• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    UV-B輻射和施氮對滿江紅生長、礦質(zhì)營養(yǎng)和抗氧化生理的影響

    2022-05-25 05:23:04楊競張光群李明銳湛方棟李元祖艷群何永美
    關(guān)鍵詞:滿江紅類黃酮總酚

    楊競,張光群,李明銳,湛方棟,李元,祖艷群,何永美

    (云南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院,昆明 650201)

    臭氧衰減導(dǎo)致的地表UV-B 輻射(280~315 nm)增強(qiáng)是當(dāng)今重大的全球氣候變化問題之一[1]。UV-B輻射作為重要的環(huán)境因子之一,會(huì)誘導(dǎo)植物產(chǎn)生大量活性氧自由基(ROS),顯著降低植物葉片光合色素含量、改變植株礦質(zhì)營養(yǎng)含量、抑制抗氧化酶活性、阻礙抗氧化物質(zhì)合成、導(dǎo)致植株生物量下降[2]。在一定范圍內(nèi),植物啟動(dòng)自身的防御機(jī)制,通過提高超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、谷胱甘肽還原酶(GR)等抗氧化酶活性[3]、增加酚類、類黃酮等抗氧化物質(zhì)含量來提高植物抗性[4],以緩解UV-B的損傷[5-6]。氮素是植物生長發(fā)育的主要限制因子,施氮可提高植物抗性,也可改變植物對UV-B 輻射增強(qiáng)的響應(yīng)[7-8]。因此,研究UV-B 輻射和施氮對植物的影響顯得尤為重要,目前的研究主要集中在谷子、白菜、菠菜、藻類[9-10]等,對固氮植物滿江紅的相關(guān)研究報(bào)道較少。

    滿江紅(Azolla imbricata)是蕨藻共生體,其生物量大、固氮量高,作為生物綠肥被廣泛使用[11]。滿江紅體內(nèi)的固氮藍(lán)細(xì)菌(Cyanobacterium)通過固氮酶將氮?dú)廪D(zhuǎn)化為可被利用的氨,供植物生長發(fā)育,植物固氮酶極易被氧化,其活性直接決定著滿江紅的供氮能力[12-13],顯著影響滿江紅參與稻田氮循環(huán)[14]。云南元陽梯田紫外輻射背景值高,梯田不施加化肥,依靠滿江紅等還田維持稻田氮循環(huán)[15],這為研究UV-B 輻射和氮素復(fù)合作用的影響提供上佳的試驗(yàn)材料。因此,以元陽梯田稻田滿江紅為研究材料,UV-B 輻射和氮素作為影響因素,在項(xiàng)目組前期研究的基礎(chǔ)上,基于元陽梯田的地域特點(diǎn),研究UV-B 輻射和施氮單獨(dú)及復(fù)合作用對滿江紅生長、礦質(zhì)營養(yǎng)和抗氧化生理的影響,為認(rèn)識(shí)元陽梯田滿江紅對UV-B 輻射與氮素養(yǎng)分的生理響應(yīng)特征提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    選取云南元陽梯田水稻生長期(5—6 月)自然漂浮生長的滿江紅植株,帶回試驗(yàn)室用蒸餾水沖洗數(shù)次,去除表面多余泥土和雜質(zhì),備用。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    光源設(shè)置:5.0 kJ·m-2UV-B 輻射強(qiáng)度,采用李元等[16]建立的方法在試驗(yàn)小區(qū)水面垂直距離40 cm處懸掛UV-B 燈管(光譜為280~315 nm),燈管長1.2 m,間距30 cm。自然光對照組只懸掛燈架不供應(yīng)燈管。光源和培養(yǎng)液設(shè)置見表1,其中氮含量0 g·L-1的處理采用無氮霍格蘭營養(yǎng)液[17],氮含量0.06 g·L-1的處理采用30%霍格蘭營養(yǎng)液[18]。

    表1 試驗(yàn)處理Table 1 Experiment settings

    將備用滿江紅隨機(jī)接種至矩形塑料培養(yǎng)盆(31 cm×24 cm×11 cm)中連續(xù)水培18 d,接種量為水面面積的1/10,約3.0 g,每3 d 定量添加100 mL 蒸餾水補(bǔ)充蒸發(fā)量,共4 組處理,每組處理5 個(gè)重復(fù),共20 個(gè)小區(qū)。UV-B輻照時(shí)間為9:30—17:30(光暗周期為8 h∶16 h),大棚培養(yǎng)溫度(24±4)℃,相對濕度50%~70%。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,在第12 天時(shí),CK 處理滿江紅長滿試驗(yàn)小區(qū)水面,因此,統(tǒng)一將采樣時(shí)間定為第12天。

