• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體對(duì)盆腔炎模型大鼠氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響

    2022-05-23 02:08:04羅娜孫蔚林寧靜李衛(wèi)平
    西部醫(yī)學(xué) 2022年5期
    關(guān)鍵詞:源性氧氟沙星氧化應(yīng)激

    羅娜 孫蔚林 寧靜 李衛(wèi)平

    (解放軍總醫(yī)院海南分院婦產(chǎn)科,海南 三亞 572013)

    盆腔炎(Plvic inflammatory disease,PID)[1]是指累及女性盆腔內(nèi)生殖器官及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜的炎癥性疾病。PID反復(fù)發(fā)作或遷延不愈,會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)疼痛不適、異位妊娠、不孕以及影響性生活等,對(duì)婦女的身心健康和生活造成嚴(yán)重影響。目前針對(duì)PID的內(nèi)科治療手段主要是運(yùn)用抗生素消除/緩解炎癥,以及物理療法來活血化瘀,緩解疼痛不適,促進(jìn)炎癥消退。但是仍存在長期效果欠佳,復(fù)發(fā)率高的缺點(diǎn)[2-3]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[4](Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs) 是一類具有自我更新能力的非造血干細(xì)胞。以往的研究表明[5-6],BMSCs有可能分化為間充質(zhì)或非間充質(zhì)細(xì)胞系,且具有向損傷部位遷移的能力,通過調(diào)節(jié)先天性和獲得性免疫細(xì)胞的增殖和功能,促進(jìn)傷口愈合和組織再生,抗炎和抑制免疫反應(yīng)。Exosomes是一類由細(xì)胞主動(dòng)分泌的,直徑在30 nm~150 nm的囊泡樣小體[7]。在正常和病理?xiàng)l件下,Exosomes通過穿梭蛋白質(zhì)、mRNA和microRNAs介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊有助于遺傳和生化信息在細(xì)胞間的傳遞。在腫瘤發(fā)生、炎癥免疫反應(yīng)等多個(gè)生理病理過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。有研究顯示[8-9],BMSCs能夠分泌豐富的Exosomes,在BMSCs與靶細(xì)胞之間交換蛋白質(zhì)和遺傳信息,發(fā)揮重要的介導(dǎo)作用。本研究通過構(gòu)建大鼠PID模型,并觀察BMSCs源性Exosomes對(duì)PID模型大鼠氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響,為臨床上治療PID提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑 清潔級(jí)雌性SD健康大鼠60只,質(zhì)量180~220 g,購于解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;左氧氟沙星片(可樂必妥)購于第一三共制藥(北京)有限公司;DMEM F12培養(yǎng)基、胎牛血清購于Gibco公司;ExoQuiekTC外泌體提取試劑盒購自美國SBI公司;TNF-α、CRP、IL-1β、IL-6 和IL-10 ELISA 試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司;大鼠SOD、MDA和T-AOC檢測(cè)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所; Centrifuge5424離心機(jī)購自Eppendorf公司;1-15K高速冷凍臺(tái)式離心機(jī)購自Sigma公司;CyFlow? Counter流式細(xì)胞儀購自德國Partec公司;MCO-15AC型CO2孵育箱購自日本SANYO公司;LH 750全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀購自美國貝克曼庫爾特;DYY-6C型電泳儀購自北京市六一儀器廠;IX-70型倒置顯微鏡購自日本Olympus公司;MultiImageTM凝膠成相系統(tǒng)購自Alpha Innotech公司;NanoDrop 1000超微量分光光度計(jì)購自美國Nanodrop公司。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

    1.2 方法

    1.2.1 BMSCs分離、培養(yǎng)和鑒定 ①BMSCs分離和培養(yǎng):采用貼壁法培養(yǎng)BMSCs、3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉實(shí)驗(yàn)SD大鼠,頸部脫臼處死大鼠, 75%乙醇浸泡10 min進(jìn)行消毒。無菌條件下截取實(shí)驗(yàn)SD大鼠的股骨和脛骨的骨骺末端,PBS溶液反復(fù)沖洗骨骺末端的骨髓腔,收集沖洗后PBS溶液。移液器反復(fù)吹打,篩網(wǎng)過濾,制作成單細(xì)胞懸液,以1500 r/min條件下離心10 min,棄去上清液。將細(xì)胞的密度調(diào)整為(1~3)×106/mL,接種至含LG-DMEM完全培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。在37℃、5% CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h后棄去培養(yǎng)液,去除掉非貼壁細(xì)胞。然后加入等量LG-DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)純化細(xì)胞,每3天更換一次LG-DMEM培養(yǎng)液。待細(xì)胞長至80%左右融合時(shí),0.25%胰蛋白酶,以1:3的比例傳代。取第3代生長良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。②BMSCs的鑒定:0.25%胰蛋白酶消化BMSCs,制作成細(xì)胞密度為1×106/ml的單細(xì)胞懸液。分別加入熒光直標(biāo)的CD44和CD90單克隆抗體?;旌途鶆蚝螅诎禇l件下孵育30 min,用PBS溶液洗滌3次,并為每組樣品設(shè)立單獨(dú)的陰性對(duì)照。采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)表面標(biāo)志物;成脂和成骨誘導(dǎo)分化檢測(cè)其分化能力。

