消除脂血對臨床生化檢驗(yàn)常用指標(biāo)干擾的方法比較

王天義

（大連康復(fù)療養(yǎng)中心，遼寧 大連 116013）

在過去的20年里，檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的重點(diǎn)已經(jīng)逐漸轉(zhuǎn)移至分析前階段，這是整個(gè)測試過程中最容易出錯(cuò)的階段。因此應(yīng)特別注意標(biāo)本采集、運(yùn)輸、樣品質(zhì)量、儲(chǔ)存和處理，以獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果[1]。目前已經(jīng)發(fā)布了許多指南，包括由臨床臨床生化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）制定的指南，以幫助臨床生化檢驗(yàn)管理測試周期中提到的每個(gè)方面[2]。在實(shí)踐中，內(nèi)源性干擾可能是臨床生化測試的重要錯(cuò)誤來源[3]。其中脂血癥是最常見的分析前干擾之一，可能是脂蛋白顆粒積聚引起的樣品渾濁，會(huì)導(dǎo)致光吸收增加，影響使用分光光度法的測試。血脂還可能通過體積置換引起干擾，尤其影響電解質(zhì)分析[4]。此外，脂血樣本的其他可能問題包括樣本不均勻性（破壞分析儀檢測和移液器樣本的方式）和血清蛋白電泳圖譜的改變。雖然低水平的脂血癥通常不會(huì)顯著影響臨床實(shí)驗(yàn)室檢測，但嚴(yán)重脂血癥的存在可能會(huì)影響分析。脂血雖然不像溶血和黃疸樣本那樣常見，但仍然會(huì)引起相當(dāng)大的問題[5]。根據(jù)CLSI C56-A文件，真空超速離心是去除脂血的推薦方法，其他方法雖也被用于去除脂血的常規(guī)實(shí)踐，如高速離心、PEG沉淀或乙醚處理等方法來消除脂血對常規(guī)生化項(xiàng)目的干擾，但各有優(yōu)缺點(diǎn)[6]。鑒于此，本文以所在醫(yī)院2020年1月至2021年12月，采集到的100例健康體檢人員的血液樣本為例，重點(diǎn)探究高速離心法和LipoClear脂質(zhì)清除劑對臨床生化檢驗(yàn)中消除脂血對常用指標(biāo)干擾的效果，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 人口統(tǒng)計(jì) 本次研究經(jīng)所在醫(yī)院的倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，征得研究對象本人及其家屬的同意并簽署《知情同意書》后方可進(jìn)行。具體以所在醫(yī)院2020年1月至2021年12月，采集到的100例健康體檢人員的血液樣本為例，隨機(jī)分為對照組和觀察組。對照組50例中，男性24例，女性26例；患者年齡24～37歲，平均年齡（31±2.45）歲；患者身高151～181 cm，平均身高（172±1.34）cm；患者平均體質(zhì)量指數(shù)21.1 kg/m2；患者平均VO2max 41.2 mL/（min·kg）；平均最大心率192次/分。觀察組50例中，男性27例，女性23例；患者年齡25～41歲，平均年齡（32±2.65）歲；患者身高152～183 cm，平均身高（173±1.54）cm；患者平均體質(zhì)量指數(shù)22.2 kg/m2；患者平均VO2max 42.1 mL/（min·kg）；平均最大心率193次/分。所選患者均為身體健康體檢人群，且排除懷孕期患者、精神疾病患者或其他不適宜參與研究的患者。兩組統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)對比，P＞0.05，可進(jìn)行對比研究。

1.1.2 試劑與器材 研究使用日立7600C全自動(dòng)生化分析儀，各種常規(guī)生化試劑為四川邁克科技有限公司提供，cfas標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清為美國郎道產(chǎn)品；Lipoclear脂質(zhì)清除劑為StatSpin公司提供，30 mL裝，批號(hào)11131；脂肪乳注射液為西安力邦制藥有限公司提供，批號(hào)1l0817。TGl6-W微量高速離心機(jī)。

