雙酚A 對(duì)小黃魚(yú)幼魚(yú)的急性毒性

魏福亮，謝慶平，蔚 敏，詹 煒，劉 峰，樓 寶

(1.浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，浙江舟山 316022；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水生生物研究所，浙江杭州 310021)

環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(environmental endocrine disrupting chemicals，EDCs)是一類影響生物內(nèi)源激素正常合成和代謝，進(jìn)而影響生物內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、生殖發(fā)育等正常生理活動(dòng)的一類外源性化學(xué)物質(zhì)[1]。EDCs 種類包括類雌激素物質(zhì)、有機(jī)氯農(nóng)藥和重金屬等[2]。BPA 是研究頻率最高的EDCs 之一，具有良好的耐熱性和可塑性，被廣泛應(yīng)用于高分子材料的生產(chǎn)，如塑料水桶、水杯和食品罐內(nèi)壁涂料等[3]，其結(jié)構(gòu)與合成雌激素己烯雌酚相似[4]，具有雌激素活性[5]，BPA 可通過(guò)工業(yè)廢水直接排放進(jìn)水體[6]，也可通過(guò)其制品殘余物和垃圾滲濾液等間接進(jìn)入空氣、土壤中[7]，通過(guò)參與物質(zhì)循環(huán)分散到自然環(huán)境當(dāng)中。在世界范圍內(nèi)的多個(gè)國(guó)家均有研究報(bào)告水體環(huán)境監(jiān)測(cè)到BPA，濃度從0.05 μg·L-1至12 μg·L-1[8-11]，我國(guó)近岸檢測(cè)到的BPA 濃度最高達(dá)到1.4 μg·L-1[12]。BPA 能由食物鏈進(jìn)入生物體內(nèi)并與雌激素受體(ER)相互作用，干擾正常激素在機(jī)體內(nèi)的產(chǎn)生、釋放、運(yùn)輸、代謝等作用，從而影響生物的生殖、神經(jīng)、免疫神經(jīng)系統(tǒng)等功能[13-14]，也可通過(guò)阻礙激素與受體結(jié)合，進(jìn)而阻斷激素信號(hào)傳遞引起功能喪失[15]。已有研究結(jié)果表明，BPA 攝入會(huì)導(dǎo)致男性精子數(shù)量降低，提高內(nèi)分泌異常相關(guān)疾病(女性青春期提前等)[16]、肥胖[17]和癌癥的發(fā)病率[18]，在母體中積累會(huì)導(dǎo)致早產(chǎn)，提高胎兒畸形率[19]。在魚(yú)類中，對(duì)BPA 的研究主要集中在對(duì)魚(yú)類的毒性致死作用和對(duì)魚(yú)類生殖系統(tǒng)的破壞性[20]。已有BPA 的急性毒性實(shí)驗(yàn)報(bào)道，BPA 對(duì)體長(zhǎng)3.0±0.5 cm 的斑馬魚(yú)Danio rerio 96 h 急性毒性暴露的半致死濃度為6.3 mg·L-1[21]；對(duì)大西洋銀漢魚(yú)Menidia menidia 的96 h 急性毒性半致死濃度為9.4 mg·L-1[22]。另一方面，低濃度BPA 長(zhǎng)期浸浴導(dǎo)致雄性斑馬魚(yú)性腺成熟度以及成熟精子數(shù)顯著下降[23]，雌性斑馬魚(yú)的產(chǎn)卵量顯著下降，且子代畸形率升高[24]；同樣，也會(huì)導(dǎo)致雌性鯉魚(yú)Cyprinus carpio 閉鎖卵泡數(shù)增多，雄性鯉魚(yú)精巢小葉結(jié)構(gòu)減少[25]；對(duì)比目魚(yú)Paralichthys olivaceus 用100 μg·kg-1含有BPA 的飼料投喂，會(huì)誘導(dǎo)群體出現(xiàn)雌性化[26]。