    1.2.2 BMSCs源性Exosomes的提取和鑒定 BMSCs培養(yǎng)待細(xì)胞融合度達(dá)到90%后,更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h后,收集培養(yǎng)基上清液。4℃的條件下以300 g×10 min,2000 g×20 min離心去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片形成的沉淀。離心后取上清液置于新的EP管,每500 μL上清液加入ExoQuiekTC試劑50 μL;顛倒EP管約20次混合,置于4℃冰箱靜置約12 h。然后在4℃、3000 g條件下離心30 min,去除上清液,保留沉淀。使用移液槍取400 μL 1×PBS并反復(fù)均勻吹打離心沉淀物,該重懸液中富含Exosomes顆粒,將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL EP中。透射電子顯微鏡觀察提取的Exosomes形態(tài)。Western blot 檢測(cè)Exosomes標(biāo)志物表達(dá)。

    1.2.3 PID大鼠動(dòng)物模型建立及分組 所有實(shí)驗(yàn)大鼠在術(shù)前12 h開始禁止進(jìn)食,自由飲水,手術(shù)區(qū)域剃毛備皮。稱重大鼠后,3%戊巴比妥鈉50 mg/kg 腹腔內(nèi)注射麻醉。待麻醉起效后,橡皮筋固定大鼠于操作臺(tái)上。下腹部備皮常規(guī)消毒,取腹正中切口1.5~2 cm,開腹后暴露子宮。采用l mL注射器針頭進(jìn)針入子宮腔內(nèi)反復(fù)來回抽拉以造成子宮內(nèi)膜組織機(jī)械損傷。向輸卵管卵巢方向緩慢注射0.1 mL濃度為3×1012/L的混合細(xì)菌懸液(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌三者比例為2:1:1混勻)。隨手逐層縫合關(guān)腹,碘伏消毒術(shù)區(qū)。假手術(shù)組手術(shù)操作步驟僅為開腹和關(guān)腹,未對(duì)子宮腔進(jìn)行機(jī)械損傷以及注射混合細(xì)菌懸液。將40只PID模型大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為:模型組(單純構(gòu)建PID模型大鼠未給與任何特殊處理);治療組(構(gòu)建PID模型大鼠術(shù)后第3天開始腹腔注射100 μg/mL的Exosomes稀釋液1 mL,連續(xù)注射3天);左氧氟沙星組(構(gòu)建PID模型大鼠第3天開始60 mg/kg/天左氧氟沙星灌胃給藥,連續(xù)3天);對(duì)照組(構(gòu)建PID模型大鼠后腹腔注射相應(yīng)劑量生理鹽水)。另外設(shè)置空白組(正常飼養(yǎng)大鼠,不給予任何處理)和假手術(shù)組。每組10只。

    1.2.4 子宮組織蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin staining,HE )染色 取實(shí)驗(yàn)大鼠子宮組織用10%多聚甲醛溶液固定24 h,然后經(jīng)梯度脫水、常規(guī)石蠟包埋、切片(厚5 μm),HE染色后制作成病理切片。顯微鏡下觀察子宮組織病理學(xué)改變情況。

    1.2.5 外周血白細(xì)胞測(cè)定 3%戊巴比妥鈉50 mg/kg麻醉實(shí)驗(yàn)大鼠,開腹用10 mL注射器抽取下腔靜脈血約2 mL,采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定靜脈血中白細(xì)胞數(shù)量、種類、比例等。

    1.2.6 血清樣本采集 3%戊巴比妥鈉50 mg/kg麻醉實(shí)驗(yàn)大鼠,開腹用10 mL注射器抽取下腔靜脈血約8 mL置入微量離心管。室溫下靜置1 h,然后2000 rpm離心20 min,取上清置于新1.5 mL微量離心管。