1.2 研究方法 本次研究主要檢測包括K、Na、Cl、Ca、P、Urea、Cr、UA、TBIL、GLU、ALT、AST、GGT、LDH、AMY、TP、ALB和TG在內(nèi)的18項(xiàng)臨床常用生化檢測項(xiàng)目。其中，對照組禁食8～12 h后，由護(hù)士和醫(yī)療技術(shù)人員使用無菌技術(shù)采集靜脈血，樣本在-20 °C下冷凍24 h。24 h后，解凍并通過濾紙過濾。過濾后，測定18項(xiàng)生化項(xiàng)目，再取血清0.5 mL于小型離心管中，加入脂肪乳注射液10 μL，充分混勻，形成中高濃度脂血，震蕩混勻后靜置5 min，采用6 000 r/min離心5 min，使用加樣槍吸取表層凝固物下的清亮液體約0.3 mL，再次測定樣本的上述項(xiàng)生化項(xiàng)目。其中，檢測數(shù)據(jù)根據(jù)稀釋倍數(shù)進(jìn)行校正。

觀察組禁食8～12 h后，由護(hù)士和醫(yī)療技術(shù)人員使用無菌技術(shù)采集靜脈血，樣本在-20 °C下冷凍24 h。24 h后，解凍并通過濾紙過濾。過濾后，測定18項(xiàng)生化項(xiàng)目，再取血清0.5 mL于小型離心管中，加入脂肪乳注射液10 μL，充分混勻，形成中高濃度脂血，震蕩混勻后靜置5 min，再按試劑說明書加入0.1 mL LipoClear試劑，震蕩混勻后靜置5 min，再次測定上述各生化項(xiàng)目。其中，檢測數(shù)據(jù)根據(jù)稀釋倍數(shù)進(jìn)行校正。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用梯形法計(jì)算AUC和dAUC TAG，使用SAS統(tǒng)計(jì)軟件（Windows版本8.2，SAS Institute Inc）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)表示為（±s），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并根據(jù)公式計(jì)算兩組樣本處理前后生化檢查結(jié)果的偏差。

2 結(jié)果

對照組中，經(jīng)過干擾后樣本生化檢測結(jié)果中的P、TP和TG發(fā)生明顯偏差，其余項(xiàng)目結(jié)果在偏差允許范圍內(nèi)，推測偏差是由隨機(jī)誤差引起，能夠在一定程度上反映患者的血液生化水平；觀察組中，經(jīng)過干擾后樣本生化檢測結(jié)果均未發(fā)生偏差，能夠有效地反映患者的血液生化水平。見表1。

表1 兩組樣本干擾前后各生化項(xiàng)目檢測結(jié)果表對比（±s）

表1 兩組樣本干擾前后各生化項(xiàng)目檢測結(jié)果表對比（±s）

3 討論

眾所周知，臨床生化檢測分析是評(píng)估人體內(nèi)分泌功能的重要方法[7]。隨著可以消除特定基因產(chǎn)物功能技術(shù)的出現(xiàn)，如RNA干擾或鋅指核酸酶誘變，隨著越來越多的小分子抑制劑的發(fā)展，臨床生化檢測比以往任何時(shí)候都更為重要，可以使用已有的生化方法為分泌途徑提供可能性[8]。因此，臨床生化檢測分析對于全面剖析哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌運(yùn)輸?shù)臋C(jī)制非常重要。如生化檢測中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）通常是識(shí)別肝細(xì)胞損傷存在的最有用的酶。ALT存在于許多組織中，但其最大活性是在肝臟中。該酶主要存在于細(xì)胞溶質(zhì)中，在線粒體中也發(fā)現(xiàn)了同工酶（ALT2），并且主要存在于肝臟的門靜脈區(qū)，其肝細(xì)胞濃度高達(dá)血清中的10 000倍[9-13]。ALT在糖異生和氨基酸代謝中起主要作用。血清活性升高的幅度與受影響的肝細(xì)胞數(shù)量成正比，其顯著升高將反映不可逆的細(xì)胞損傷和壞死，而輕度升高可能主要表明膜起泡和可逆的細(xì)胞損傷。

