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    柴胡疏肝散對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠行為學(xué)及血清T、PROG含量的影響

    2022-05-18 16:40:36任秋萍吳憂沈建英黃睿婷梁文娜
    云南中醫(yī)中藥雜志 2022年5期
    關(guān)鍵詞:柴胡疏肝散圍絕經(jīng)期綜合征行為

    任秋萍 吳憂 沈建英 黃睿婷 梁文娜

    摘要:目的 研究柴胡疏肝散對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證模型大鼠行為學(xué)的影響及對(duì)血清中PROG(孕酮)、T(睪酮)含量的影響。方法 選取30只雌性SD大鼠,隨機(jī)分成正常組、模型組和給藥組,采用雙側(cè)卵巢去勢手術(shù)加上經(jīng)典的CUMS(慢性溫和不可預(yù)知刺激)方法建立圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證的大鼠模型,用柴胡疏肝散在造模同時(shí)進(jìn)行灌胃干預(yù),共計(jì)21 d。造模前后2次進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附法)測定各組大鼠血清中相應(yīng)指標(biāo)PROG(孕酮)、T(睪酮)的含量。結(jié)果 在曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,模型組的移動(dòng)總距離和直立次數(shù)較正常組均下降(P<0.05),給藥組的移動(dòng)總距離比模型組顯著增加(P<0.01),給藥組直立次數(shù)比模型組增多(P<0.05);在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中,各組大鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間無差異(P>0.05);ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,模型組的睪酮、孕酮水平比正常組均下降(P<0.01);給藥組大鼠血清睪酮含量比模型組顯著提高(P<0.01),給藥組血清孕酮含量與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 柴胡疏肝散可改善圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠的抑郁樣行為,提高大鼠血清中的睪酮激素水平。

    關(guān)鍵詞:圍絕經(jīng)期綜合征;肝郁證;孕酮;睪酮;行為;柴胡疏肝散

    中圖分類號(hào):R285.5?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A?? 文章編號(hào):1007-2349(2022)05-0062-04

    Effects of Chaihu Shugan Powder on Behavior and Serum T and PROG Levels in Ratswith Perimenopausal Syndrome and Liver Stagnation Syndrome

    REN Qiu-ping1,2, WU You1,2, SHEN Jian-ying1, HUANG Rui-ting1, LIANG Wen-na1,2

    (1. Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China;2. Key Laboratory of TCM Health Status Identification of Fujian, Fuzhou 350122, China)

    【Abstract】Objective: To study the effect of Chaihu Shugan Powder on the behavior of rats with perimenopausal syndrome and liver stagnation syndrome and the effect on the level of PROG (progesterone) and T (testosterone) in serum. Methods: 30 female SD rats were selected and randomly divided into normal group, model group and administration group. Bilateral ovariectomy combined with classical CUMS (chronic mild and unpredictable stimulation) method was used to establish rat model with perimenopausal syndrome and liver stagnation syndrome. Chaihu Shugan Powder was used for gavage intervention at the same time as the model was established, for 21 days. Behavioral experiments were conducted twice before and after modeling. After the experiment, ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) was used to determine the contents of corresponding indexes PROG (progesterone) and T (testosterone) in the serum of rats in each group. Results: In the open field test results, the total moving distance and standing times of the model group were decreased than those of the normal group (P<0.05). The total moving distance of the administration group was obviously increased than that of model group. The times of standing uprights of the administration group was more than that of the model group (P<0.05). In the forced swimming test, there was no difference in the swimming immobility time of the rats in each group (P>0.05). In the ELISA test results, the levels of testosterone and progesterone in the model group were decreased than those in the normal group (P<0.01). Compared with that of the model group, the levels of serum testosterone in the administration group were significantly increased (P<0.01). There was no statistically significant difference in serum progesterone levels between the administration group and the model group (P>0.05). Conclusion: Chaihu Shugan Powder can improve the depression-like behavior of rats with perimenopausal syndrome and liver stagnation syndrome and increase the level of testosterone in serum of rats.

