電針次髎穴治療壓力性尿失禁大鼠的穴位特異性研究

張薇薇 蔡明星 莫倩 楊丹

1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550002；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院針灸科，貴州貴陽(yáng) 550001

壓力性尿失禁是常見(jiàn)的尿失禁類型，好發(fā)于絕經(jīng)期前后的中老年婦女，呈年輕化趨勢(shì)，與膀胱尿道功能紊亂及盆底肌肉功能失調(diào)有關(guān)。主要表現(xiàn)為腹壓增加時(shí)，尿液會(huì)不自主漏出，而尿液是否流出由膀胱逼尿肌收縮和膀胱壁對(duì)尿液的張力壓控制[1-2]。研究顯示壓力性尿失禁的發(fā)病率高達(dá)30%[3-4]，對(duì)患者的生存質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響。電針對(duì)壓力性尿失禁療效確切[5]，結(jié)合古、今選穴規(guī)律[4-6]，發(fā)現(xiàn)次髎穴對(duì)膀胱調(diào)節(jié)效應(yīng)明顯，但目前尚缺乏次髎治療壓力性尿失禁具有穴位特異性的文獻(xiàn)支持。故本研究觀察電針不同類型穴位對(duì)壓力性尿失禁模型大鼠尿流動(dòng)力學(xué)及盆底結(jié)締組織膠原水平表達(dá)的影響，分析不同神經(jīng)節(jié)段穴位對(duì)膀胱功能的調(diào)節(jié)效應(yīng)，從而探討次髎穴治療壓力性尿失禁的穴位特異性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8 周齡清潔級(jí)雌性SD 大鼠50 只，并準(zhǔn)備同一批次大鼠15 只備用，體重180～220 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004，合格證號(hào)：No.4300470001583，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。本研究通過(guò)貴州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

1.2 主要儀器、試劑和藥品

BL-420 生物機(jī)能信號(hào)采集處理系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；壓力傳感器（埃德儀器國(guó)際貿(mào)易上海有限公司）；Ⅰ型膠原蛋白（type Ⅰcollagen，collagen Ⅰ）（AF7001，Affinity）；CTGF（23936-1-AP，Proteintech）；華佗牌電子針灸儀、0.25 mm×25 mm 無(wú)菌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；微量注射泵（保定蘭格恒流泵有限公司）。

1.3 動(dòng)物分組

將大鼠按隨機(jī)數(shù)表法分為正常組、模型組、次髎組、非經(jīng)穴組、三陰交組、每組各10 只。

1.4 模型制備及術(shù)后護(hù)理

正常組以正常飲食喂養(yǎng)，不行任何手術(shù)。其余四組均行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)+陰道擴(kuò)張術(shù)模擬建立壓力性尿失禁大鼠模型[7-9]。術(shù)后72 h 內(nèi)每隔24 h 肌肉注射青霉素鈉20 萬(wàn)單位抗炎處理。

1.5 干預(yù)措施

1.5.1 穴位定位 參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[10]進(jìn)行穴位定位。①三陰交：于后肢內(nèi)踝尖直上10 mm 左右，直刺4～5 mm；②非經(jīng)穴：于次髎穴旁開(kāi)10 mm 處，直刺15 mm；③次髎穴[11]：大鼠只有3 對(duì)骶后孔且以第2 骶神經(jīng)調(diào)控膀胱功能為主，故其第2 骶后孔相當(dāng)于人類的中髎和次髎穴。于第2、3 骶骨棘突間隙正中旁開(kāi)約5 mm，直刺入第2 骶后孔約15 mm，觸及骶2 神經(jīng)根前支。

1.5.2 電針干預(yù) 正常組、模型組不進(jìn)行電針干預(yù)。造模后14 d 行第1 次指標(biāo)檢測(cè)，結(jié)束后采用疏密波和2/15 Hz 頻率對(duì)次髎組、非經(jīng)穴組、三陰交組相應(yīng)穴位進(jìn)行電針干預(yù)20 min，每日1 次，共2 周。干預(yù)結(jié)束后，行第2 次尿流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，記錄各組相應(yīng)數(shù)據(jù)，以評(píng)價(jià)電針各穴位對(duì)壓力性尿失禁大鼠的影響及差異。