    1.3 生物量測定及生長系數(shù)計(jì)算

    采用鮮質(zhì)量稱量法,每3 d 取出全萍過40 目篩,用紙吸干表面水分后稱取鮮質(zhì)量,稱完后放回。按照公式(1)計(jì)算生長系數(shù)(K)[19]:

    式中:W0是初始放萍量,g;W是實(shí)際萍體的鮮質(zhì)量,g;t為間隔天數(shù),d。

    1.4 植株礦質(zhì)營養(yǎng)元素測定

    培養(yǎng)12 d 時(shí)取樣,于105 ℃殺青30 min,70 ℃烘干24 h至恒質(zhì)量。采用凱氏定氮法測定總氮含量,鉬銻抗比色法測定全磷含量,火焰原子吸收分光光度法測定總鈣、總鎂含量[20]。

    1.5 光合色素的測定

    取鮮萍2 g 去根洗凈,加入95%乙醇5 mL,冰浴研磨至勻漿,轉(zhuǎn)移至離心管。于轉(zhuǎn)速20 000 r·min-1離心10 min。取上清液在分光光度計(jì)波長665、649 nm 和470 nm 處測定吸光度。參照文獻(xiàn)[20]計(jì)算葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的含量。

    1.6 抗氧化物質(zhì)和酶的測定

    取鮮萍2 g 加入2 mL 的PBS 提取緩沖液[0.04 mol·L-1Na2HPO4,0.06 mol·L-1NaH2PO4,0.1%(V/V)Triton X-100,1 mol·L-1NaCl,10 g·L-1PVPP,pH:7.0],在冰浴中研磨成勻漿。將勻漿移入離心管,另加1 mL的提取緩沖液,清洗研缽后也并入離心管中,混勻后于8 000 r·min-1離心15 min。取上清液置于分光光度計(jì)測定過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽還原酶(GR)、過氧化氫酶(CAT)、抗壞血酸(AsA)吸光度,具體波長和計(jì)算公式參照南京建成生物工程研究所SOD、POD、MDA、CAT 和總抗氧化能力(FRAP 法)測定試劑盒說明書。

    取鮮萍1 g,在冰浴中研磨成勻漿,加入含1%鹽酸的甲醇溶液,提取24 h,取0.5 mL提取液,用蒸餾水定容至25 mL,在紫外分光光度計(jì)280、325 nm 處測定吸光度,計(jì)算總酚含量,在305 nm 處測定吸光度,計(jì)算類黃酮含量[21]。

    1.7 統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)來表示,用SPSS 12.0 統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素方差分析和最小顯著差法(LSD)顯著性檢驗(yàn),顯著性水平α=0.05。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 UV-B輻射和施氮對滿江紅生長的影響

    由圖1 可知,以3 g 的初始放萍量記錄連續(xù)水培18 d 的生長系數(shù)的變化。UV-B輻射和N處理導(dǎo)致滿江紅的生長速率在1~18 d 內(nèi)均低于CK,在培養(yǎng)6 d 時(shí)生長系數(shù)最高,9 d 時(shí)和12 d 時(shí)生長速率無顯著差異,18 d 時(shí)生長速率最低。CK 處理的滿江紅平均生長系數(shù)為0.102,UV-B+N、UV-B和N處理的平均生長系數(shù)低于CK 處理,分別為0.085、0.082 和0.080。UV-B+N、UV-B、N處理在各時(shí)期的K值均顯著低于CK處理,UV-B+N、UV-B 和N 處理在各時(shí)期K值無顯著差異。雙因素分析表明,UV-B輻射處理、N處理對滿江紅生長系數(shù)有極顯著影響,且兩者存在交互作用。

    圖1 UV-B輻射和施氮對滿江紅生長系數(shù)(K)的影響Figure 1 Effects of UV-B radiation and nitrogen application on growth coefficient(K)of Azolla