    【Key words】Perimenopausal Syndrome; Liver Stagnation Syndrome; Progesterone; Testosterone; Behavior; Chaihu Shugan Powder

    目前,我國已進(jìn)入老齡化社會(huì),圍絕經(jīng)期的人數(shù)也逐年增加。而圍絕經(jīng)期綜合征是婦科常見病,主要包括失眠、月經(jīng)改變、潮熱、易激動(dòng)、疲乏、頭痛等,而該病的主要病因是性激素分泌紊亂以及植物神經(jīng)功能紊亂[1-2]。圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病率呈逐年升高趨勢,并可引起骨質(zhì)疏松、心血管疾病等一系列疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),2030年,將有12億的婦女進(jìn)入圍絕經(jīng)期[3-4],且圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病人群越來越年輕化,其發(fā)病率可高達(dá)91.2%[5]。婦女進(jìn)入圍絕經(jīng)期發(fā)生的一系列變化與天癸竭、肝氣衰、腎藏衰密切相關(guān),肝失疏泄,則情志異常,臨床以肝郁多見,而婦女圍絕經(jīng)期是“郁病”的高發(fā)年齡[6]。

    臨床研究表明,圍絕經(jīng)期婦女孕酮、睪酮水平較非圍絕經(jīng)期婦女降低[7-9]。本研究的目的是觀測圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)以及驗(yàn)證柴胡疏肝散的解郁功效,并測定相關(guān)性激素指標(biāo)的水平變化,為柴胡疏肝散的臨床治療提供更多的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物 雌性SD大鼠30只,體質(zhì)量為(230±20)g,于福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心進(jìn)行喂養(yǎng),大鼠來源于上海吉輝實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)有限公司(許可證:SCXK(滬)2007-0012)。

    1.2 藥物 其藥物組成為柴胡、陳皮各6 g,白芍、枳殼、香附、川芎各4.5 g,炙甘草1.5 g(來源《景岳全書》),購買于實(shí)驗(yàn)室采購系統(tǒng)。

    1.3 主要試劑 大鼠睪酮(T)/孕酮(PROG)ELISA 檢測試劑盒(武漢華美生物科技公司,批號(hào):CSB-E07282r)

    1.4 主要儀器 Infinite M200 F200多功能酶標(biāo)儀(美國無限公司)、 3K30冷凍高速離心機(jī)(美國賽格瑪公司);自制黑色木箱(長100 cm,寬100 cm,高40 cm);圓柱形透明玻璃桶(底部直徑20 cm,高45 cm)。

    1.5 方法

    1.5.1 分組 大鼠分3組,每組隨機(jī)10只,分別為正常組、模型組和給藥組。正常組大鼠只進(jìn)行假手術(shù);模型組進(jìn)行雙側(cè)卵巢摘除手術(shù)與CUMS法;給藥組在建立圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證模型的同時(shí)予以藥物干預(yù)。

    1.5.2 模型建立 正常組大鼠進(jìn)行假手術(shù),不摘除雙側(cè)卵巢,摘除卵巢旁部分脂肪組織。而模型組與給藥組大鼠進(jìn)行雙側(cè)卵巢去勢手術(shù),麻醉劑為10%水合氯醛,劑量為3 mL/kg,卵巢摘除后,肌內(nèi)注射青霉素鈉消炎(6萬U/只)。術(shù)后休息1周后,除正常組外,其余大鼠接受21 d慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激處理。應(yīng)激源包括禁水24 h、禁食24 h、4 ℃冰水刺激5 min、夾尾2 min、45°傾斜鼠籠24 h、束縛4 h、45 ℃熱環(huán)境5 min,造模期間每天隨機(jī)給予1種刺激,每種刺激1周不超過1次。