    1.2.7 血清炎癥因子檢測(cè) 采用ELISA 試劑盒分別檢測(cè)大鼠血清中炎癥介質(zhì)TNF-α、CRP、IL-1β、IL-6 和IL-8的濃度水平。所有檢測(cè)均嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作。

    1.2.8 氧化應(yīng)激狀態(tài)評(píng)估 ①丙二醛(Malondialdehyde,MDA)檢測(cè):采用南京建成生物工程研究所的MDA檢測(cè)試劑盒,實(shí)驗(yàn)按照試劑盒使用說明步驟進(jìn)行操作。②超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性檢測(cè):采用南京建成生物工程研究所的SOD檢測(cè)試劑盒,實(shí)驗(yàn)按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作。③總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)檢測(cè):采用北京索萊寶科技有限公司的T-AOC檢測(cè)試劑盒,實(shí)驗(yàn)按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作。

    2 結(jié)果

    2.1 BMSCs的鑒定 光學(xué)顯微鏡下觀察,通過貼壁法獲取并的培養(yǎng)BMSCs細(xì)胞形態(tài)呈多邊形或不規(guī)則的梭形粘附生長,兩端具有長突起,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,見圖1A;流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示, BMSCs的重要標(biāo)志物CD44和CD90的表達(dá)陽性率均大于90%,見圖1B。

    圖1 大鼠BMSCs鑒定Figure 1 Identification of BMSCs in rats

    2.2 BMSCs源性Exosomes的鑒定 透射電鏡下觀察,提取到的Exosomes形態(tài)呈圓形或橢圓形,直徑在40~100 nm,具有較為完整包膜的小囊泡,見圖2A。Western blot檢測(cè)顯示其表達(dá)Exosomes特異性蛋白CD63和CD9,見圖2B。

    圖2 BMSCs源性Exosomes的鑒定Figure 2 Identification of exosomes derived from BMSCs

    2.3 大鼠子宮HE染色 空白組和假手術(shù)組大鼠子宮結(jié)構(gòu)正常,細(xì)胞排列規(guī)則,未見紅細(xì)胞和炎細(xì)胞浸潤。模型組和對(duì)照組大鼠子宮結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞排列不規(guī)則,腺體出現(xiàn)擴(kuò)張或結(jié)構(gòu)不清晰,可見紅細(xì)胞和炎細(xì)胞浸潤。治療組和左氧氟沙星組大鼠子宮結(jié)構(gòu)基本正常,細(xì)胞排列較規(guī)則,少許紅細(xì)胞和炎細(xì)胞浸潤,見圖3。

    圖3 子宮組織HE染色(200×)Figure 3 HE staining of uterine tissue

    2.4 大鼠外周血白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果 模型組大鼠外周血白細(xì)胞數(shù)、中心粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞較空白組均明顯升高(P<0.05)。治療組大鼠外周血白細(xì)胞數(shù)、中心粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞均較模型組出現(xiàn)降低,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療組大鼠除中心粒細(xì)胞數(shù)要高于左氧氟沙星組(P<0.05),其余外周血白細(xì)胞檢測(cè)指標(biāo)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表1。

    表1 各組大鼠外周血白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果Table 1 Detection results of peripheral blood leukocytes in rats of each group

    2.5 大鼠血清炎癥因子檢測(cè)結(jié)果 模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6和 IL-8的濃度水平值均較空白組明顯升高(P<0.05)。治療組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6和 IL-10的濃度水平值均較模型組出現(xiàn)降低,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);治療組大鼠除血清IL-1β濃度水平值高于左氧氟沙星組(P<0.05),其余炎癥因子血清濃度水平值相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表2。

    表2 各組大鼠血清炎癥因子檢測(cè)結(jié)果比較Table 2 Comparison of serum inflammatory factors in each group

    2.6 大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)評(píng)估結(jié)果 模型組大鼠SOD和T-AOC數(shù)值均較空白組明顯降低,而MDA數(shù)值則明顯升高(P<0.05)。治療組大鼠SOD和T-AOC數(shù)值均較模型組出現(xiàn)升高,而MDA數(shù)值則出現(xiàn)降低,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同左氧氟沙星組相比,治療組大鼠SOD、T-AOC和 MDA數(shù)值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表3。

    表3 各組大鼠氧化應(yīng)激檢測(cè)結(jié)果比較Table 3 Comparison of the test results of oxidative stress in rats of each group