    由圖2 可知,以3 g 的初始放萍量記錄連續(xù)水培18 d的生物量變化。UV-B+N 處理、UV-B 輻射處理、N 處理在培養(yǎng)18 d 時(shí)滿江紅生物量均顯著低于CK,UV-B+N 處理在培養(yǎng)9、12、15、18 d時(shí)生物量下降,降幅分別為10.6%、16.8%、22.6%、34.8%。UV-B 處理在9、12、15、18 d 時(shí)生物量下降,降幅分別為19.8%、26.7%、27.7%、36.1%。N處理在9、12、15、18 d時(shí)生物量下降,降幅分別為19.8%、18.4%、21.3%、30.0%。四組處理均在培養(yǎng)12 d 時(shí)生物量最高。UV-B+N、UVB、N 處理在3~18 d 的生物量均顯著低于CK 處理,UV-B+N、UV-B 和N 處理在各時(shí)期生物量無顯著差異。雙因素分析表明,UV-B輻射處理、N處理對滿江紅生物量有極顯著影響,且兩者存在交互作用。

    圖2 UV-B輻射和施氮對滿江紅生物量的影響Figure 2 Effects of UV-B radiation and nitrogen application on biomass of Azolla

    2.2 UV-B 輻射和施氮對滿江紅礦質(zhì)營養(yǎng)元素含量的影響

    與CK 相比,UV-B+N、UV-B、N 處理均顯著增加了滿江紅N 含量,增幅分別為156.8%、136.1%、33.7%;UV-B+N 處理和N 處理顯著降低滿江紅的P、Mg、Ca 含量,降幅分別為20.8%、38.5%、37.1% 和4.2%、36.0%、37.5%。雙因素分析表明,UV-B、N處理對滿江紅N、Mg、Ca 含量有極顯著影響,且兩者存在交互作用。UV-B 處理對K 含量沒有顯著影響,三組處理均對滿江紅N含量影響顯著,且有交互作用。可知UV-B+N、UV-B 輻射、N 處理均使?jié)M江紅的N 含量增加,Mg、Ca含量減少(表2)。

    表2 UV-B輻射和施氮對滿江紅礦質(zhì)營養(yǎng)元素含量的影響(mg·g-1)Table 2 Effects of UV-B radiation and nitrogen application on the content of nutrients of Azolla(mg·g-1)

    2.3 UV-B輻射和施氮對滿江紅光合色素含量的影響

    與CK 相比,UV-B+N 處理顯著降低了葉綠素a、類胡蘿卜素含量,降幅分別為21.9%、43.6%。UV-B處理顯著降低了葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素含量,降幅分別為21.1%、37.3%、41.0%。N處理顯著降低了類胡蘿卜素含量,降幅為41.0%。UV-B輻射條件下葉綠素b含量的降幅大于葉綠素a的降幅。雙因素方差分析表明,UV-B 處理、N 處理對葉綠素a 和類胡蘿卜素含量有極顯著影響,且具有交互作用(表3)。

    表3 UV-B輻射和施氮對滿江紅光合色素含量的影響(mg·g-1)Table 3 Effects of UV-B radiation and nitrogen application on photosynthetic pigment content of Azolla(mg·g-1)

    2.4 UV-B輻射和施氮對滿江紅抗氧化物質(zhì)含量的影響

    與CK 相比,UV-B+N 處理顯著增加了總酚的含量,增幅為160.2%。UV-B 輻射使?jié)M江紅總酚和MDA 含量顯著增加86.7%、69.5%,使AsA、類黃酮含量顯著降低16.6%、57.8%。N 處理顯著增加了AsA含量,增幅為14.7%。雙因素方差分析表明,UV-B 處理和N 處理對MDA、AsA、類黃酮含量有顯著影響,且對總酚、類黃酮含量的影響具有交互作用。三組處理均導(dǎo)致MDA含量顯著增加(表4)。

    表4 UV-B輻射和施氮對滿江紅丙二醛與抗氧化物質(zhì)含量的影響Table 4 Effects of UV-B radiation and nitrogen application on MDA and oxidation product content of Azolla

    2.5 UV-B輻射和施氮對滿江紅抗氧化酶的影響

    與CK 相比,UV-B+N、UV-B 輻射、N 處理均顯著增加SOD 活性,增幅為164.7%、189.3%、185.0%。POD 活性顯著降低,降幅分別為8.17%、30.1%、29.4%,使GR 活性顯著增加85.9%、69.5%、53.2%,對CAT 活性無顯著影響。UV-B 輻射處理的總抗氧化能力是CK 的3 倍,N 處理使?jié)M江紅總抗氧化能力顯著提升82.1%。雙因素方差分析表明,UV-B 處理和N 處理對總抗氧化能力和SOD、POD、GR 活性有顯著影響,且具有交互作用(表5)。