    1.5.3 給藥 正常組與模型組均以等量生理鹽水灌胃;給藥組在常規(guī)喂養(yǎng)同時(shí)采用柴胡疏肝散水煎劑灌胃,參照文獻(xiàn),大鼠的給藥劑量為 3.31 g/kg,共灌胃21 d。

    1.5.4 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

    1.5.4.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 將大鼠放進(jìn)一圓柱形透明玻璃桶(玻璃桶高度50 cm)中并進(jìn)行觀察,記錄大鼠4 min內(nèi)的靜止時(shí)間,實(shí)驗(yàn)前需對(duì)每組大鼠進(jìn)行游泳適應(yīng)性訓(xùn)練。

    1.5.4.2 曠場實(shí)驗(yàn) 于造模前、造模后兩次進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn);方法為將1只大鼠放入曠場箱最中央,記錄大鼠的跑動(dòng)軌跡以及垂直次數(shù)(以大鼠雙前掌抬起離開地面記為一次垂直站立),記錄時(shí)間為5 min,每只大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用酒精噴灑曠場箱并用毛巾清理干凈,再進(jìn)行下一只大鼠實(shí)驗(yàn),重復(fù)之前的步驟。

    1.5.5 血清孕酮、睪酮含量測定 ELISA法進(jìn)行測定,使用相應(yīng)的試劑盒并嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以酶標(biāo)儀測定出的吸光值計(jì)算相應(yīng)指標(biāo)在血清中的濃度。

    1.5.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 符合正態(tài)分布的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),采用單因素方差分析方法,結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示;對(duì)于不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù),采用非參數(shù)檢驗(yàn)的方法,結(jié)果以中位數(shù)和四分位數(shù)(M(P25,P75))表示,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 25.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,得出相應(yīng)結(jié)果;

    2 結(jié)果

    2.1 曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 在造模前后分別進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn),記錄每組大鼠總移動(dòng)距離與垂直次數(shù)。結(jié)果顯示,造模后,模型組的總移動(dòng)距離與垂直次數(shù)比正常組均明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);給藥組大鼠在總移動(dòng)距離方面比模型組有上升趨勢(P>0.05),給藥組大鼠比模型組大鼠直立次數(shù)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在模型建立前后兩次進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn),記錄每組大鼠4 min內(nèi)的靜止不動(dòng)時(shí)間。結(jié)果表明,造模后,模型組的游泳不動(dòng)時(shí)間與正常組相比有上升趨勢(P>0.05);給藥組大鼠不動(dòng)時(shí)間較模型組有下降趨勢(P>0.05)。見表2。

    2.3 大鼠血清睪酮、孕酮含量比較 ELISA結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)后,模型組的大鼠血清中睪酮、孕酮含量較正常組顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);給藥組大鼠血清中的睪酮含量比模型組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。給藥組血清孕酮含量與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    3 討論

    3.1 圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證模型的評(píng)價(jià) 文獻(xiàn)研究表明,采用去勢法建立圍絕經(jīng)期綜合征大鼠模型已有較長的歷史,摘除大鼠雙側(cè)卵巢后雌二醇等雌激素水平迅速降低,在組織形態(tài)學(xué)層面觀察大鼠子宮會(huì)出現(xiàn)子宮內(nèi)膜上皮萎縮的變化,且血管明顯變細(xì)或數(shù)量減少[10],與臨床上圍絕經(jīng)期綜合征婦女卵巢衰退的特征趨同,且手術(shù)簡便,成本較低,完成度高,由此證明摘除大鼠雙側(cè)卵巢的方式是成熟可行的。而CUMS法建立肝郁證模型是目前較為公認(rèn)的一種造模方式,大鼠在一段時(shí)間內(nèi)受到連續(xù)的隨機(jī)溫和負(fù)向刺激,來模擬臨床郁證患者的生活工作環(huán)境,研究發(fā)現(xiàn)此種造模方式會(huì)使動(dòng)物出現(xiàn)類似抑郁癥的臨床表現(xiàn),如情緒低落,活動(dòng)減弱等[11]。另有研究發(fā)現(xiàn),CUMS方法建立模型,動(dòng)物體溫出現(xiàn)升高的趨勢,而抗抑郁藥物地西帕明可以有效降低動(dòng)物體溫,因而認(rèn)為體溫升高和焦慮指數(shù)匹配[12-13],證明該模型可信度較高。且課題組前期多次采用去勢法結(jié)合CUMS法建立圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠模型,成模率較高,造模方法已較為完善和成熟[14-15]。

