物堿以及有機(jī)酸等[27]，這對(duì)醇提物的生物活性具有一定影響。

2.2 桑黃粗多糖與醇提物的抗氧化性

2.2.1 DPPH自由基清除能力

DPPH·常被用于檢測(cè)樣品抗氧化性能力，其測(cè)定原理是基于DPPH·被抗氧化劑還原，導(dǎo)致溶液顏色從紫色變?yōu)辄S色[28]。桑黃粗多糖與醇提物DPPH自由基清除能力如圖1所示。結(jié)果顯示：在0.25～2.50 mg/mL的濃度范圍內(nèi)，桑黃兩種提取物的DPPH自由基清除率均隨著質(zhì)量濃度的增加而增大，且有一定的劑量依賴(lài)效應(yīng)，但都低于Vc的清除效果。在濃度為2.50 mg/mL時(shí)，醇提物DPPH自由基清除率達(dá)到了86.26%，而粗多糖則具有61.20%。Shen等[29]研究發(fā)現(xiàn)桑黃醇提物中的主要抗氧化物質(zhì)為黃酮和多酚化合物。本實(shí)驗(yàn)桑黃醇提物DPPH自由基清除能力高于桑黃多糖，這可能與醇提物中含有較高的黃酮、三萜和酚類(lèi)物質(zhì)有關(guān)。但醇提物中含有的化合物種類(lèi)較多，還有部分物質(zhì)未能測(cè)定，醇提物較強(qiáng)的抗氧化作用也可能是多類(lèi)化合物共同作用的結(jié)果。梁麗等[30]證實(shí)了6,7-二羥基香豆素與龍膽酸之間的協(xié)同作用提高了混合物的DPPH自由基清除效果。

2.2.2 ABTS自由基清除能力

如圖2所示，桑黃的兩種提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力都很強(qiáng)。在0.25～2.50 mg/mL范圍內(nèi)，桑黃粗多糖的濃度與ABTS自由基清除率呈正相關(guān)，具有一定的劑量依賴(lài)效應(yīng)，在質(zhì)量濃度為2.50 mg/mL時(shí)達(dá)到最高，其ABTS自由基清除率為96.00%。應(yīng)瑞峰等[31]研究發(fā)現(xiàn)，桑黃子實(shí)體多糖濃度在8.00 mg/mL時(shí)，ABTS自由基清除率達(dá)到了92.19%，且清除效果優(yōu)于桑黃菌絲體多糖。而在相同的濃度范圍內(nèi)，醇提物的清除率穩(wěn)定在98.00%～99.00%左右，與Vc清除能力相當(dāng)，表現(xiàn)出優(yōu)異的ABTS自由基的清除能力。與脂溶性的DPPH自由基不同，ABTS自由基具有親脂性和親水性，因而更易于同各種生物活性物質(zhì)反應(yīng)[32]。

2.2.3 羥基自由基清除能力

如圖3所示，桑黃粗多糖和醇提物對(duì)羥基自由基均具有一定的清除作用，且隨著濃度不斷增加，清除率逐漸上升，但是二者對(duì)羥基自由基的清除作用遠(yuǎn)低于Vc的效果。在濃度為2.50 mg/mL時(shí)，醇提物清除率最高可達(dá)到41.75%，而多糖的清除率只有36.95%，二者相差不大。綜合以上三種抗氧化實(shí)驗(yàn)，桑黃兩種提取物對(duì)DPPH自由基和ABTS自由基都具有較高的清除率，對(duì)羥基自由基清除效果較弱，這可能是由于自由基的抗氧化機(jī)制不同，多糖與酚類(lèi)物質(zhì)含有較多羥基，可提供質(zhì)子與ABTS自由基和DPPH自由基反應(yīng)，而羥基自由基通常是通過(guò)親電加成反應(yīng)清除自由基[33]。這與李帆等[34]的研究結(jié)果類(lèi)似。

2.2.4 還原力

物質(zhì)的抗氧化活性與還原力密切相關(guān)，物質(zhì)的還原力越強(qiáng)，其抗氧化活性越好[35]。如圖4所示，桑黃粗多糖與醇提物的還原力顯著低于Vc，Vc在0.50 mg/mL時(shí)就達(dá)到了3.04。隨著濃度的增大，桑黃兩種提取物和Vc還原能力越強(qiáng)，與DPPH自由基清除效果類(lèi)似，還原能力大小依次為Vc>醇提物>多糖。當(dāng)質(zhì)量濃度為2.50 mg/mL時(shí)，桑黃醇提物的吸光度達(dá)到3.21，為多糖的3倍，這表明醇提物相較于多糖具有更強(qiáng)的還原力。