    表5 UV-B輻射和施氮對滿江紅抗氧化酶的影響Table 5 Effects of UV-B radiation and nitrogen application on antioxidant enzymes of Azolla

    2.6 相關(guān)性分析

    相關(guān)性分析結(jié)果(表6)顯示,UV-B 輻射和N 處理的滿江紅生物量與類胡蘿卜素、類黃酮含量呈顯著正相關(guān),與總氮、總酚含量呈極顯著負(fù)相關(guān),與MDA含量呈顯著負(fù)相關(guān)。滿江紅總氮含量與AsA 含量呈極顯著負(fù)相關(guān),與類黃酮含量呈顯著負(fù)相關(guān),與MDA、總酚含量呈極顯著正相關(guān)。滿江紅總抗氧化能力與AsA含量呈顯著負(fù)相關(guān),與總酚含量呈極顯著正相關(guān)。

    表6 滿江紅生物量、總氮含量與抗氧化物質(zhì)及光合色素含量的相關(guān)性分析Table 6 Correlation between biomass,total nitrogen,oxidation products and photosynthetic pigment of Azolla

    3 討論

    3.1 滿江紅生長對UV-B輻射響應(yīng)的機(jī)理

    生物量是所有生理、生化和生長因子的長期積累響應(yīng)[2]。UV-B輻射抑制植物的生長發(fā)育及生物量[22]。本研究中,UV-B 輻射(5.0 kJ·m-2)處理使?jié)M江紅的生長速率和生物量都低于對照組,在培養(yǎng)6~12 d 生長速率呈負(fù)增長,生長系數(shù)下降,表明UV-B 輻射縮短了滿江紅的生長周期,這與PRASAD 等[23]的研究結(jié)果一致。N 處理導(dǎo)致滿江紅磷、鉀含量顯著減少,而UV-B 輻射處理與CK 無顯著差異,可能施氮會(huì)對滿江紅磷脂、磷酸合成和滲透壓調(diào)節(jié)過程造成不利影響[24],這與試驗(yàn)中觀察到的滿江紅變黃和葉片萎縮的現(xiàn)象一致。UV-B+N、UV-B、N處理均導(dǎo)致滿江紅鈣、鎂含量顯著減少,這可能是滿江紅的應(yīng)激反應(yīng),不利于滿江紅葉綠素的合成。UV-B+N、UV-B、N 處理均導(dǎo)致氮含量顯著增加,該結(jié)果與大多數(shù)研究不同,滿江紅氮含量與根部吸收作用和生物固氮作用有直接關(guān)系,是由于UV-B 輻射和施氮促進(jìn)了滿江紅的氮吸收或固氮作用,這與滿江紅品種以及施氮量和時(shí)間有關(guān)。根部吸收和生物固氮過程與滿江紅氮代謝過程有關(guān)。

    生長在不同氮濃度條件下的植物葉片光合作用對UV-B 輻射的響應(yīng)程度不同[25],本試驗(yàn)中UV-B、UV-B+N 處理顯著減少滿江紅光合色素含量,N 處理下光合色素含量無顯著變化,葉綠素a/b發(fā)生變化,使葉綠體的膜發(fā)生氧化作用,破壞葉綠體的膜結(jié)構(gòu)[26]。本試驗(yàn)中施氮未能緩解這些損傷,這可能與滿江紅生育期和UV-B 輻射強(qiáng)度有關(guān)。綜上,UV-B 輻射導(dǎo)致滿江紅礦質(zhì)營養(yǎng)元素含量的變化,使?jié)M江紅基礎(chǔ)生理代謝受阻[27],同時(shí)光合作用可能受到抑制,施氮未能緩解UV-B 輻射給植物帶來的損傷,最終導(dǎo)致生物量下降。

    3.2 滿江紅抗氧化代謝對UV-B輻射響應(yīng)的機(jī)理

    UV-B 輻射對滿江紅最重要的影響是誘導(dǎo)其產(chǎn)生過量活性氧(ROS)進(jìn)而損傷質(zhì)膜。同時(shí),UV-B 輻射也會(huì)激活植物體內(nèi)的兩類抗氧化機(jī)制[28]:一種是抗壞血酸(AsA)、類胡蘿卜素、酮類、酚類等抗氧化物質(zhì)的非酶促反應(yīng),另一種是SOD、CAT、POD 和GR 的酶促反應(yīng)。這些抗氧化酶和物質(zhì)相互協(xié)調(diào)、相互作用,以緩解UV-B輻射給植物帶來的損傷[29]。