小黃魚(yú)Larimichthys polyactis，又名小鮮、黃花魚(yú)等，隸屬于鱸形目Perciformes，石首魚(yú)科Sciaenidae，黃魚(yú)屬Larimichthys，是我國(guó)“四大海產(chǎn)”之一[27]，小黃魚(yú)全人工繁養(yǎng)殖技術(shù)[28-29]的成功為保護(hù)小黃魚(yú)種質(zhì)資源，研究各種因素對(duì)小黃魚(yú)的影響機(jī)制提供了保障。已有研究表明，小黃魚(yú)在孵化后43～80 d 期間，雄性性腺中會(huì)先出現(xiàn)卵母細(xì)胞，而后凋亡退化，這一特殊的性腺發(fā)育模式被認(rèn)為主要受遺傳因素影響，但不能完全排除環(huán)境因素參與影響的可能[30]。在小黃魚(yú)性別分化起始之前，通過(guò)長(zhǎng)時(shí)期暴露外源17β-雌二醇(17βestradiol，E2，一種天然的雌激素)，雄性主要表現(xiàn)為精巢發(fā)育受阻，卵母細(xì)胞未能出現(xiàn)數(shù)量上的增加。證明外源E2 并不是導(dǎo)致小黃魚(yú)雄性雌雄同體階段產(chǎn)生的原因[31]。另一方面，調(diào)查顯示BPA 是我國(guó)沿海含量最高的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，在我國(guó)近海沿岸海域濃度可達(dá)到1.4 μg·L-1[12]，其環(huán)境中的含量遠(yuǎn)高于E2。因此，研究BPA 對(duì)小黃魚(yú)生長(zhǎng)和性腺發(fā)育的影響，對(duì)解釋其特殊性腺發(fā)育模式的產(chǎn)生原因，保護(hù)小黃魚(yú)野生資源具有重要意義。

由于BPA 對(duì)生物具有毒性作用，因此在進(jìn)行相關(guān)研究時(shí)需要首先明確BPA 對(duì)研究對(duì)象的半致死濃度和安全濃度。本研究通過(guò)對(duì)孵化后25 d 的小黃魚(yú)進(jìn)行96 h 急性毒性實(shí)驗(yàn)，得到BPA 對(duì)小黃魚(yú)的半致死濃度和安全濃度，對(duì)后續(xù)的相關(guān)研究提供了理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)所用代小黃魚(yú)是浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水生生物研究所象山港灣水產(chǎn)苗種有限公司養(yǎng)殖基地2021年繁殖培育的F7 代苗種，孵化后，養(yǎng)殖條件為水溫17～20 ℃，鹽度22～25，自然光照周期，孵化后4～15 d分別投喂輪蟲(chóng)和小球藻，孵化后12～22 d 投喂鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，第16 d 開(kāi)始使用商業(yè)飼料投喂馴化，至孵化后22 d 左右完成顆粒飼料馴化，每日投喂3 次。小黃魚(yú)養(yǎng)至孵化后25 d 用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)魚(yú)提前8 h 停止投喂，并轉(zhuǎn)入總?cè)莘e1 000 L 的表面光滑的藍(lán)色玻璃鋼水桶，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第48 h 投喂少量鹵蟲(chóng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)按照浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用指南》的規(guī)定進(jìn)行。

1.2 實(shí)驗(yàn)用水中BPA 濃度的檢測(cè)

為探明本研究實(shí)驗(yàn)用養(yǎng)殖水體BPA 水平，在BPA 浸浴實(shí)驗(yàn)前，從實(shí)驗(yàn)桶中隨機(jī)抽取3 個(gè)樣本的砂濾海水，各50 mL，分別標(biāo)記為A、B、C，置于-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

采用液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)實(shí)驗(yàn)用水中的BPA 濃度進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)方法如下:(1)稱取BPA 固體，用含0.1%甲酸的甲醇配制為2 mg·mL-1的母液備用。用甲醇將BPA 母液稀釋為2.0 μg·L-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。(2)取水樣加入0.1%氨水/甲醇溶液高速離心取上清。(3)液相色譜進(jìn)樣，質(zhì)譜檢測(cè)，完成數(shù)據(jù)采集。

1.3 BPA 浸浴急性毒性實(shí)驗(yàn)

在0～5 mg·L-1之間設(shè)計(jì)濃度梯度0、0.1、0.5、1.0、2.5、3.0、3.3、3.5、3.8、4.0、4.5、5.0 mg·L-1以及無(wú)水乙醇對(duì)照組(Control)各1 桶，對(duì)孵化后25 d 的小黃魚(yú)進(jìn)行急性毒性浸浴實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)實(shí)驗(yàn)桶水量為500 L，水溫17～20 ℃，鹽度22～25，溶氧量8.5～10.5 mg·L-1，pH=8.05±0.05，持續(xù)曝氣，在自然光照周期下浸浴96 h。根據(jù)所設(shè)浸浴濃度梯度，配制工作液，準(zhǔn)確稱量BPA 固體(Sigma，德國(guó)，CAS：80-05-7，≥97%)，以無(wú)水乙醇為溶劑配制工作液(表1)。

