不同生長年限對三七主根中總皂苷及浸出物含量的影響

蔣騰川，王艷林，洪影雯，馮曉林，王海燕，李 婭，魏富剛，梁云飛

［1.廣西中恒創(chuàng)新醫(yī)藥研究有限公司，廣西 南寧 530000；2.文山苗鄉(xiāng)三七科技有限公司，云南 文山 663000；3.廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，廣西 梧州 543002］

三七來源于五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F. H. Chen 的干燥根和根莖，具有散瘀止血、消腫定痛的功效，是多種中藥制劑的主要藥物，包括注射用血栓通（凍干）、注射用血塞通（凍干）、血塞通軟膠囊、血栓通膠囊等，在心腦血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病等的治療中發(fā)揮著重要作用［1］?！吨腥A人民共和國藥典》中規(guī)定三七于秋季花開前采挖，但未明確三七的采收年限［2］。三七的主要有效成分為三七總皂苷，不同生長年限對三七總皂苷的含量有影響，目前大部分研究以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量作為HPLC 法測定的評價指標(biāo)［3-7］。有文獻報道三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Rd、Re、Rb1這5 種皂苷的含量約占三七總皂苷的80%［8］，且《中華人民共和國藥典》也以這5 種皂苷單體作為評價三七總皂苷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)。因此，本研究采用HPLC 法測定不同產(chǎn)地不同年限三七主根中三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Rd、Re、Rb15 種皂苷成分的含量，采用熱浸法測定三七主根中浸出物的含量，旨為選擇三七適宜的采收年限提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 儀器 XPE-204 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；HNY-500 型超聲波清洗機（廣州市華南超聲設(shè)備有限公司）；DFT-500C 型搖擺式高速粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；GZX-9420-MBE 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；Milli-Q Ⅱ超純水儀（美國 Millipore 公司）；U3000-1型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技公司）。

1.2 試藥 對照品：三七皂苷R1（批號：110745-201921；純度 90.4%）、人參皂苷 Rg1（批號：110703-201933；純度 93.4%）、人參皂苷 Rd（批號：111818-201603；純度 92.1%）、人參皂苷 Re（批號：110754-201827；純度 93.4%）、人參皂苷 Rb1（批號：110704-201827；純度91.2%），以上對照品均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，DiKMA）；甲醇（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司）。

1.3 三七樣品 2019 年10 月至2020 年1 月于傳統(tǒng)三七采收期采集7 個不同產(chǎn)區(qū)1～3 年生三七樣品，每批樣品采集鮮品（三七地下部分）5 kg，修剪、清洗、干燥后取三七主根粉碎。21 批三七樣品均鑒定為五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F. H.Chen，均來源于三七規(guī)范化種植基地，樣品的采集信息見表1。

表1 三七樣品采集信息

序號13 14 15 16 17 18 19 20 21產(chǎn)地紅河建水紅河彌勒昆明石林生長年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生批號HHJS-SQ-20191117-1 HHJS-SQ-20191117-2 HHJS-SQ-20191117-3 HHML-SQ-20191117-1 HHML-SQ-20191117-2 HHML-SQ-20191117-3 KMSL-SQ-20191117-1 KMSL-SQ-20191117-2 KMSL-SQ-20191117-3采集日期2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17

2 方法與結(jié)果

2.1 總皂苷含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd、人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml 含三七皂苷R10.3 mg、人參皂苷Rg11.2 mg、人參皂苷Rd 0.3 mg、人參皂苷Re 0.3 mg 和人參皂苷Rb11.0 mg的混合溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取三七主根粉末（過四號篩），每份約1 g，精密稱定，精密加入70%甲醇25 ml，稱定重量。超聲處理30 min，放冷至室溫，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻靜置，取上清液，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 色譜條件 色譜柱為IntersilC8-3（4.6 mm×250 mm，5μm）；以乙腈為流動相A，水為流動相B 進行梯度洗脫，洗脫程序見表2；檢測波長為203 nm，流速1.5 ml/min，進樣量10μl。空白對照、單體混合對照品、供試品的色譜圖見圖1。

表2 流動相洗脫程序

圖1 三七HPLC色譜圖

2.1.4 皂苷的含量測定結(jié)果 見圖2、表3。

圖2 不同生長年限三七主根總皂苷含量

表3 結(jié)果顯示：7 個產(chǎn)地三七主根總皂苷含量均為三年生＞二年生＞一年生，且均有顯著性差異（P＜0.01）。表明在三年種植期限內(nèi)，隨著生長年限的增加，三七主根的總皂苷含量呈現(xiàn)增高的趨勢，且與種植年限呈正相關(guān)。