    MDA 是植物過氧化的最終產(chǎn)物之一,它間接反映了生物膜受損傷程度。本研究發(fā)現(xiàn),與CK 相比,UV-B+N、UV-B、N 處理的MDA 含量均顯著上升,且與生物量呈顯著負(fù)相關(guān),與總氮含量呈極顯著正相關(guān),這與相關(guān)研究結(jié)果[30]一致,滿江紅生物量下降與質(zhì)膜受損程度有關(guān)。本研究中UV-B、UV-B+N 處理導(dǎo)致總酚含量顯著增加,這與大多數(shù)研究相同,是滿江紅抗性的表現(xiàn)。而N 處理導(dǎo)致AsA 含量顯著增加,AsA 與總氮、總抗氧化能力呈顯著負(fù)相關(guān),與生物量無顯著相關(guān)性,AsA 與谷胱甘肽(GSH)、GR 等物質(zhì)協(xié)同作用形成抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán),可以清除ROS,UV-B+N、UV-B、N 處理均導(dǎo)致GR 活性顯著增加,GR 能有效維持AsA-GSH 循環(huán),但這不僅需要GR,還需要GSH 底物合成[31]。AsA-GSH 循環(huán)過程較復(fù)雜,要解釋AsA 在N 處理下的含量增加還需進(jìn)一步對該循環(huán)的其他物質(zhì)和酶進(jìn)行研究。UV-B+N、UV-B、N 處理均顯著減少類黃酮的含量,類黃酮含量與生物量呈顯著正相關(guān),與總氮含量顯著負(fù)相關(guān),這可能是由于UV-B 輻射誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS 超出了滿江紅活性氧清除能力,對滿江紅葉片造成了進(jìn)一步損傷。

    SOD在氧化應(yīng)激防御中起核心作用,其作用是將O2-轉(zhuǎn)化為O2和H2O2,CAT 能催化H2O2,其轉(zhuǎn)化率高,UV-B 輻射對CAT 活性的影響取決于其強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間[32]。與其他類似研究相同[33],UV-B 輻射和施氮均導(dǎo)致滿江紅體內(nèi)SOD、GR 活性提高,SOD 活性的顯著增強(qiáng)可能會(huì)導(dǎo)致滿江紅O2-轉(zhuǎn)化為O2和H2O2的轉(zhuǎn)化率過高,部分H2O2可能會(huì)在體內(nèi)累積。與大多數(shù)研究不同,本研究中UV-B、N 處理的滿江紅POD 活性顯著下降,可能與滿江紅POD 對UV-B 輻射的敏感度有關(guān)[34]。一方面,UV-B 輻射激發(fā)了滿江紅的抗氧化代謝,使總酚含量顯著增加,且施氮增加AsA含量,一定程度提升了滿江紅抗氧化能力。另一方面,SOD活性的提高程度可能超過了POD、CAT 對H2O2的轉(zhuǎn)化率,導(dǎo)致H2O2累積并造成氧化損傷[35],同時(shí)MDA 含量的顯著上升也說明滿江紅受到了氧化損傷。

    綜上,UV-B 輻射引起了滿江紅的氧化應(yīng)激反應(yīng),H2O2、-OH 和O2可能在滿江紅體內(nèi)累積,UV-B+N處理對兩種抗氧化機(jī)制都有所激發(fā),總抗氧化能力顯著提高;UV-B 輻射提高滿江紅抗氧化酶活性;施氮增加AsA 含量,總抗氧化能力顯著增強(qiáng),植物抗性增強(qiáng);UV-B+N、UV-B、N處理可能均導(dǎo)致滿江紅質(zhì)膜不同程度的損傷,而滿江紅抗氧化物質(zhì)的含量增加利于其對生物量的累積,抗氧化酶活性的提高有利于其總抗氧化能力增強(qiáng)。滿江紅總氮含量與MDA 含量顯著正相關(guān),推測滿江紅的氮累積可能是由濃縮效應(yīng)造成的。UV-B 輻射增強(qiáng)和施氮對滿江紅抗氧化機(jī)制的影響較復(fù)雜,還需進(jìn)一步研究。