表1 BPA 工作液的配制方法Tab.1 Preparation method of BPA working fluid

各浸浴濃度梯度組實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，每桶小黃魚(yú)178～335 尾，提前8 h 從表面光滑的水泥池轉(zhuǎn)移到藍(lán)色玻璃鋼水桶中并停止投喂，各浸浴組及Control 組分別加入10 mL 工作液，0 mg·L-1組不做處理，96 h 浸浴過(guò)程中不換水，由于實(shí)驗(yàn)濃度梯度較為密集，因此未設(shè)置平行對(duì)照，且因?yàn)閷?shí)驗(yàn)魚(yú)較小，為避免其因饑餓死亡，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至48 h 時(shí)適量投喂鹵蟲(chóng)。

1.4 存活率統(tǒng)計(jì)

因小黃魚(yú)對(duì)光線刺激敏感，使用光線刺激即可判斷，所以未采用針刺法[32]。用強(qiáng)光照射后10 s 內(nèi)無(wú)反應(yīng)，即判定為死亡。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每隔2 h 觀察記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)是否出現(xiàn)身體不平衡、游動(dòng)緩慢等中毒癥狀、并記錄死亡數(shù)量及時(shí)撈出死魚(yú)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清點(diǎn)每組小黃魚(yú)剩余量，計(jì)算每組小黃魚(yú)總量。最后通過(guò)死亡數(shù)量和存活數(shù)量計(jì)算出存活率。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)使用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件中文版處理。建立樣本總數(shù)、浸浴濃度和存活率3 個(gè)變量，選擇分析-回歸-概率，分別計(jì)算并獲得24 h、48 h、72 h 和96 h 半致死濃度(LC50)，并根據(jù)以下經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算安全濃度。

式中:SC 為安全濃度(safe concentration)，mg·L-1；LC50為半致死濃度，mg·L-1。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)用水中的BPA 水平

通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用方法定量檢測(cè)A、B、C 3 個(gè)水樣的總離子流圖結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品的峰值在3.31 min 出現(xiàn)(圖1A)，樣品A 的峰值出現(xiàn)在4.45 min(圖1B)，樣品B 的峰值出現(xiàn)在4.44 min(圖1C)，樣品C 的峰值出現(xiàn)在4.41 min(圖1D)。檢測(cè)樣本峰值出現(xiàn)時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品峰值出現(xiàn)時(shí)間差別顯著，而各標(biāo)準(zhǔn)品之間峰值出現(xiàn)時(shí)間接近。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)所用海水未檢測(cè)出BPA。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣和實(shí)驗(yàn)用水樣中BPA 的總離子流圖譜Fig.1 Total ion current spectrum of BPA in standard and experimental water samples

2.2 中毒癥狀

為避免潛在應(yīng)激作用的影響，實(shí)驗(yàn)魚(yú)提前8 h 移入實(shí)驗(yàn)桶中適應(yīng)環(huán)境。各實(shí)驗(yàn)組在加入BPA 工作液時(shí)，實(shí)驗(yàn)魚(yú)立即出現(xiàn)反應(yīng)，表現(xiàn)為迅速游向桶壁，做無(wú)規(guī)則游動(dòng)，浸浴濃度越高，反應(yīng)越強(qiáng)烈。此現(xiàn)象持續(xù)5 min 左右。0 mg·L-1組正常游動(dòng)無(wú)異常，無(wú)水乙醇組有輕微應(yīng)激反應(yīng)，持續(xù)時(shí)間非常短。瀕臨死亡的小黃魚(yú)行動(dòng)遲緩，用強(qiáng)光刺激后反應(yīng)遲鈍，身體出現(xiàn)變形，泳姿為傾斜狀，泄殖孔處有白色絲狀異物，死后身體形態(tài)扭曲，一般沉入桶底或浮于桶壁周圍。