2.3 降血糖活性測(cè)定

2.3.1α-淀粉酶抑制活性

如圖5所示，桑黃粗多糖和醇提物對(duì)α-淀粉酶均有一定的抑制效果。在濃度為4.00～10.00 mg/mL時(shí)，抑制率隨著濃度的增加而逐漸增大，呈現(xiàn)出量效依賴(lài)關(guān)系。當(dāng)濃度增大到10.00 mg/mL時(shí)，多糖抑制率為50.15%，而醇提物則達(dá)到了87.29%。此外，桑黃多糖和醇提物的IC50值分別為10.35 mg/mL和6.63 mg/mL，遠(yuǎn)高于阿卡波糖IC50值（0.10 mg/mL）。相較而言，桑黃醇提物可能比桑黃多糖更適于作為α-淀粉酶的潛在抑制劑。

2.3.2 桑黃提取物對(duì)α-淀粉酶的抑制類(lèi)型

桑黃粗多糖和醇提物對(duì)α-淀粉酶抑制類(lèi)型的雙倒數(shù)Lineweaver-Burk圖如圖6所示。圖6a中三組直線(xiàn)相交于第二象限靠近原點(diǎn)的一點(diǎn)，隨著多糖濃度的升高，直線(xiàn)在縱軸的截距1/V依次增大，即Vmax隨多糖濃度增大而減??；在橫軸的截距-1/Km依次增大，即Km隨多糖濃度增大而增大，這表明桑黃多糖對(duì)α-淀粉酶抑制類(lèi)型為混合型抑制，其Ki值為1.14 mg/mL。劉偉等[36]和Wang等[37]分別研究發(fā)現(xiàn)草莓多糖和刺梨果多糖對(duì)α-淀粉酶抑制類(lèi)型為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，這表明多糖種類(lèi)、結(jié)構(gòu)不同可能會(huì)產(chǎn)生不同類(lèi)型的α-淀粉酶抑制作用。類(lèi)似的，桑黃醇提物對(duì)α-淀粉酶抑制類(lèi)型也為混合型抑制（圖6b），其Ki值為3.26 mg/mL，該抑制類(lèi)型與辣木葉乙醇提取物[38]和乳苣正丁醇提取物[39]和對(duì)α-淀粉酶抑制類(lèi)型相同。

2.3.3α-葡萄糖苷酶抑制率的測(cè)定

在樣品濃度為0.20～1.00 mg/mL時(shí)，桑黃多糖和醇提物均表現(xiàn)出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性，且具有濃度依賴(lài)效應(yīng)（圖7）。在濃度為1.00 mg/mL時(shí)，桑黃多糖和醇提物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率分別為33.84%和81.03%。桑黃多糖IC50值為1.80 mg/mL，高于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖IC50值（0.87 mg/mL），而桑黃醇提物IC50值為0.43 mg/mL，顯著低于阿卡波糖，這表明桑黃醇提物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性?xún)?yōu)于阿卡波糖，這與李榕娣等[40]的研究結(jié)果一致，原因可能是醇提物中具有豐富的黃酮和酚類(lèi)化合物，使得α-葡萄糖苷酶抑制作用強(qiáng)于阿卡波糖。也可能是多種化合物的共同作用，鄭智音等[41]的研究結(jié)果表明：與單一給藥相比，鮮馬齒莧多糖、生物堿及多酚這3類(lèi)組分整體給藥能夠讓糖尿病小鼠血糖顯著下降。

2.3.4 桑黃提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制類(lèi)型

桑黃多糖和醇提物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制類(lèi)型的雙倒數(shù)Lineweaver-Burk圖如圖8所示。圖8a中，不同濃度的多糖溶液曲線(xiàn)均過(guò)Y軸上的一點(diǎn)，隨著多糖濃度的升高，Vm不變，Km增大，這種曲線(xiàn)特征符合競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制的特點(diǎn)，所以桑黃粗多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制類(lèi)型屬于競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制，其抑制常數(shù)Ki值為0.04 mg/mL。這與刺梨多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的混合型抑制類(lèi)型有所不同[37]。

圖8b中，三條直線(xiàn)均過(guò)第三象限的一點(diǎn)，隨著反應(yīng)體系中桑黃醇提物質(zhì)量濃度的增大，體系Km值減小，而最大反應(yīng)速率Vm逐漸減小，這種現(xiàn)象屬于競(jìng)爭(zhēng)與反競(jìng)爭(zhēng)的混合型抑制的特征，其抑制常數(shù)Ki值為0.01 mg/mL。類(lèi)似的，巖藻黃素[42]和焦棓酸[43]對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制類(lèi)型均為混合型抑制。