    3 討論

    BMSCs是具有多向分化潛能和自我更新能力的多能干細(xì)胞。在合適的條件下,BMSCs可以被誘導(dǎo)分化為多種組織細(xì)胞。與其他干細(xì)胞不同,BMSCs在基因上更穩(wěn)定,在體外環(huán)境下存活時(shí)間更長,且BMSCs還具有免疫調(diào)節(jié)作用。因而BMSCs成為多種疾病干細(xì)胞治療的理想選擇,具有廣闊的臨床應(yīng)用前景[10]。BMSCs發(fā)揮治療效應(yīng)的機(jī)制非常復(fù)雜,目前已知的是,其除了能夠移植到受損器官上并進(jìn)行分化來發(fā)揮其治療作用,還可能通過以下方式來發(fā)揮其生物學(xué)作用[11-12]:①分泌可溶性因子(細(xì)胞因子、生長因子、激素)的旁分泌活性。②細(xì)胞與細(xì)胞相互作用,在細(xì)胞之間形成納米管隧道。③分泌含有蛋白質(zhì)和RNA的囊泡。Exosomes是大多數(shù)原核和真核細(xì)胞(包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等)釋放的納米級(jí)微泡(直徑30~100 nm),將其功能效應(yīng)物(如mRNAs、miRNAs和蛋白質(zhì)) 轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞以調(diào)節(jié)生理和病理過程。Exosomes是傳遞膜封閉信號(hào)分子和基因產(chǎn)物的關(guān)鍵載體,直接參與細(xì)胞間的信號(hào)傳遞,是機(jī)體旁分泌的重要組成部分[13]。BMSCs來源的Exosomes具有抗凋亡、免疫調(diào)節(jié)、抗炎和促血管生成的特性。Jun等[14]研究發(fā)現(xiàn),BMSC源性Exosomes能增強(qiáng)自噬相關(guān)蛋白LC3IIB和Beclin-1的表達(dá),促進(jìn)自噬體的形成,進(jìn)而抑制脊髓損傷大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡,促進(jìn)其功能行為恢復(fù)。Jiang等[15]通過體外研究發(fā)現(xiàn),BMSC源性Exosomes通過抑制TGF-TGF/Smad信號(hào)通路,能夠有效促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合。因此,Exosomes可能是BMSCs發(fā)揮其生物學(xué)效能的重要工具和途徑。

    PID的發(fā)病機(jī)制主要是由于免疫因素影響下病原體入侵感染,導(dǎo)致機(jī)體炎性介質(zhì)和自由基的異常分泌活化,進(jìn)而產(chǎn)生一系列病理生理改變。根據(jù)美國疾病控制和預(yù)防中心的指導(dǎo)方針[16],臨床使用抗生素是PID治療的首選。然而,大多數(shù)患者經(jīng)過長期治療后往往發(fā)生細(xì)菌耐藥性。因此,開發(fā)具有良好療效、低副作用的天然藥物對(duì)預(yù)防PID具有重要意義。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是PID的最主要的病理生理機(jī)制[17]。PID的發(fā)病過程中,機(jī)體活性氧(ROS)的過度產(chǎn)生導(dǎo)致氧化與抗氧化失衡而引起氧化應(yīng)激狀態(tài),最終導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷。氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)相輔相成,炎癥是白細(xì)胞對(duì)挑戰(zhàn)組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)的因素(包括氧化應(yīng)激引起的因素)的反應(yīng),過度的炎癥反應(yīng)會(huì)損傷組織細(xì)胞,導(dǎo)致大量氧自由基產(chǎn)生及NO的合成釋放下降[18]。ROS也被證實(shí)是多個(gè)炎癥信號(hào)通路的啟動(dòng)者和調(diào)節(jié)者,通過激活Nrf2、NF-κB、ASK1、AP-1、補(bǔ)體等炎癥信號(hào)通路,進(jìn)而增強(qiáng)炎癥應(yīng)答[19-20]。因此,有效對(duì)抗氧化應(yīng)激,改善炎癥反應(yīng)已成為PID治療領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。