2.3 急性毒性特征分析

統(tǒng)計(jì)不同浸浴濃度在24、48、72 和96 h 的存活率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，0 mg·L-1和Control 組出現(xiàn)個(gè)別死亡，且死亡狀態(tài)與中毒癥狀不符。在對(duì)實(shí)驗(yàn)中24、48、72 和96 h 小黃魚(yú)存活率的計(jì)算后發(fā)現(xiàn)，浸浴24 h后，0～4.0 mg·L-1濃度范圍內(nèi)，小黃魚(yú)的存活率都在90%以上，而4.5 mg·L-1濃度組和5.0 mg·L-1濃度組的存活率出現(xiàn)了明顯的下降，分別下降到69.26%和14.03%；浸浴48 h 后，0～3.3 mg·L-1濃度范圍內(nèi)的存活率依然在90%以上，3.5～5.0 mg·L-1濃度范圍內(nèi)存活率出現(xiàn)了明顯下降，5.0 mg·L-1濃度組的小黃魚(yú)全部死亡；浸浴至72 h 和96 h 的結(jié)果相似，即0～2.5 mg·L-1范圍內(nèi)，小黃魚(yú)存活率處于較高水平，即使最低存活率也高達(dá)96.73%，3.00 mg·L-1時(shí)迅速由2.5 mg·L-1的98.04%下降到81.25%，之后隨浸浴濃度升高，小黃魚(yú)存活率下降，濃度達(dá)到5.0 mg·L-1時(shí)，小黃魚(yú)全部死亡(表2)。

表2 小黃魚(yú)在不同濃度BPA 中各時(shí)間段的存活率Tab.2 Survival rate of L.polyactis exposure to different concentrations of BPA at each time point

對(duì)小黃魚(yú)96 h 不同濃度的BPA 浸浴存活率進(jìn)行分析，結(jié)果表明，小黃魚(yú)的存活率隨浸浴濃度的升高大致可分為2 個(gè)階段，即0～2.5 mg·L-1濃度范圍的緩慢變化階段和2.5～3.0 mg·L-1濃度范圍的快速下降階段(圖2)。

圖2 不同濃度BPA 暴露96 h 后小黃魚(yú)的存活率曲線Fig.2 Survival rate curve of L.polyactis exposure to different concentrations of BPA after 96 h

因此以2.5 mg·L-1為界限，分別對(duì)0～2.5 mg·L-1和2.5～5.0 mg·L-1范圍存活率進(jìn)行分析。2.5 mg·L-1以內(nèi)，存活率高，且折線分布于0 mg·L-1組兩側(cè)，下降趨勢(shì)較緩(圖3A)，當(dāng)暴露濃度大于2.5 mg·L-1時(shí)，存活率下降趨勢(shì)隨濃度的提高而增加，且濃度在4.5 mg·L-1時(shí)存活率又出現(xiàn)了更加明顯的下降(圖3B)，即濃度越高，存活率下降趨勢(shì)越明顯。

圖3 不同濃度BPA 在各時(shí)間段對(duì)小黃魚(yú)存活率的影響Fig.3 Effects of different concentrations of BPA exposure at each time point on the survival rate of L.polyactis

2.4 半致死濃度和安全濃度

根據(jù)表1 所統(tǒng)計(jì)的存活率，使用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行概率分析，分別得到24、48、72 和96 h 的半致死濃度為4.68、4.29、4.09 和3.94 mg·L-1，并通過(guò)經(jīng)驗(yàn)公式算得安全濃度為1.08 mg·L-1(表3)，隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間增加，半致死濃度降低，說(shuō)明BPA 毒性在小黃魚(yú)體內(nèi)有蓄積作用，且隨暴露濃度升高，蓄積作用越明顯。

表3 小黃魚(yú)BPA 暴露的半致死濃度和安全濃度Tab.3 The semi-lethal concentration and safe concentration of BPA exposure in L.polyactis

小黃魚(yú)作用的安全濃度與對(duì)小黃魚(yú)存活率的分析結(jié)果一致，而在2.5 mg·L-1濃度組小黃魚(yú)的存活率依然高達(dá)98.04%，說(shuō)明在此范圍內(nèi)，雖然已經(jīng)超出安全濃度，但此范圍的毒性蓄積作用并不明顯，而此后存活率大幅度下降，表明此后的毒性蓄積作用增強(qiáng)，對(duì)小黃魚(yú)的毒性作用更加明顯，因此BPA 的毒性與濃度為非直線關(guān)系[33]。