表3 不同生長年限三七主根皂的苷含量測定結(jié)果 （，n=3）

表3 不同生長年限三七主根皂的苷含量測定結(jié)果 （，n=3）

注：與同產(chǎn)地一年生比較，①P＜0.01；與同產(chǎn)地二年生比較，②P＜0.01

序號R1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0產(chǎn)地曲靖富源曲靖宣威文山麻栗坡11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21文山丘北紅河建水紅河彌勒昆明石林生長年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生0.173 0.430 0.933 0.192 0.530 0.99 0.229 0.365 0.609 0.267 0.791 1.064 0.213 0.685 0.820 0.169 0.843 0.831 0.179 0.657 0.912 Rg1 0.875 1.814 3.321 0.761 2.072 3.166 1.395 2.464 3.505 1.704 3.612 4.214 1.419 3.408 3.526 1.157 2.983 3.770 0.899 2.863 3.664 Re 0.098 0.214 0.366 0.116 0.225 0.418 0.287 0.436 0.703 0.224 0.527 0.590 0.268 0.504 0.377 0.151 0.445 0.710 0.113 0.370 0.489 Rb1 0.510 1.405 2.663 0.370 1.192 2.650 0.870 2.455 2.750 1.001 2.766 3.643 0.862 2.338 2.616 0.770 2.627 3.413 0.470 2.048 2.636 Rd 0.084 0.284 0.680 0.050 0.270 0.641 0.156 0.591 0.745 0.173 0.766 0.787 0.133 0.585 0.488 0.096 0.593 0.902 0.072 0.435 0.624總皂苷含量（%）1.738±0.005 4.144±0.006①7.962±0.001①②1.488±0.003 4.287±0.002①7.869±0.003①②2.936±0.007 6.309±0.001①8.311±0.007①②3.367±0.016 8.461±0.002①10.296±0.008①②2.895±0.016 7.518±0.002①7.827±0.008①②2.342±0.003 7.489±0.007①9.624±0.082①②1.730±0.009 6.372±0.005①8.324±0.017①②

2.2 浸出物的含量測定 參考《中華人民共和國藥典》2015 年版（通則2201）項下的熱浸法測定，用甲醇作為溶劑。取供試品約2.0 g，精密稱定，置于100 ml的錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，靜置1 h 后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用干燥過濾器濾過，精密量取濾液25 ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，以干燥品計算供試品中甲醇溶性浸出物的含量（%）。7個產(chǎn)區(qū)共21批樣品的浸出物含量測定結(jié)果見圖3及表4。

表4 不同生長年限三七主根浸出物的含量測定結(jié)果 （，n=3）

表4 不同生長年限三七主根浸出物的含量測定結(jié)果 （，n=3）

注：與同產(chǎn)地一年生比較，①P＜0.01；與同產(chǎn)地二年生比較，②P＜0.01

序號1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0產(chǎn)地曲靖富源產(chǎn)地紅河建水曲靖宣威紅河彌勒文山麻栗坡序號13 14 15 16 17 18 19 20 21昆明石林生長年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生浸出物含量（%）10.04±0.11 11.09±0.07①16.43±0.01①②15.84±0.11 16.86±0.06①18.09±0.02①②10.04±0.01 15.39±0.02①17.06±0.02①②20.47±0.10 21.70±0.07①26.00±0.06①②生長年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生浸出物含量（%）12.51±0.03 19.62±0.17①20.67±0.06①②15.02±0.09 21.31±0.15①18.97±0.05①②13.05±0.05 20.94±0.02①20.98±0.08①11 12文山丘北

圖3 不同生長年限三七主根浸出物含量

表4 結(jié)果顯示：曲靖富源、曲靖宣威、文山麻栗坡、紅河建水和文山丘北的主根浸出物含量均為三年生≥二年生＞一年生，浸出物含量與生長年限呈正相關(guān)（P＜0.01）；昆明石林為三年生≥二年生＞一年生，紅河彌勒為二年生＞三年生＞一年生?？偟膩碚f，多數(shù)產(chǎn)地的三七主根浸出物含量為三年生＞二年生＞一年生，即隨著生長年限的增加，三七主根浸出物含量增高。

2.3 三七總皂苷含量聚類分析 以7 個產(chǎn)地不同生長年限三七主根的總皂苷含量為變量進行聚類分析，結(jié)果見圖4。當(dāng)距離為10 時，根據(jù)三七總皂苷含量可將不同三七主根分為2類，第Ⅰ類由一年生和二年生組成，第Ⅱ類由二年生和三年生組成。

圖4 不同生長年限三七主根總皂苷含量聚類樹狀圖

3 結(jié) 論

中藥材的采收是否合理，直接影響著藥材的質(zhì)量。為避免因產(chǎn)地、采收時間不同而對三七主根中總皂苷成分的含量造成差異，本實驗選取了7 個不同產(chǎn)區(qū)的三七樣品作為研究對象，同一產(chǎn)區(qū)內(nèi)選擇在相同采收期從規(guī)范化的三七種植基地統(tǒng)一采收、加工三七樣品。從測定結(jié)果分析得知：不同生長年限三七主根總皂苷含量為三年生＞二年生＞一年生；不同生長年限三七主根浸出物含量中，多數(shù)為三年生＞二年生＞一年生，個別產(chǎn)區(qū)存在二年生＞三年生＞一年生的情況。

總體上看，在三年種植期限內(nèi)，隨著生長年限的增加，三七主根的總皂苷含量和浸出物含量呈現(xiàn)增高的趨勢。因此建議人工種植三七應(yīng)三年后采挖，這也與傳統(tǒng)的三七采收期一致。