    BMSCs來源的Exosomes在對(duì)抗氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)方面具有良好的生物學(xué)特性。Campbell等[21]研究發(fā)現(xiàn)在氧化應(yīng)激損傷后,BMSCs源性的Exosomes能顯著降低了心臟干細(xì)胞(Cardiac stem cells,CSCs)的凋亡率和ROS的產(chǎn)生。Zheng等[22]通過研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠后發(fā)現(xiàn),BMSCs源性的Exosomes通過傳遞上調(diào)miR-192-5p的表達(dá)來抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥反應(yīng)。因此,本次實(shí)驗(yàn)采用BMSCs來源的Exosomes來對(duì)PID模型大鼠進(jìn)行干預(yù)研究。我們采用全骨髓貼壁篩選培養(yǎng)法分離和純化大鼠骨髓組織中的 BMSCs,通過顯微鏡觀察和干細(xì)胞表型分析獲得的細(xì)胞是BMSCs。然后通過ExoQuick-TC法從大鼠BMSCs培養(yǎng)基上清中分離Exosomes。通過透射電鏡觀察其形態(tài)以及Western blot檢測(cè)其表達(dá)的外泌體特異性分子標(biāo)記,證實(shí)了為BMSCs源性Exosomes。隨后我們經(jīng)腹腔注射BMSCs源性Exosomes進(jìn)行干預(yù)。HE染色結(jié)果顯示,治療組大鼠子宮組織充血和炎癥細(xì)胞浸潤等病理變化與左氧氟沙星組大鼠相近,而較未經(jīng)任何干預(yù)的模型組有明顯改善。這一研究結(jié)果提示BMSCs源性Exosomes對(duì)于PID模型大鼠具有較好的治療作用,能夠改善子宮充血水腫和炎癥反應(yīng)。

    TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的檢測(cè)可作為臨床上判斷炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度的生物學(xué)指標(biāo)[23-24]。本研究中,PID模型大鼠存在明顯全身性炎癥反應(yīng),而子宮是PID過程中最容易受累的靶器官,因而也會(huì)導(dǎo)致子宮發(fā)生比較明顯的炎癥反應(yīng)。而治療組大鼠外周血炎癥細(xì)胞數(shù)量較未經(jīng)任何干預(yù)的模型組出現(xiàn)降低,且血清中相關(guān)炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6和 IL-8的表達(dá)也發(fā)生明顯降低。由于左氧氟沙星為廣譜抗生素,是目前治療PID的常用藥,具有良好的抗感染炎癥效能。同左氧氟沙星組相比,治療組大鼠除中心粒細(xì)胞數(shù)和血清IL-1β濃度水平值要高于左氧氟沙星組,其余外周血白細(xì)胞和血清炎癥因子比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這表明BMSCs源性Exosomes能有效減輕PID模型大鼠的全身性炎癥反應(yīng)。氧化應(yīng)激方面,SOD是清除氧自由基和抑制組織損傷的重要抗氧化酶,MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物,T-AOC代表抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平,這三者反映機(jī)體清除氧自由基的能力和氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷程度,是反映機(jī)體對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷能力的生物學(xué)指標(biāo)[25-26]。本研究中,PID大鼠SOD和T-AOC數(shù)值均較空白組明顯降低,而MDA數(shù)值則明顯升高,表明PID模型大鼠存在明顯的氧化應(yīng)激。而經(jīng)治療組大鼠SOD和T-AOC數(shù)值均較模型組升高, MDA數(shù)值則降低。提示BMSCs源性Exosomes能夠增強(qiáng)PID大鼠體內(nèi)的抗氧化能力,抑制ROS的過度產(chǎn)生,進(jìn)而降低機(jī)體的氧化應(yīng)激水平。

    4 結(jié)論

    本研究結(jié)果顯示,BMSCs源性Exosomes對(duì)PID模型大鼠具有較好的治療作用,其效能可能在于Exosomes能通過細(xì)胞間傳遞效應(yīng)物質(zhì)來抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)。然而,目前關(guān)于BMSCs源性Exosomes療效的證據(jù)是多種多樣的,其具體作用機(jī)制尚待明確,隨著對(duì)Exosomes功能和作用機(jī)制的不斷研究深入,將為臨床治療PID提供新的策略。