3 討論

3.1 BPA 對(duì)生物的影響

本實(shí)驗(yàn)對(duì)0～5.0 mg·L-1濃度范圍內(nèi)BPA 對(duì)小黃魚(yú)存活率的影響做了詳細(xì)研究，統(tǒng)計(jì)了不同濃度BPA暴露后，小黃魚(yú)在不同時(shí)間段的存活率，通過(guò)SPSS 23.0 數(shù)據(jù)軟件的分析和公式計(jì)算，我們獲得了各時(shí)間段的半致死濃度以及安全濃度，結(jié)果表明，對(duì)孵化后25 d 的小黃魚(yú)，BPA 的安全濃度為1.08 mg·L-1，說(shuō)明在2.5 mg·L-1濃度范圍以內(nèi)，小黃魚(yú)對(duì)BPA 的具有高度的耐受性。

隨著工業(yè)的發(fā)展和塑料制品的廣泛應(yīng)用，BPA 污染分布范圍遍布環(huán)境各個(gè)角落。理論上，BPA 的生物半衰期約為6 h，可以通過(guò)尿液排出體外，但仍然會(huì)有一部分BPA 會(huì)積累在組織當(dāng)中[34]。由于其廣泛的分布，且具有化學(xué)毒性，因此會(huì)對(duì)各種生物產(chǎn)生不同程度的影響。人類耐受的BPA 的安全劑量為≤50 μg·(kg·d)-1[35]。學(xué)齡前兒童對(duì)BPA 的耐受力相對(duì)成年人要低，因此學(xué)齡前耐受的安全劑量為0.24～0.41 ng·(kg·d)-1[36]。歐洲和美國(guó)食品、藥物管理局認(rèn)為目前環(huán)境中BPA 的暴露并不能對(duì)人體產(chǎn)生損害[35]。但是部分科學(xué)家卻認(rèn)為，環(huán)境中的BPA 水平可能足以危害人類健康，且由于胎兒各項(xiàng)生理機(jī)能并未成熟，因此即使是微量的BPA 接觸，也可能對(duì)胎兒產(chǎn)生不良影響[37]；0.1 mg·L-1濃度BPA 處理72 h 后會(huì)影響5 齡第4 天家蠶無(wú)核精子束的形成及精子束的濃縮成熟[38]；通過(guò)對(duì)SD 大鼠Sprague-Dawley，用于藥理、毒理、藥效及GLP 實(shí)驗(yàn)的一個(gè)大鼠品系進(jìn)行BPA 灌胃發(fā)現(xiàn)，BPA 會(huì)影響大鼠機(jī)體的免疫功能[39]；使用12.5、25 和50 mg·(kg·d)-1的BPA 對(duì)雌性CD-1 小鼠進(jìn)行腹腔注射后，結(jié)果顯示高濃度的BPA 會(huì)抑制卵泡的發(fā)育[40]；BPA 濃度達(dá)到0.79 mg·L-1會(huì)對(duì)河蜆Corbicula fluminea 產(chǎn)生氧化損傷[41]；在對(duì)金魚(yú)Carassius auratus 的研究中發(fā)現(xiàn)，0.05和0.5 mg·L-1濃度的BPA 浸浴30 d 后，金魚(yú)精巢發(fā)育受到阻礙，且停止暴露后，精巢仍無(wú)法繼續(xù)發(fā)育成熟[20]；0.02 mg·L-1濃度的BPA 暴露3 周后會(huì)改變雄性和雌性斑馬魚(yú)的內(nèi)分泌大麻素系統(tǒng)(ECS)，從而改變性腺功能[42]；從出生開(kāi)始分別使用0.375 和1.5 mg·L-1的BPA 暴露斑馬魚(yú)至性成熟，會(huì)導(dǎo)致斑馬魚(yú)性腺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，交配行為障礙，雌性產(chǎn)卵量下降[43]；分別使用5.4、6.0、6.8、7.6、8.0 mg·L-1的BPA 處理斑馬魚(yú)96 h，會(huì)導(dǎo)致雄性斑馬魚(yú)精巢結(jié)構(gòu)損傷，雌性斑馬魚(yú)卵泡嚴(yán)重萎縮[44]。