    3.2 圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證對(duì)大鼠行為學(xué)的影響 在本研究的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中,結(jié)果顯示在各組大鼠的曠場移動(dòng)總距離、垂直次數(shù)以及強(qiáng)迫游泳的相對(duì)靜止時(shí)間在進(jìn)行CUMS造模之前基本相同,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在造模后,模型組的移動(dòng)總距離顯著下降,說明肝郁狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致大鼠的活躍程度降低,出現(xiàn)明顯的情緒異常;同時(shí)大鼠的垂直次數(shù)也顯著減少,說明大鼠的探索欲下降。在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中,造模后的大鼠不動(dòng)時(shí)間有延長的趨勢。研究表明,抑郁狀態(tài)下的大鼠會(huì)出現(xiàn)行為絕望的表現(xiàn)[16],這與本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。而給予柴胡疏肝散治療后,大鼠移動(dòng)總距離和垂直次數(shù)均上升,說明柴胡疏肝散可以有效改善大鼠的行為絕望狀態(tài),使大鼠活躍度與探索欲回升[17]。

    3.3 柴胡疏肝散對(duì)大鼠血清性激素水平的影響 近年來,女性圍絕經(jīng)期綜合征及相關(guān)疾病嚴(yán)重影響到這一階段婦女的生活質(zhì)量和健康水平,因而受到人們關(guān)注。

    圍絕經(jīng)期婦女由于卵巢功能下降會(huì)導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂,睪酮是雄激素的一種,在女性體內(nèi)分泌,可以調(diào)節(jié)脂肪在機(jī)體的分布并且能促進(jìn)蛋白質(zhì)合成[18]。臨床研究中圍絕經(jīng)期婦女睪酮水平下降也與本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,在柴胡疏肝散進(jìn)行干預(yù)治療后,大鼠血清中睪酮水平明顯上升,說明柴胡疏肝散可以有效改善睪酮的異常分泌情況。

    中醫(yī)藥對(duì)治療圍絕經(jīng)期綜合征相關(guān)疾病的效果尚佳,本研究所使用的的方劑為柴胡疏肝散,為解郁的經(jīng)典方。過往研究表明柴胡疏肝散在改善圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠的抑郁焦慮狀態(tài)有較好效果[19]。方中柴胡為君藥,意在疏肝解郁,調(diào)暢情志;香附既能理氣又具有較好的止痛效果,川芎既活血又行氣,二者相合,功效更甚,此二味共為臣藥;陳皮、枳殼、芍藥與甘草理氣、柔肝,為佐藥;另外,甘草調(diào)和諸藥,因而兼為使藥。

    根據(jù)本研究的結(jié)果,在連續(xù)灌胃柴胡舒肝散21 d后,可以降低大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)移動(dòng)距離,減少直立次數(shù),縮短強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間,改善大鼠抑郁狀態(tài),從行為學(xué)角度驗(yàn)證了柴胡疏肝散作為疏肝解郁的經(jīng)典方劑,具有較好的解郁功效。

    綜上而言,柴胡疏肝散可以改善圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠的行為學(xué)表現(xiàn),提高血清睪酮水平,對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證有積極治療作用,但本研究也存在不足和局限,如其他更多性激素與疾病之間的關(guān)系,另外大鼠的抑郁狀態(tài)可能與多種神經(jīng)遞質(zhì)變化相關(guān),未來可進(jìn)行進(jìn)一步的探索。

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    (收稿日期:2021-11-11)

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