玉竹中三種高異黃酮的顯微紅外光譜學(xué)研究

韓璐 徐濤

摘要：目的：建立一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高的鑒別方法，對(duì)玉竹中的高異黃酮成分進(jìn)行紅外光譜學(xué)研究。方法：采用提取、分離、純化工藝制備玉竹中高異黃酮類化合物，對(duì)獲得的三種高異黃酮化合物進(jìn)行顯微紅外光譜測(cè)定和分析。結(jié)果：得到顯微紅外譜圖信息，分析數(shù)據(jù)得到三種高異黃酮特征性信號(hào)峰及指紋性信號(hào)峰。結(jié)論：首次對(duì)玉竹中三種高異黃酮進(jìn)行顯微紅外光譜學(xué)研究，為今后玉竹中高異黃酮類成分的研究提供理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：玉竹;高異黃酮;顯微紅外光譜

【中圖分類號(hào)】 R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）09--01

玉竹為百合科多年生的草本植物[1]。玉竹中的高異黃酮類化合物，具有降血糖、降血脂、降血壓等作用[2]。高異黃酮類化合物主要存在于百合科植物中[3]，目前，研究人員發(fā)現(xiàn)高異黃酮類化合物具有多種生物活性，主要有抗腫瘤、抗癌作用;抗炎、抗菌、抗病毒作用;降血糖和膽固醇作用;對(duì)心血管系統(tǒng)的作用，如對(duì)血壓的影響，抑制血小板凝集的作用，對(duì)外周血管的影響等。

顯微紅外光譜法是將顯微鏡與傅里葉變換紅外光譜儀相結(jié)合的儀器，既是微區(qū)分析又是微量分析的一種現(xiàn)代的技術(shù)，與傳統(tǒng)的紅外光譜技術(shù)相比，優(yōu)點(diǎn)在于其靈敏度比較高，不需要加入任何的稀釋劑，可以反映其樣品的本質(zhì)光譜[4-6];制備方法簡(jiǎn)單，大多數(shù)的樣品無需制備，可以直接進(jìn)行檢測(cè);尤其是一些晶體，不需要壓片，可以保持原有的結(jié)構(gòu)，進(jìn)行無損傷檢驗(yàn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Nicolet iN10TM顯微紅外光譜儀（賽默飛世爾科技有限公司，美國）;電子天平（梅特勒公司，瑞士）;KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，中國）;N1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）等。

1.2 試藥

甲醇為色譜純;無水乙醇為分析純;乙酸乙酯為分析純;石油醚為分析純;玉竹藥材（河北安國市）等。

2 方法與結(jié)果

2.1 玉竹中高異黃酮的提取與制備

取玉竹藥材10kg，加4倍量的95%的乙醇回流提取2次，每次2h，過濾，將提取液合并。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，加適量蒸餾水進(jìn)行分散，充分震蕩后靜置。水分散溶液置于冷凍離心機(jī)4℃，9000r/min的條件下離心15分鐘，棄去上清液，取水不溶的部分于50℃烘干，加適量甲醇超聲溶解，過濾，續(xù)濾液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，近蒸干時(shí)轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿，蒸干得到浸膏，稱重，反復(fù)柱層析分離，制備液相色譜制備后，Sephadex-LH-20凝膠柱色譜純化，得到三種高異黃酮化合物。

2.2 三種高異黃酮的結(jié)構(gòu)鑒定

質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示化合物Ⅰ的準(zhǔn)分子離子峰m/z為345.1452[M+H]+，對(duì)其分子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，得到主要二級(jí)碎片為121.0692和較小碎片峰251.0924、223.0642、137.0609?；衔铫虻臏?zhǔn)分子離子峰m/z為331.1293[M+H]+，對(duì)其分子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，主要二級(jí)碎片為107.0508和225.0775?；衔铫蟮臏?zhǔn)分子離子峰m/z為315.1320[M+H]+，對(duì)其分子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，得到主要二級(jí)碎片為107.0509和209.0827。

經(jīng)ESI-MS、1H-NMR與13C-NMR譜分別鑒定化合物I～I(xiàn)II分別為3-（4’-甲氧基苯甲基）-5，7-二羥基-6-甲基-8-甲氧基-苯丙二氫吡喃-4-酮（C18H18O5）、3-（4’-羥基苯甲基）-5，7-二羥基-6，8-二甲基-苯丙二氫吡喃-4-酮（C19H20O6）、5，7-二羥基-6-甲氧基-8-甲基-3- （2’，4’-二羥基苯甲基）-苯丙二氫吡喃-4-酮（C18H18O6）。

2.3 三種高異黃酮單體的顯微紅外光譜研究

實(shí)驗(yàn)前，先將液氮加入顯微紅外光譜儀中，MTC檢測(cè)器進(jìn)行冷卻處理，開機(jī)預(yù)熱30分鐘，待儀器進(jìn)入穩(wěn)定工作狀態(tài)后，所制的樣品置于載物平臺(tái)，調(diào)整顯微鏡確定測(cè)試位點(diǎn)，在顯微紅外光譜儀上以分辨率4cm-1，掃描次數(shù)64次，MCT檢測(cè)器，背景掃描設(shè)定為樣品前掃描，掃描范圍400～4000cm-1的條件下進(jìn)行紅外光譜測(cè)定，結(jié)果如圖1、2。

通過對(duì)三種高異黃酮化合物顯微紅外光譜檢測(cè)，對(duì)比主要峰位可知，3400cm-1附近為分子內(nèi)-OH伸縮振動(dòng)峰，1630cm-1附近為-C=O伸縮振動(dòng)峰，1480 cm-1附近為苯環(huán)骨架伸縮振動(dòng)峰，三種高異黃酮主體母核基本一致，其它峰位見表1，不同峰位表明三種高異黃酮苯環(huán)上取代基不同，本實(shí)驗(yàn)首次建立三種高異黃酮化合物顯微IR光譜圖，為后續(xù)玉竹中高異黃酮及其它中藥中高異黃酮成分的光譜學(xué)研究提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]夏光輝.玉竹二氫高異黃酮分離與抗氧化活性研究[D].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2020.

[2]徐濤.玉竹中高異黃酮的TLC-SERS聯(lián)用技術(shù)研究（D）.佳木斯：佳木斯大學(xué)，2015.

[3]李海明，白虹，李巍，等.玉竹化學(xué)成分研究[J].食品與藥品，2010，1（3）：102-104.

[4]金櫻華，顧中怡，強(qiáng)音等.傅里葉變換顯微紅外光譜法鑒定多層復(fù)合薄膜成分[J].理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)），2016，02：219-221.

[5]張軒，胡超，閆妍等.顯微紅外反射光譜法快速鑒別珍珠粉真?zhèn)蝃J].光譜學(xué)與光譜分析，2014，09：2424-2428.

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作者簡(jiǎn)介：韓璐（1989年3月—），女，漢族，黑龍江省齊齊哈爾市人，本科學(xué)歷畢業(yè)，助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向，藥學(xué)。

通訊作者：徐濤（1988年7月—），男，漢族，黑龍江大慶市人，碩士研究生畢業(yè)，實(shí)驗(yàn)師，研究方向：藥物分析。