目前對(duì)雙酚A 暴露的研究主要集中在生殖毒性方面。在對(duì)小黃魚(yú)的研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，小黃魚(yú)雄性精巢在發(fā)育過(guò)程中會(huì)經(jīng)歷特殊的雌雄同體階段[30]，BPA 又是我國(guó)沿海含量最高的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，因此研究BPA 對(duì)小黃魚(yú)的影響對(duì)此特殊階段產(chǎn)生原因的解析有重要意義。

3.2 BPA 毒性特點(diǎn)

本研究結(jié)果顯示，BPA 對(duì)小黃魚(yú)的致死作用并不是隨濃度增加而單純的呈直線增強(qiáng)，而是會(huì)經(jīng)歷不同的毒性強(qiáng)度階段，隨時(shí)間的推移和暴露濃度的增加，BPA 在小黃魚(yú)體內(nèi)的蓄積作用越來(lái)越明顯。這與BPA 毒性作用曲線呈“U 型”的結(jié)論相似[45]。

而且在研究中發(fā)現(xiàn)，BPA 的毒性出現(xiàn)了比較明顯的分段。首先，實(shí)驗(yàn)各時(shí)間段半致死濃度比較結(jié)果為24 h LC50>48 h LC50>72 h LC50>96 h LC50，說(shuō)明隨時(shí)間的推移，BPA 在小黃魚(yú)體內(nèi)的毒性蓄積作用愈發(fā)明顯，當(dāng)BPA 含量超出小黃魚(yú)耐受范圍時(shí)，小黃魚(yú)存活率出現(xiàn)快速下降。通過(guò)計(jì)算，其安全濃度為1.08 mg·L-1，而0～2.5 mg·L-1濃度范圍的存活率普遍較高，說(shuō)明在1.08～2.5 mg·L-1范圍內(nèi)，雖然已超出安全濃度，但其毒性仍較低，原因可能是在此范圍內(nèi)，BPA 的蓄積作用仍在小黃魚(yú)正常代謝調(diào)控限度之內(nèi)，小黃魚(yú)可以通過(guò)自身代謝來(lái)降低BPA 造成的損傷，因此這時(shí)小黃魚(yú)的存活率仍然較高。而濃度達(dá)到3.0 mg·L-1時(shí)，存活率出現(xiàn)了明顯的下降，此時(shí)的濃度跨度為0.5 mg·L-1，遠(yuǎn)低于安全濃度與2.5 mg·L-1之間的跨度，說(shuō)明此時(shí)BPA 的蓄積作用顯著，導(dǎo)致毒性作用快速增強(qiáng)。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果及計(jì)算分析表明，小黃魚(yú)BPA 暴露96 h 半致死濃度為3.94 mg·L-1，與其他水生生物略有差異，例如BPA 對(duì)黑斑蛙Pelophylax nigromaculatus 胚胎的半致死濃度為7.68 mg·L-1，對(duì)黑斑蛙蝌蚪的半致死濃度為9.00 mg·L-1[46]；對(duì)體長(zhǎng)3.0±0.5 cm 的斑馬魚(yú)的96 h 急性毒性暴露的半致死濃度為6.3 mg·L-1[21]；對(duì)大西洋銀漢魚(yú)的96 h 急性毒性暴露的半致死濃度為9.4 mg·L-1[22]。

綜上所述，高濃度的BPA 對(duì)孵化后25 d 的小黃魚(yú)具有急性毒性作用，當(dāng)暴露濃度大于2.5 mg·L-1時(shí)BPA 在小黃魚(yú)體內(nèi)蓄積作用增強(qiáng)，致死作用顯著，并隨暴露時(shí)間延長(zhǎng)和暴露濃度提高而增強(qiáng)。結(jié)果顯示，與其他物種相比，小黃魚(yú)對(duì)BPA 的耐受力較弱，因此BPA 更容易對(duì)小黃魚(yú)的生長(zhǎng)生殖等生理活動(dòng)產(chǎn)生影響。本研究確定了BPA 對(duì)小黃魚(yú)的半致死濃度和安全濃度，為接下來(lái)研究BPA 對(duì)小黃魚(yú)性腺發(fā)育的影響提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，豐富了BPA 對(duì)海洋生物毒性作用的研究結(jié)果，為研究BPA 對(duì)其他生物的毒性作用提供參考。