    4 結(jié)論

    (1)UV-B 輻射和施氮處理均顯著增加滿江紅氮含量,均顯著降低鈣、鎂含量,對鉀含量無顯著影響。UV-B 輻射和UV-B 輻射+施氮處理使葉綠素a 和類胡蘿卜素含量顯著下降。

    (2)UV-B輻射處理使?jié)M江紅MDA、總酚的含量增加,SOD、GR活性提高。施氮處理顯著增加AsA含量,UV-B 輻射、施氮處理均使?jié)M江紅總抗氧化能力顯著提升。

    (3)UV-B 輻射和施氮抑制滿江紅生長速率,降低其生物量,施氮未能緩解因氧化損傷造成的生長速率下降和生物量減少。

    猜你喜歡
    滿江紅類黃酮總酚
    滿江紅·賀新年
    凌云白毫總酚提取工藝優(yōu)化及抗氧化活性
    常吃柑橘 腦卒中降三成
    我國高類黃酮(紅皮與紅肉)蘋果育種取得突破性進(jìn)展
    中國果樹(2020年2期)2020-07-25 02:14:12
    植物類黃酮的化學(xué)生態(tài)學(xué)意義
    滿江紅·圓明園
    滿江紅·圓明園
    滿江紅·清福陵
    α-淀粉酶對類黃酮抗氧化活性的影響
    食品界(2016年4期)2016-02-27 07:37:20
    丹參彌羅松酚的提取及總酚含量測定
    天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产高清视频在线播放一区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 嫩草影院精品99| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品 欧美亚洲| 波多野结衣巨乳人妻| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲黑人精品在线| 午夜久久久在线观看| 色播在线永久视频| 色哟哟哟哟哟哟| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产区一区二久久| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 亚洲国产看品久久| 免费搜索国产男女视频| 91麻豆av在线| 免费无遮挡裸体视频| 精品久久久久久,| 久久久久久国产a免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 伦理电影免费视频| www日本在线高清视频| 亚洲精品一区av在线观看| 深夜精品福利| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久久久久久久黄片| 视频在线观看一区二区三区| 国产片内射在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产又色又爽无遮挡免费看| 成人午夜高清在线视频 | 午夜a级毛片| 制服丝袜大香蕉在线| 一进一出抽搐动态| 久久精品国产综合久久久| 男人舔女人的私密视频| 成在线人永久免费视频| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 长腿黑丝高跟| 99久久国产精品久久久| 欧美乱码精品一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 天天添夜夜摸| 欧美成人免费av一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 午夜福利欧美成人| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 成人免费观看视频高清| 性欧美人与动物交配| 91九色精品人成在线观看| 午夜福利在线在线| 丝袜美腿诱惑在线| 校园春色视频在线观看| 手机成人av网站| 国产不卡一卡二| 69av精品久久久久久| 婷婷丁香在线五月| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲男人天堂网一区| 国产精华一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美又色又爽又黄视频| 国产成人精品无人区| 国产v大片淫在线免费观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美丝袜亚洲另类 | 窝窝影院91人妻| 日韩欧美 国产精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一本一本综合久久| 亚洲av成人一区二区三| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 91麻豆av在线| 国产精品免费视频内射| 亚洲第一青青草原| 99久久国产精品久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久精品国产清高在天天线| 可以在线观看的亚洲视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 好男人电影高清在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 成人av一区二区三区在线看| 日韩欧美免费精品| 久久伊人香网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 18禁国产床啪视频网站| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩国内少妇激情av| 久久亚洲精品不卡| 制服诱惑二区| 国产亚洲精品一区二区www| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 精品第一国产精品| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 俄罗斯特黄特色一大片| √禁漫天堂资源中文www| 久久国产精品影院| 国产精品二区激情视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 日韩大码丰满熟妇| 免费在线观看成人毛片| 高清在线国产一区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 久久久久九九精品影院| 久久久国产成人精品二区| 看片在线看免费视频| 亚洲一区中文字幕在线| 久久久久久人人人人人| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 91av网站免费观看| 日韩av在线大香蕉| 黄色片一级片一级黄色片| 级片在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | av天堂在线播放| 国产又色又爽无遮挡免费看| 俺也久久电影网| 国产99久久九九免费精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美成人性av电影在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久久久人人人人人| 18禁美女被吸乳视频| 国产av一区在线观看免费| 妹子高潮喷水视频| 两个人视频免费观看高清| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 此物有八面人人有两片| 最近最新免费中文字幕在线| 中文字幕高清在线视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 日韩三级视频一区二区三区| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜福利高清视频| 国产精品 国内视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 美女免费视频网站| 久久午夜亚洲精品久久| 天天一区二区日本电影三级| 免费高清视频大片| 亚洲avbb在线观看| 97碰自拍视频| 亚洲黑人精品在线| 9191精品国产免费久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 美女 人体艺术 gogo| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产激情久久老熟女| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 国产一区二区三区视频了| 露出奶头的视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 动漫黄色视频在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产精品久久电影中文字幕| 波多野结衣高清无吗| 久久亚洲真实| 