    猜你喜歡
    源性氧氟沙星氧化應(yīng)激
    基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對(duì)新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
    后溪穴治療脊柱源性疼痛的研究進(jìn)展
    氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
    雄激素源性禿發(fā)家系調(diào)查
    健康教育對(duì)治療空氣源性接觸性皮炎的干預(yù)作用
    左氧氟沙星致癲癇持續(xù)狀態(tài)1例
    氧化應(yīng)激與結(jié)直腸癌的關(guān)系
    鹽酸左氧氟沙星治療盆腔炎的療效觀察
    左氧氟沙星及莫西沙星引起神經(jīng)毒性1例
    椒蓮酊劑治療男子雄性激素源性禿發(fā)50例
    国产精品国产av在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 在线看a的网站| 欧美3d第一页| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 在线免费观看不下载黄p国产| 午夜日本视频在线| 国产免费又黄又爽又色| 国产片特级美女逼逼视频| 久久ye,这里只有精品| 久久免费观看电影| 精品酒店卫生间| av不卡在线播放| 亚洲国产精品一区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲精品国产成人久久av| 国产成人freesex在线| 老熟女久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产探花极品一区二区| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲四区av| 国产成人精品婷婷| 亚洲精品视频女| 18+在线观看网站| 免费黄色在线免费观看| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩欧美 国产精品| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲成人手机| 免费av中文字幕在线| 国产精品偷伦视频观看了| 国产在线免费精品| 国产日韩欧美在线精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产精品欧美亚洲77777| 少妇被粗大猛烈的视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 中国国产av一级| 精品一区二区免费观看| 日本wwww免费看| 国产有黄有色有爽视频| 秋霞伦理黄片| 久久狼人影院| 国产精品一区www在线观看| 国产精品免费大片| 国产精品福利在线免费观看| 国产成人精品福利久久| 秋霞伦理黄片| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 精品久久久噜噜| 水蜜桃什么品种好| 久久综合国产亚洲精品| 七月丁香在线播放| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 一个人免费看片子| 丝袜脚勾引网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 成人二区视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 久久久午夜欧美精品| 国产成人freesex在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费看av在线观看网站| av女优亚洲男人天堂| av卡一久久| 多毛熟女@视频| 极品人妻少妇av视频| av网站免费在线观看视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产高清三级在线| 免费看av在线观看网站| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲精品国产成人久久av| 最黄视频免费看| 大话2 男鬼变身卡| 欧美日本中文国产一区发布| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产高清有码在线观看视频| 桃花免费在线播放| 亚洲av中文av极速乱| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 搡老乐熟女国产| 黑人高潮一二区| 亚洲电影在线观看av| 秋霞伦理黄片| 欧美丝袜亚洲另类| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产男女内射视频| 久久国产乱子免费精品| 国产黄色免费在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 五月开心婷婷网| 久久这里有精品视频免费| 超碰97精品在线观看| 精品久久久精品久久久| 亚洲av男天堂| av福利片在线观看| 亚洲精品一二三| 99热全是精品| 国产片特级美女逼逼视频| 久久99热这里只频精品6学生| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av福利一区| 欧美bdsm另类| 亚洲天堂av无毛| 亚洲av国产av综合av卡| 中文欧美无线码| 国产黄色免费在线视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 黄色日韩在线| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 男女啪啪激烈高潮av片| 免费黄频网站在线观看国产| 久久99热6这里只有精品| 国产精品久久久久成人av| 亚洲国产精品一区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 精品一区二区三卡| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 久久久久久久精品精品| 精品一区二区免费观看| 99久久精品热视频| 少妇人妻 视频| a级毛片在线看网站| 在线天堂最新版资源| 伦理电影大哥的女人| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品456在线播放app| 少妇熟女欧美另类| 国产亚洲精品久久久com| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产亚洲欧美精品永久| 五月玫瑰六月丁香| 精品国产乱码久久久久久小说| 美女大奶头黄色视频| 中文天堂在线官网| 亚洲成人av在线免费| 亚洲无线观看免费| 免费少妇av软件| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 草草在线视频免费看| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 午夜精品国产一区二区电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 青春草国产在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 99热这里只有是精品50| 少妇的逼水好多| 性高湖久久久久久久久免费观看| 岛国毛片在线播放| 精品国产露脸久久av麻豆| 午夜福利网站1000一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 女性生殖器流出的白浆| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久久久成人| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 乱人伦中国视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产黄片视频在线免费观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩三级伦理在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日本vs欧美在线观看视频 | 校园人妻丝袜中文字幕| 18禁在线播放成人免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 天美传媒精品一区二区| 久久午夜福利片| 免费观看性生交大片5| 五月玫瑰六月丁香| 久久人人爽人人爽人人片va| 丰满人妻一区二区三区视频av| 成人毛片60女人毛片免费| 黑丝袜美女国产一区| 大陆偷拍与自拍| 久热久热在线精品观看| 韩国高清视频一区二区三区| 热re99久久精品国产66热6| 自线自在国产av| 黑人猛操日本美女一级片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 女人精品久久久久毛片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 色视频在线一区二区三区| 成人影院久久| 视频中文字幕在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品欧美亚洲77777| 欧美少妇被猛烈插入视频| 99久久精品热视频| 2022亚洲国产成人精品| 深夜a级毛片| 日本与韩国留学比较| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品三级大全| 成人国产av品久久久| 插阴视频在线观看视频| 搡老乐熟女国产| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产高清国产精品国产三级| 精品久久久久久久久av| 九色成人免费人妻av| 噜噜噜噜噜久久久久久91| av国产久精品久网站免费入址| 在线 av 中文字幕| 国产中年淑女户外野战色| 国产美女午夜福利| 久久99热6这里只有精品| 国产精品一二三区在线看| 如何舔出高潮| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 少妇高潮的动态图| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 日韩成人伦理影院| 交换朋友夫妻互换小说| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产高清国产精品国产三级| 久久久久网色| 亚洲av成人精品一区久久| 内射极品少妇av片p| 永久免费av网站大全| 亚洲欧洲国产日韩| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 在线观看国产h片| 亚洲人与动物交配视频| 乱人伦中国视频| 国产淫语在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | av在线播放精品| 简卡轻食公司| 日日啪夜夜爽| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 在线观看三级黄色| 视频中文字幕在线观看| 免费观看的影片在线观看| 久热久热在线精品观看| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 精品一区二区免费观看| 成人影院久久| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲av成人精品一区久久| 不卡视频在线观看欧美| 欧美精品一区二区大全| 久久99精品国语久久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 黑人猛操日本美女一级片| 观看美女的网站| 2021少妇久久久久久久久久久| 日本黄色片子视频| 精品久久久噜噜| 尾随美女入室| 国产熟女欧美一区二区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲av成人精品一二三区| 国产成人精品婷婷| 久久综合国产亚洲精品| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 亚洲国产精品一区三区| 美女内射精品一级片tv| 国产精品一区www在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 美女中出高潮动态图| 看十八女毛片水多多多| 中文欧美无线码| 我的女老师完整版在线观看| 91精品国产国语对白视频| 美女视频免费永久观看网站| 97超碰精品成人国产| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 26uuu在线亚洲综合色| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品一区www在线观看| 国产淫语在线视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 草草在线视频免费看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 少妇熟女欧美另类| 男女无遮挡免费网站观看| 免费观看在线日韩| 另类精品久久| 伦理电影大哥的女人| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲欧美精品自产自拍| 18禁在线播放成人免费| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 精品人妻偷拍中文字幕| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产亚洲最大av| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 18禁在线播放成人免费| 新久久久久国产一级毛片| 日韩人妻高清精品专区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成人综合一区亚洲| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品久久久久久久性| 国产黄色免费在线视频| 少妇熟女欧美另类| 只有这里有精品99| 免费看av在线观看网站| 日本色播在线视频| 亚洲av不卡在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 一级黄片播放器| 久久免费观看电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 能在线免费看毛片的网站| 大香蕉久久网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成年人免费黄色播放视频 | 黄色欧美视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲av成人精品一区久久| 一本色道久久久久久精品综合| av在线app专区| 亚洲美女视频黄频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 97超视频在线观看视频| 中文字幕久久专区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产成人精品一,二区| 女人精品久久久久毛片| 国产成人精品一,二区| 亚洲精品色激情综合| 丁香六月天网| 国产亚洲91精品色在线| 久久婷婷青草| 大片电影免费在线观看免费| 青春草视频在线免费观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲不卡免费看| 日韩伦理黄色片| 中文字幕亚洲精品专区| 99久久精品热视频| av在线老鸭窝| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久婷婷青草| 噜噜噜噜噜久久久久久91| kizo精华| 免费大片18禁| www.av在线官网国产| 久久6这里有精品| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲自偷自拍三级| 亚洲三级黄色毛片| 国产视频首页在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 免费大片18禁| 