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    當歸揮發(fā)油及其主要成分的抗菌活性研究

    2022-05-16 03:34:34楊海雁于喆源班小軍
    生物化工 2022年2期
    關鍵詞:阪崎藁本細胞壁

    楊海雁,于喆源,班小軍

    (張掖市質量檢驗檢測研究院,甘肅張掖 734000)

    當歸又名干歸、山蘄、白蘄和文無,為傘形科多年生草本植物。根圓柱狀,黃棕色,有濃郁香氣,綠白色或帶紫色[1]。當歸以根入藥,藥性甘、辛、溫,具有補血活血、調經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效[2]。在我國現(xiàn)存最早的藥學著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有關于當歸的記載,至今仍在臨床廣泛應用,尤其在婦科用藥中有“十方九歸”之說,被稱為“婦科之圣藥”[3]。當歸中含有內酯類、生物堿類、有機酸類或酚類、氨基酸、微量元素、維生素以及中性揮發(fā)油等多種成分。當歸揮發(fā)油是當歸的主要有效成分之一,其中的化學成分按化學結構分類主要為苯酞類,其中藁本內酯占此類化合物總量的60%以上[4-5]。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    當歸,采于甘肅岷縣;當歸揮發(fā)油,自制;藁本內酯,98.5%,濟寧天之藍生物科技有限公司;胰蛋白胨大豆肉湯、伊紅美藍瓊脂、BP瓊脂基礎、營養(yǎng)瓊脂、孟加拉紅培養(yǎng)基,青島高科技工業(yè)園海博生物技術有限公司;阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基,北京陸橋技術股份有限公司。

    大腸桿菌(ATCC25922)、阪崎腸桿菌(ATCC51329)、金黃色葡萄球菌(CMCC26003)、枯草芽孢桿菌(CMCC63501)、黑曲霉(CMCC98003)、釀酒酵母(ATCC9080),廣東省微生物菌種保藏中心,

    KMD-1000揮發(fā)油裝置,北京科偉永興儀器有限公司;LDZX-50KBS高壓滅菌鍋,上海申安醫(yī)療器械廠;ZSP-SB78生化培養(yǎng)箱,上海齊欣科學儀器有限公司;ZSP-SB057電子天平(百分之一),上海舜宇恒平科學儀器有限公司;BSL-1500ⅡA2-X生物安全柜,濟南鑫貝西生物科技有限公司;10 μL接種環(huán),上海晶安生物科技有限公司;DW-86L158冰箱,浙江捷盛低溫設備有限公司。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 水蒸氣蒸餾法提取當歸揮發(fā)油

    按照《中華人民共和國藥典》規(guī)定的揮發(fā)油提取方法:精密稱取當歸100 g,粉碎后過2號篩,加入蒸餾水約500 mL,靜置浸泡1 h;連接回流冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸5 h,至測定器中油量不再增加。得到淡黃色的揮發(fā)油,揮發(fā)油的含量為0.51%[4]。

    1.2.2 抑菌性能試驗

    溶液配制:當歸精油、藁本內酯分別用純化水配制成濃度為0 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL和5.0 mg/mL的溶液。菌種復活:將實驗室-80 ℃冷凍保存的2代磁珠菌株劃胰蛋白胨瓊脂斜面,37 ℃培養(yǎng)24 h。菌懸液制備:用一次性接種環(huán)從斜面刮取適量菌落,放入生理鹽水中制成1×102~1×103CFU/mL菌懸液。

    將0.45 μm的無菌濾膜浸泡在上述體積分數(shù)的當歸精油、藁本內酯溶液中6 h;將伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、BP瓊脂基礎培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂按產(chǎn)品要求配制好,與當歸精油、藁本內酯溶液一起置于高壓滅菌鍋,121 ℃滅菌15 min;滅菌結束后,將上述培養(yǎng)基的溫度降至45 ℃左右,傾倒無菌平皿。

    分別吸取6種菌懸液0.5 mL于選擇性培養(yǎng)基中,每種菌做兩個平行,用涂布棒涂開。將浸泡好的無菌濾膜取出,用無菌鑷子覆蓋在涂好菌液的培養(yǎng)基表面。將細菌放置在37 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,將真菌放置在28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d,用游標卡尺測量抑菌圈的大小[6-7]。

    2 結果與分析

    2.1 當歸精油的抑菌能力

    如表1所示,當歸精油對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度(MIC)為0.5 mg/mL,抑菌圈直徑分別為5.0 mm和4.1 mm;當濃度為2.0 mg/mL時,抑菌圈達到最大,直徑分別為13.5 mm和13.0 mm。對大腸桿菌、阪崎腸桿菌、黑曲霉、釀酒酵母的MIC為0.8 mg/mL,抑菌圈直徑分別為6.4 mm、6.1 mm、5.5 mm和6.0 mm;當濃度為4.0 mg/mL時抑菌圈達到最大,直徑分別為12.3 mm、11.8 mm、10.9 mm和11.5 mm。

    表1 當歸精油抑菌圈大?。▎挝唬簃m)

    2.2 藁本內酯的抑菌能力

    如表2所示,藁本內酯對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的MIC為0.8 mg/mL,抑菌圈直徑分別為4.7 mm和3.9 mm;當濃度為2.0 mg/mL時抑菌圈達到最大,直徑分別為12.4 mm和11.8 mm。對大腸桿菌、阪崎腸桿菌、黑曲霉、釀酒酵母的MIC為0.8 mg/mL,抑菌圈直徑分別為6.0 mm、5.8 mm、4.8 mm和5.7 mm;當濃度為4.0 mg/mL時抑菌圈達到最大,直徑分別為11.2 mm、10.8 mm、10.1 mm和10.5 mm。

    表2 藁本內酯抑菌圈大小(單位:mm)

    3 結論

    當歸精油和藁本內酯對細菌(金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和阪崎腸桿菌)的抑制作用優(yōu)于對真菌(黑曲霉和釀酒酵母)的抑制作用,這可能是因為細菌細胞壁的主要成分是肽聚糖(由氨基酸和糖類聚合而成),而真菌細胞壁的主要成分是幾丁質(一種多糖聚合物),肽聚糖的分子量小于幾丁質,當歸精油和藁本內酯更容易滲透,通過破壞細胞壁的結構引起菌種死亡[8-11]。

    當歸精油和藁本內酯對革蘭氏陽性菌(金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌)的抑制效果要優(yōu)于革蘭氏陰性菌(大腸桿菌、阪崎腸桿菌),可能是因為革蘭氏陰性菌的細胞壁外有一層膜,限制了疏水性物質在細胞壁脂多糖中的擴散,使得當歸精油和藁本內酯對細胞壁的破壞程度小于革蘭氏陽性菌[12-14]。

    當歸精油和藁本內酯的對細菌和真菌的抑菌效果基本一致,由此可以推斷出藁本內酯在當歸精油抑菌性能中起重要作用。

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