99精品在免费线老司机午夜| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 色综合婷婷激情| 日韩欧美 国产精品| 国产精品,欧美在线| 亚洲人成77777在线视频| 午夜福利在线观看吧| 欧美一级毛片孕妇| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产熟女xx| 91字幕亚洲| 欧美黄色片欧美黄色片| av超薄肉色丝袜交足视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 麻豆一二三区av精品| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 日韩大码丰满熟妇| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 丝袜美腿诱惑在线| 天堂影院成人在线观看| 男人舔奶头视频| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲午夜理论影院| 亚洲成人国产一区在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 好男人在线观看高清免费视频 | 视频在线观看一区二区三区| 国产成+人综合+亚洲专区| 88av欧美| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 熟女电影av网| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费在线观看日本一区| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 午夜视频精品福利| 一本久久中文字幕| 美女国产高潮福利片在线看| 黄色视频,在线免费观看| 观看免费一级毛片| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 99久久国产精品久久久| 黄色 视频免费看| 欧美成人性av电影在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久久久久久久黄片| 国产精品 欧美亚洲| 欧美又色又爽又黄视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 51午夜福利影视在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产精品久久久久久精品电影 | 色综合亚洲欧美另类图片| 老司机午夜十八禁免费视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩大码丰满熟妇| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 丝袜美腿诱惑在线| 在线国产一区二区在线| 波多野结衣高清作品| 亚洲国产中文字幕在线视频| av中文乱码字幕在线| 国产精华一区二区三区| 久久国产精品影院| 男女视频在线观看网站免费 | 男女午夜视频在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品免费视频内射| 亚洲国产精品成人综合色| 人人妻人人看人人澡| 久久天堂一区二区三区四区| √禁漫天堂资源中文www| av中文乱码字幕在线| 1024手机看黄色片| 中文亚洲av片在线观看爽| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级毛片女人18水好多| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| xxxwww97欧美| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 桃红色精品国产亚洲av| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美激情高清一区二区三区| 色综合婷婷激情| 欧美黑人欧美精品刺激| 最近最新中文字幕大全电影3 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 这个男人来自地球电影免费观看| 婷婷精品国产亚洲av| 免费看美女性在线毛片视频| 在线观看舔阴道视频| 免费电影在线观看免费观看| 国产久久久一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美日韩福利视频一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 男人操女人黄网站| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 无限看片的www在线观看| 国产三级黄色录像| 久久青草综合色| 丰满的人妻完整版| 日本在线视频免费播放| 午夜a级毛片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久国产成人免费| 黄色成人免费大全| 天堂动漫精品| 午夜免费激情av| 男人舔女人下体高潮全视频| 俺也久久电影网| 99国产精品99久久久久| 午夜福利18| 制服丝袜大香蕉在线| 久久久国产成人精品二区| 美国免费a级毛片| 亚洲全国av大片| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产成人精品久久二区二区91| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| www.精华液| 久热爱精品视频在线9| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 午夜激情福利司机影院| 国产免费男女视频| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 欧美成人免费av一区二区三区| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 亚洲第一av免费看| 99久久综合精品五月天人人| 99re在线观看精品视频| 午夜福利成人在线免费观看| av欧美777| 狂野欧美激情性xxxx| 最好的美女福利视频网| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲全国av大片| 久久久国产成人免费| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 丝袜人妻中文字幕| 日本黄色视频三级网站网址| 久久性视频一级片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 免费看十八禁软件| 亚洲中文字幕日韩| 国产av又大| 一区二区三区激情视频| 久久九九热精品免费| 欧美成人午夜精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美成人午夜精品| 俺也久久电影网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 宅男免费午夜| 午夜久久久久精精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产久久久一区二区三区| 国产主播在线观看一区二区| 国产久久久一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲第一青青草原| 中文字幕久久专区| 亚洲无线在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一级片免费观看大全| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日韩欧美三级三区| 久久中文字幕人妻熟女| av有码第一页| av福利片在线| 岛国在线观看网站| 亚洲熟妇熟女久久| 性欧美人与动物交配| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久久久国产a免费观看| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产成人系列免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲第一av免费看| 最近最新免费中文字幕在线| 麻豆一二三区av精品| 亚洲片人在线观看| 国产av又大| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91字幕亚洲| 99久久无色码亚洲精品果冻| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲无线在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美精品亚洲一区二区| www.www免费av| 