久久久久国产网址| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品一区二区在线观看99| 精品少妇内射三级| 亚洲av二区三区四区| 六月丁香七月| 亚洲成色77777| 成人无遮挡网站| 大香蕉久久网| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲国产欧美在线一区| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产亚洲一区二区精品| 日韩伦理黄色片| 乱人伦中国视频| 十分钟在线观看高清视频www | 99久久精品热视频| 国产日韩欧美在线精品| av一本久久久久| 亚洲性久久影院| av在线播放精品| 亚洲av二区三区四区| 午夜福利影视在线免费观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产乱来视频区| 亚洲天堂av无毛| 亚洲美女搞黄在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 精品视频人人做人人爽| 一级二级三级毛片免费看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产av国产精品国产| 国产黄片美女视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 免费看日本二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 99热这里只有是精品50| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 草草在线视频免费看| tube8黄色片| 精品久久国产蜜桃| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产精品久久久久久av不卡| 精品熟女少妇av免费看| 99热6这里只有精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲图色成人| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 十分钟在线观看高清视频www | 国产成人精品久久久久久| 国产成人aa在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 女人精品久久久久毛片| 成人午夜精彩视频在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品一区二区在线观看99| av不卡在线播放| 91久久精品电影网| 一级av片app| www.色视频.com| 日本欧美视频一区| av天堂久久9| 九草在线视频观看| 国内精品宾馆在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 成年av动漫网址| 国产精品人妻久久久影院| 国产av一区二区精品久久| 午夜免费鲁丝| 大陆偷拍与自拍| 简卡轻食公司| 一区在线观看完整版| av在线app专区| 国产精品三级大全| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲成人手机| 美女大奶头黄色视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 久热久热在线精品观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 精品视频人人做人人爽| 人人妻人人看人人澡| 校园人妻丝袜中文字幕| 日本免费在线观看一区| 国产乱来视频区| 人人妻人人澡人人看| 黄色欧美视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 三级经典国产精品| av不卡在线播放| 久久99精品国语久久久| 日日啪夜夜爽| 91久久精品国产一区二区三区| 岛国毛片在线播放| 久久久久网色| 婷婷色综合大香蕉| 国产色婷婷99| 国产黄片视频在线免费观看| 高清午夜精品一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产| av福利片在线| 精品一区二区三卡| 久久久久久久精品精品| 国产熟女欧美一区二区| 男人和女人高潮做爰伦理| 天堂中文最新版在线下载| 99久国产av精品国产电影| 国产在线免费精品| 全区人妻精品视频| 综合色丁香网| 伦精品一区二区三区| 日韩av免费高清视频| 国产精品不卡视频一区二区| 69精品国产乱码久久久| 三上悠亚av全集在线观看 | 亚洲欧美一区二区三区国产| 交换朋友夫妻互换小说| 韩国av在线不卡| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 精品酒店卫生间| 在线观看免费高清a一片| 国产熟女欧美一区二区| 老司机影院成人| 成人毛片a级毛片在线播放| 一级黄片播放器| 国产精品偷伦视频观看了| 国产69精品久久久久777片| 午夜av观看不卡| 国产精品久久久久久久久免| 看非洲黑人一级黄片| 久久精品国产亚洲av天美| 久久久久久伊人网av| 观看免费一级毛片| 国产亚洲91精品色在线| 久热这里只有精品99| 国产高清国产精品国产三级| 国产毛片在线视频| 国产黄片视频在线免费观看| 精品酒店卫生间| 最后的刺客免费高清国语| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品熟女久久久久浪| 天堂中文最新版在线下载| 久久久久网色| 日本与韩国留学比较| 99热这里只有精品一区| 一本色道久久久久久精品综合| 在线观看免费视频网站a站| 黑人猛操日本美女一级片| 蜜桃在线观看..| 久久久久久久精品精品| 久久久国产精品麻豆| 插阴视频在线观看视频| 国产免费福利视频在线观看| 国产成人aa在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品蜜桃在线观看| www.色视频.com| 国产色婷婷99| 国产高清国产精品国产三级| 十八禁网站网址无遮挡 | 成人亚洲欧美一区二区av| 春色校园在线视频观看| 伊人亚洲综合成人网| 性色av一级| 国内揄拍国产精品人妻在线| 丁香六月天网| 精品久久国产蜜桃| 高清视频免费观看一区二区| 在线观看免费高清a一片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| a 毛片基地| 国产精品成人在线| 免费黄网站久久成人精品| 日韩大片免费观看网站| 青春草视频在线免费观看| 高清av免费在线| 人人妻人人看人人澡| 嫩草影院新地址| 三级经典国产精品| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 久久久久网色| 2022亚洲国产成人精品| 欧美 日韩 精品 国产| 极品人妻少妇av视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 日韩强制内射视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 成人无遮挡网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产一级毛片在线| 极品人妻少妇av视频| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三| 好男人视频免费观看在线| 我的老师免费观看完整版| 99热全是精品| 日韩精品有码人妻一区| 日本欧美视频一区| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲成色77777| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一区二区三区精品91| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 黑人高潮一二区| 色5月婷婷丁香| 亚洲高清免费不卡视频| 国产永久视频网站| 观看免费一级毛片| 高清不卡的av网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲第一av免费看| 好男人视频免费观看在线|