2.4 降尿酸活性

2.4.1 黃嘌呤氧化酶抑制率的測(cè)定

作為人體內(nèi)嘌呤代謝的關(guān)鍵酶，黃嘌呤氧化酶可催化黃嘌呤和次黃嘌呤生成尿酸，過(guò)多的尿酸卻會(huì)導(dǎo)致高尿酸血癥，并引發(fā)痛風(fēng)，而黃嘌呤氧化酶抑制劑通過(guò)抑制XOD活性，能夠減少尿酸鹽的生成[23]。已有研究表明酚類(lèi)和黃酮類(lèi)化合物對(duì)黃嘌呤氧化酶有較好的抑制作用[44,45]，有關(guān)多糖降尿酸活性的研究相對(duì)較少。因此，本研究通過(guò)桑黃醇提物與多糖對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制能力來(lái)評(píng)價(jià)其作為黃嘌呤氧化酶抑制劑的潛力。以別嘌呤醇為陽(yáng)性對(duì)照，分析了不同濃度的 桑黃提取物對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制率的影響。如圖9所示，在0.50～3.00 mg/mL的濃度范圍內(nèi)，隨著樣品濃度的增加，桑黃多糖和醇提物對(duì)XOD的抑制率也呈現(xiàn)出增加的趨勢(shì)。在3.00 mg/mL時(shí)，桑黃醇提物抑制率為97.07%，顯著高于桑黃多糖抑制率（47.34%）。此外，桑黃醇提物IC50值為0.85 mg/mL，遠(yuǎn)低于桑黃多糖的IC50值（3.03 mg/mL），但二者IC50值均高于陽(yáng)性對(duì)照別嘌呤醇IC50值（0.05 mg/mL）。

2.4.2 桑黃提取物對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制類(lèi)型

桑黃多糖和醇提物對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型的雙倒數(shù)Lineweaver-Burk圖如圖10所示。圖10a中，不同濃度的多糖溶液直線(xiàn)在圖上呈現(xiàn)出一組平行的直線(xiàn)，隨著多糖濃度的升高，反應(yīng)速率Vm降低，Km減小，這種曲線(xiàn)特征符合反競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制的特點(diǎn)，所以桑黃粗多糖對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制類(lèi)型屬于反競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制，其抑制常數(shù)Ki=3.58 mg/mL。這與鼠尾藻水溶性組分[46]對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制類(lèi)型一致。

圖10b中，不同濃度的醇提物溶液直線(xiàn)相交于X負(fù)軸上的一點(diǎn)，隨著桑黃醇提物濃度的增大，體系Km值保持不變，而最大反應(yīng)速率Vm逐漸減小，符合非競(jìng)爭(zhēng)抑制類(lèi)型的特征，其抑制常數(shù)Ki=1.86 mg/mL。萬(wàn)茵等[23]研究發(fā)現(xiàn)，蕎麥籽、白高粱對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制類(lèi)型為競(jìng)爭(zhēng)性抑制，麥仁、薏仁米對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制類(lèi)型為混合型抑制，這表明醇提物所含成分不同，其對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型也不同。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)以桑黃子實(shí)體為原料，采用超聲提取方法制備了桑黃粗多糖和醇提物，對(duì)二者基本組成、體外抗氧化、降血糖和降尿酸活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果顯示，桑黃粗多糖中總糖含量為74.87%，另外含有少量蛋白質(zhì)、糖醛酸及硫酸基；桑黃醇提物中，其主要活性成分是酚類(lèi)和黃酮類(lèi)，其酚類(lèi)含量高達(dá)35.72%，黃酮類(lèi)含量為8.98%。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明桑黃多糖和醇提物具有一定的DPPH自由基、ABTS自由基、羥自由基清除能力和一定的還原力，總體來(lái)看，桑黃醇提物抗氧化活性好于桑黃多糖。體外降血糖實(shí)驗(yàn)表明桑黃粗多糖和醇提物對(duì)α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶均有一定的抑制效果，但是桑黃醇提物體外降血糖效果明顯優(yōu)于桑黃多糖。另外，桑黃醇提物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用IC50值為0.43 mg/mL，遠(yuǎn)低于阿卡波糖IC50值（0.87 mg/mL），這表明桑黃醇提物可能具有一定降血糖功效。動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)表明，桑黃多糖和醇提物對(duì)α-淀粉酶活性的抑制作用類(lèi)型均為混合型抑制；桑黃多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用類(lèi)型為競(jìng)爭(zhēng)性抑制，而醇提物為混合型抑制。體外降尿酸實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，桑黃多糖和醇提物均對(duì)黃嘌呤氧化酶具有一定的抑制作用，并且桑黃醇提物降尿酸活性?xún)?yōu)于桑黃粗多糖；二者對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用類(lèi)型截然不同，桑黃多糖呈現(xiàn)反競(jìng)爭(zhēng)性抑制，而醇提物為非競(jìng)爭(zhēng)抑制。綜上所述，桑黃醇提物具有較高體外抗氧化、降血糖和降尿酸活性，但粗提物中起主要作用的活性成分和結(jié)構(gòu)是哪種，目前尚不清楚，還需進(jìn)一步純化明確其作用機(jī)制，同時(shí)還需通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其體內(nèi)的生物活性。