动漫黄色视频在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 人人妻人人澡欧美一区二区| 91麻豆av在线| 一进一出好大好爽视频| 一级毛片女人18水好多| 精品久久久久久久毛片微露脸| 9191精品国产免费久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费无遮挡裸体视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 色哟哟哟哟哟哟| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲自拍偷在线| 成人国语在线视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩视频一区二区在线观看| 不卡av一区二区三区| 满18在线观看网站| 一级黄色大片毛片| 麻豆国产av国片精品| 亚洲专区中文字幕在线| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产精品999在线| 成人三级做爰电影| 国产精品,欧美在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| av有码第一页| 搞女人的毛片| 视频在线观看一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产在线观看jvid| 日韩精品免费视频一区二区三区| www国产在线视频色| 搡老岳熟女国产| 国产久久久一区二区三区| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲精品av麻豆狂野| 成在线人永久免费视频| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩免费av在线播放| 国产区一区二久久| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人永久免费在线观看视频| 免费搜索国产男女视频| 黄色 视频免费看| 很黄的视频免费| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产高清videossex| 黄片小视频在线播放| 看片在线看免费视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 少妇 在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 村上凉子中文字幕在线| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 精品国产一区二区三区四区第35| 精品第一国产精品| 变态另类丝袜制服| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| www.www免费av| 欧美一区二区精品小视频在线| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费在线观看日本一区| 国产伦人伦偷精品视频| 久久香蕉精品热| bbb黄色大片| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲一区二区三区不卡视频| www.www免费av| 好男人电影高清在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产精品成人综合色| 999久久久精品免费观看国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩精品免费视频一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲中文字幕日韩| 免费在线观看亚洲国产| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 日本a在线网址| 动漫黄色视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 1024香蕉在线观看| 91在线观看av| 亚洲精品久久国产高清桃花| 97碰自拍视频| 成人18禁在线播放| 亚洲无线在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久国产成人免费| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久国产精品影院| 很黄的视频免费| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 女警被强在线播放| 久热这里只有精品99| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲av熟女| 免费在线观看影片大全网站| 国产单亲对白刺激| 亚洲久久久国产精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 级片在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日本一区二区免费在线视频| 草草在线视频免费看| 日日爽夜夜爽网站| 老鸭窝网址在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 日本三级黄在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 操出白浆在线播放| 日本 av在线| 麻豆一二三区av精品| 老鸭窝网址在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品1区2区在线观看.| 无人区码免费观看不卡| 色综合亚洲欧美另类图片| 9191精品国产免费久久| 黄片大片在线免费观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产成人av激情在线播放| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 少妇粗大呻吟视频| 欧美中文综合在线视频| 女性生殖器流出的白浆| 一二三四在线观看免费中文在| 国产成人av教育| 免费av毛片视频| 日韩欧美在线二视频| 国产主播在线观看一区二区| 一本精品99久久精品77| xxx96com| 亚洲激情在线av| 看免费av毛片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产成人精品无人区| 国产乱人伦免费视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日本三级黄在线观看| 亚洲片人在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 此物有八面人人有两片| 欧美成狂野欧美在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美日韩乱码在线| av免费在线观看网站| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久久久人人人人人| 少妇的丰满在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 丝袜人妻中文字幕| 欧美亚洲日本最大视频资源| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 高潮久久久久久久久久久不卡| 免费高清在线观看日韩| 色老头精品视频在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 少妇 在线观看| 欧美色视频一区免费| 午夜影院日韩av| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 窝窝影院91人妻| 国产亚洲精品久久久久5区| 午夜激情av网站| 两性夫妻黄色片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产视频内射| 一区福利在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品美女久久av网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 长腿黑丝高跟| 韩国av一区二区三区四区| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产av在哪里看| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 在线看三级毛片| 午夜影院日韩av| 日本一本二区三区精品| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草|