在實(shí)踐中，溶血、黃疸和脂血等都可能對生化檢測結(jié)果的正確性造成影響，進(jìn)而影響生化檢測對患者真實(shí)情況的反映[14]。尤其是脂血，多種因素可導(dǎo)致樣品脂血癥。脂血癥最常見的干擾原因是在采血前沒有禁食。另一個(gè)主要原因是高三酰甘油血癥，由原發(fā)性疾?。ㄈ鏔redrickson Ⅰ、Ⅳ或Ⅴ型高脂血癥）或繼發(fā)原因引起。高三酰甘油血癥的常見繼發(fā)性原因包括糖尿病、酗酒、腎病、非酒精性脂肪肝、艾滋病毒感染和藥物治療。一些靜脈輸液通過含有脂質(zhì)乳劑可直接引起脂血癥，或者用于腸外營養(yǎng)。作為某些藥物中毒的解毒劑（如局部麻醉劑），或作為水溶性差藥物的稀釋劑（如懸浮在Intralipid中的丙泊酚注射液），最近接受靜脈內(nèi)脂質(zhì)乳劑治療患者的血液采集可能會(huì)導(dǎo)致血脂異常高的樣本。而在臨床生化檢測中，脂血造成光散射和吸收、體積消耗（水相減少）和物理化學(xué)干擾，因此務(wù)必要在血液樣本中去除脂血，以便于確保生活檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[15-16]。

實(shí)際上，有多種方法可以評(píng)估實(shí)驗(yàn)室樣本中的脂血癥。最簡單的是對試樣進(jìn)行目視檢查；然而，這種類型的評(píng)估存在顯著不準(zhǔn)確性和個(gè)體差異[17]。血清或血漿中三酰甘油的測量也可以粗略評(píng)估脂血癥的程度，但渾濁程度與三酰甘油濃度的相關(guān)性并不好，具有復(fù)雜的非線性關(guān)系。許多臨床化學(xué)平臺(tái)能夠確定血脂指數(shù)，對于血脂指數(shù)的自動(dòng)檢測，患者樣本在鹽水或緩沖液中進(jìn)行稀釋，然后測量特定波長。如Roche Diagnostics cobas分析儀使用660/700 nm，Beckman Coulter化學(xué)分析儀使用660/800 nm。此外，真空超速離心、高速離心、PEG沉淀、乙醚處理等方法，都能夠有效去除脂血。如使用離心分析儀（Cobas-Mira，Roche，Basel，Switzerland）通過酶比色法分析血樣的TAG、FA、甘油和葡萄糖等。通過減去甘油值來校正TAG值。然而這些方法或操作復(fù)雜、或成本較高、或準(zhǔn)確率較低，或多或少都存在著一定缺點(diǎn)，如脂血指數(shù)方面缺乏標(biāo)準(zhǔn)化，以及由于樣品渾濁而不是由脂質(zhì)積累引起的假陽性等[18]。

目前國外報(bào)道中，一種市售的非離子聚合物L(fēng)ipoClear?已廣泛用于世界各地的臨床生化檢驗(yàn)，用于消除脂血對常規(guī)生化項(xiàng)目的干擾。根據(jù)制造商的聲明，LipoClear?不能用于測定單克隆丙種球蛋白病免疫球蛋白、蛋白質(zhì)、磷或電解質(zhì)。由于制造商的數(shù)據(jù)可能與在臨床生化檢驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)不同，正如Nikolac及其同事最近的一項(xiàng)研究所示，因此在臨床生化檢驗(yàn)環(huán)境中使用用于特定的臨床生化檢驗(yàn)。令人驚訝的是，對當(dāng)前文獻(xiàn)的回顧顯示，只有少數(shù)研究評(píng)估了不同去脂方法對臨床生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響。

鑒于此，本次研究重點(diǎn)在于評(píng)估和比較高速離心法和LipoClear脂質(zhì)清除劑對臨床生化檢驗(yàn)中消除脂血對常用指標(biāo)干擾的效果。本次研究采用受試者內(nèi)設(shè)計(jì)，每個(gè)參與者都作為自己的對照。研究以隨機(jī)順序安排，并以至少1周的清除期分開。隔夜禁食8～12 h后，早上將特氟龍導(dǎo)管插入肘前靜脈，并要求受試者在試驗(yàn)期間保持半臥位。結(jié)果顯示，對照組中經(jīng)過干擾后樣本生化檢測結(jié)果中的P、TP和TG發(fā)生明顯偏差，其余項(xiàng)目結(jié)果在偏差允許范圍內(nèi)，推測偏差是由隨機(jī)誤差引起，能夠在一定程度上反映患者的血液生化水平；觀察組中，經(jīng)過干擾后樣本生化檢測結(jié)果全未發(fā)生偏差，能夠有效地反映患者的血液生化水平。

綜上所述，本次研究在一定程度上表明LipoClear脂質(zhì)清除劑對臨床生化檢驗(yàn)中消除脂血對常用指標(biāo)干擾的效果更好，臨床接受更高，且操作更為簡單，值得臨床推廣。