1.6 觀察指標(biāo)及方法

干預(yù)前后，分別對(duì)各組大鼠行尿流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，并記錄最大膀胱容量（maximal bladder capacity，MBC）及腹壓漏尿點(diǎn)壓（abdominal leak point pressure，ALPP）；檢測(cè)結(jié)束后處死所有大鼠，取恥尾肌和尿道外括約肌行免疫組化檢測(cè)，觀察collagen Ⅰ、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（connective tissue growth factor，CTGF）表達(dá)水平。

1.6.1 尿流動(dòng)力學(xué)的測(cè)量 各組大鼠14 d 后均采用BL-420 生物機(jī)能系統(tǒng)行尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)：20%烏拉坦600 mg/kg 腹腔麻醉后仰臥位固定，消毒后將硬膜外導(dǎo)管經(jīng)尿道插入膀胱內(nèi)，按速度0.1 ml/min 向膀胱內(nèi)灌注美蘭+生理鹽水溶液，第1 滴液體流出時(shí)的微量注射泵計(jì)數(shù)即為MBC。排空膀胱，灌注量到1/2 MBC時(shí)引發(fā)大鼠噴嚏，該膀胱壓為ALPP。

1.6.2 噴嚏實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)SD 大鼠是否成模與尿流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行。灌注1/2 MBC 的美蘭+生理鹽水溶液，利用胡須刺激鼻孔引發(fā)大鼠噴嚏，觀察此時(shí)尿道口是否有藍(lán)色液體漏出。若有則為噴嚏試驗(yàn)陽(yáng)性，反之為陰性。目前噴嚏實(shí)驗(yàn)被認(rèn)為是檢驗(yàn)壓力性尿失禁是否成模的金標(biāo)準(zhǔn)[12-13]。

1.6.3 免疫組化檢測(cè) 腹腔注射過(guò)量麻醉處死大鼠，分別取恥尾肌、膀胱頸尿道括約肌做石蠟切片，使用collagen Ⅰ、CTGF 行免疫組化，所有步驟按說(shuō)明書(shū)操作。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t檢驗(yàn)，多組之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

噴嚏試驗(yàn)陰性大鼠7 只，造模中因個(gè)體麻醉敏感死亡3 只，干預(yù)期間胃脹氣死亡3 只（分別為三陰交組2 只、非經(jīng)穴組1 只），均使用同一批次大鼠補(bǔ)充。

2.2 各組大鼠電針干預(yù)前后ALPP 值比較

干預(yù)前，與正常組比較，模型組ALPP 值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模型組、次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。干預(yù)后，次髎組、非經(jīng)穴組ALPP 值較干預(yù)前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；干預(yù)后，與正常組比較，模型組ALPP 值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組ALPP 值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與次髎組比較，三陰交、非經(jīng)穴組ALPP 值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠電針干預(yù)前后ALPP 值比較（mmHg，）

表1 各組大鼠電針干預(yù)前后ALPP 值比較（mmHg，）

注 與正常組同期比較，aP＜0.05；與模型組同期比較，bP＜0.05；與次髎組同期比較，cP＜0.05。ALPP：腹壓漏尿點(diǎn)壓。1 mmHg=0.133 kPa

2.3 各組大鼠電針干預(yù)前后MBC 值比較

干預(yù)前，與正常組比較，模型組MBC 值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模型組、次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。干預(yù)后，正常組、次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組MBC 值均較干預(yù)前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；干預(yù)后，與正常組比較，模型組MBC 值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組MBC 值均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與次髎組比較，三陰交、非經(jīng)穴組MBC 值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠電針干預(yù)前后MBC 值比較（ml，）

表2 各組大鼠電針干預(yù)前后MBC 值比較（ml，）

注 與正常組同期比較，aP＜0.05；與模型組同期比較，bP＜0.05；與次髎組同期比較，cP＜0.05。MBC：最大膀胱容量

2.4 各組大鼠恥尾肌和膀胱頸尿道括約肌中collagenⅠ、CTGF 表達(dá)水平的比較

與正常組比較，模型組collagen Ⅰ、CTGF 的表達(dá)水平顯著降低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組collagen Ⅰ、CTGF 的表達(dá)水平均顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05 或P＜0.01）；與次髎組比較，三陰交組、非經(jīng)穴組collagen Ⅰ、CTGF 的表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖1～2。

圖1 各組大鼠恥尾肌及膀胱頸尿道括約肌組織中collagen Ⅰ的表達(dá)水平（LDP 法，400×）

圖2 各組大鼠恥尾肌及膀胱頸尿道括約肌組織中CTGF 的表達(dá)水平（LDP 法，400×）

3 討論

壓力性尿失禁在祖國(guó)醫(yī)學(xué)中屬于“膀胱咳”范疇，主要病機(jī)為膀胱氣化失司。西醫(yī)認(rèn)為壓力性尿失禁屬于盆底障礙性疾病，主要機(jī)制包括盆底肌肉損害與支配盆底肌的神經(jīng)發(fā)生失神經(jīng)損害[14-19]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[15]，結(jié)締組織的筋膜和韌帶中，collagen Ⅰ對(duì)支持結(jié)構(gòu)提供了支撐效果和高抗張強(qiáng)度。CTGF 中富含半胱氨酸，對(duì)膠原分泌及成纖維細(xì)胞增殖起到刺激效果，也對(duì)機(jī)體創(chuàng)傷提供修復(fù)作用[20-21]。從神經(jīng)節(jié)段來(lái)看，三陰交屬于脛神經(jīng)節(jié)段效應(yīng)點(diǎn)，其運(yùn)動(dòng)神經(jīng)由L5～S1支配，中醫(yī)學(xué)上又歸屬足太陰脾經(jīng)，有通調(diào)水道之效，對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病有調(diào)節(jié)效果；次髎穴的沖動(dòng)傳入信號(hào)投射在S1～S3節(jié)段，深處有S2～S3神經(jīng)根前支，屬于骶神經(jīng)節(jié)段效應(yīng)點(diǎn)，歸屬足太陽(yáng)膀胱經(jīng)，針刺次髎可促進(jìn)膀胱氣化，調(diào)節(jié)其開(kāi)闔頻度；非經(jīng)穴與次髎屬同一神經(jīng)節(jié)段但不屬經(jīng)脈。S2～S4神經(jīng)對(duì)排尿功能有極關(guān)鍵的影響，陰部神經(jīng)由次髎深處的S2神經(jīng)根前支發(fā)出，受尿道外括約肌支配。刺激膀胱神經(jīng)節(jié)段的腧穴，則會(huì)影響支配膀胱的神經(jīng)纖維電活動(dòng)，引出一系列的膀胱反射。近年研究[22-26]表明電針次髎穴，刺激陰部神經(jīng)，達(dá)到誘發(fā)盆底肌收縮，提高尿道外括約肌肌力的效果。

本研究結(jié)果顯示，電針刺激“次髎”“三陰交”“非經(jīng)穴”對(duì)壓力性尿失禁均有療效。但電針“次髎”對(duì)提升膀胱尿道壓力、修復(fù)盆底組織膠原纖維障礙方面效果更佳。干預(yù)后次髎組各項(xiàng)指標(biāo)與其他各組比較均明顯升高，顯示電針次髎穴優(yōu)于同神經(jīng)節(jié)段非經(jīng)穴和異神經(jīng)節(jié)段三陰交穴，提示次髎對(duì)壓力性尿失禁的改善效果具有相對(duì)特異性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，電針次髎穴對(duì)調(diào)節(jié)膀胱過(guò)度活動(dòng)療效確切[27]。本研究設(shè)置次髎組與其旁開(kāi)10 mm 處的非經(jīng)穴組進(jìn)行對(duì)照，明確深刺次髎是針尖觸及骶神經(jīng)前支，證實(shí)這種特異效應(yīng)與次髎穴位相關(guān)，針刺次髎穴相同神經(jīng)節(jié)段分布區(qū)域內(nèi)非穴點(diǎn)難以產(chǎn)生膀胱抑制效應(yīng)，這與前期研究結(jié)論一致[28]。正常組MBC 也出現(xiàn)差異，原因或是隨著大鼠周齡增加，其膀胱容量亦逐漸增大。

綜上所述，電針次髎穴可通過(guò)刺激骶神經(jīng)，從而調(diào)節(jié)膀胱、尿道括約肌及盆底等骶神經(jīng)支配的效應(yīng)器官功能狀態(tài)，起到改善壓力性尿失禁癥狀、修復(fù)盆底組織損傷的效果，其效應(yīng)具有穴位特異性。