高效降解脫鉻皮屑的菌株篩選

張曉偉 ，盧欣雨 ，陳琴 ，趙勝宗 ，劉彥 ＊

（1. 四川大學(xué)皮革化學(xué)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610065；2. 四川大學(xué)輕工科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都 610065）

1 前言

化學(xué)法（酸法、堿法）和生物法（酶法和微生物法）是制革廢棄物降解的主要方式[1-4]?；瘜W(xué)法主要是通過利用較 強(qiáng)的酸性試劑或堿性試劑在劇烈的條件下將制革廢棄物水解，該方法不僅耗能 大、腐蝕設(shè)備，而且對(duì)環(huán)境具有一定程度的二次污染[5-6]。近年來，隨著環(huán)境問題的日益突出和科技的 發(fā)展，采用生物技術(shù)處理制革廢棄物受到了廣泛的關(guān) 注 。其實(shí)酶法和微生物法處理制革廢棄物的原理相同，皆是利用酶對(duì)底物的水解作用，但是微生物法處理不需要單獨(dú)加酶，而是依靠微生物自身代謝產(chǎn) 生 的酶來水解底物。與酶法相比，微生物發(fā)酵法才是農(nóng)業(yè)制備有機(jī)肥料的主要方式，因?yàn)槠さ鞍捉?jīng)酶法降解 后，產(chǎn)物成分單一 ，主要為氨基酸和多肽[7]，而 經(jīng)微生物發(fā)酵尤其是經(jīng)過植物益生菌發(fā)酵后，其產(chǎn)物中不僅含有大量的游離氨基酸、多肽等植物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ，還含有微生物代謝產(chǎn)生的植物內(nèi)源酶 、抗菌活性物質(zhì)以及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（細(xì)胞分裂素 、吲 哚 乙酸等）等有利于植物生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)[8-10]。

含鉻廢革料的主要成分為膠原蛋白，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，要想采用微生物法充分降解制革廢料就需要篩選出特定的膠原蛋白降解菌。由于發(fā)酵產(chǎn)物是用于制備生物有機(jī)肥料，因此篩選出的菌株不僅要 能 快速高效降解膠原蛋白，還應(yīng)為農(nóng)業(yè)中常用的有益菌（NY/T1109—2017 中的第一級(jí)菌株）。此類菌株不會(huì)產(chǎn)生對(duì)植物有毒害作用的物質(zhì)，還會(huì)對(duì)大多數(shù)植物有一定的促生作用[11]，因此，采用此類菌株進(jìn)行脫鉻皮的發(fā)酵及將其發(fā)酵產(chǎn)物應(yīng)用于農(nóng)業(yè)方面更安全、更可靠。

藍(lán)濕皮屑是含膠原蛋白的高鉻含量制革廢料[12]，用 微 生 物 直 接 對(duì) 其 進(jìn) 行 降 解 處 理 對(duì) 微 生 物 的 要 求較高，處理難度較大。需要高耐鉻的膠原蛋白降解菌[13]，同時(shí)降解液中還會(huì)含有極高濃度的鉻，無法達(dá)到農(nóng)業(yè)應(yīng)用的要求。因此，本實(shí)驗(yàn)研究將用經(jīng)過脫鉻處理的皮屑作為微生物發(fā)酵的原料，通過初篩和復(fù) 篩[14-17]，篩 選 獲 得 最 優(yōu) 的 膠 原 蛋 白 降 解 菌 同 時(shí) 又是農(nóng)業(yè)益生菌的菌株，為下一步對(duì)脫鉻皮屑進(jìn)行發(fā)酵 處理，得到富 含 游 離 氨 基 酸 、多 肽 的 發(fā) 酵 液 打 下基礎(chǔ)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

菌 種 來源，自然降解 的 牛皮 廢 料 ；牛 肉 膏(BR)，酵母粉(BR)，蛋白胨(BR)，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；明膠(AR)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；硫酸銨(AR)，磷酸二氫鉀(AR)，磷酸氫二鉀(AR)，硫酸鎂 (AR)，葡萄糖(AR)，乙酸 (AR)，碘酸鉀(AR)，成都 市 科 隆 化 學(xué) 品 有 限 公 司 ；氯 化 鈉 (AR)，氫 氧 化 鈉(AR)，檸 檬 酸鈉 (AR)，成 都市 科 龍化工 試 劑廠 ；乙 酸鈉 (AR)，茚 三酮 (AR)，成 都金 山 化學(xué)試 劑 有限 公 司 ；無水乙醇(AR)，成都長(zhǎng)聯(lián)化工試劑有限公司。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

SHA-B 雙功能水浴恒溫振蕩器，常州市億能實(shí)驗(yàn)儀器廠；HSP-80B 恒溫恒濕培養(yǎng)箱，上海坤天實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；SQP 電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；UV-1100 型紫外可見分光光度計(jì)，上海美譜達(dá)儀器有限公司；PHS-3C 精密酸度計(jì)，上海儀分科學(xué)儀器有限公司。

2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

2.2.1 發(fā)酵菌株篩選用培養(yǎng)基[5-6]

種子培養(yǎng)基：牛肉膏 3.0 g，蛋白胨 10.0 g，NaCl 5.0 g，水 1000 mL，pH 用氫氧化鈉調(diào)至 8.0。

明膠培養(yǎng)基：明膠 25.0 g，KH2PO42.0 g，NaCl 5.0 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，瓊脂 20.0 g，水 1000 mL，pH 用氫氧化鈉調(diào)至 8.0。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：酵母粉 2.5 g，葡萄 糖 5.0 g，KH2PO414.0 g，KH2PO46.0 g，NaCl 5.0g，MgSO4·7H2O 0.2 g，

檸檬酸鈉 1.0 g，硫酸銨 2.0 g，瓊脂 20.0 g，水1000 mL，pH 用氫氧化鈉調(diào)至 8.0。

LB 培養(yǎng)基：酵母粉 5.0 g，蛋白胨 10.0 g，NaCl 10.0 g，水 1000 mL，pH 用氫氧化鈉調(diào)至 8.0。

2.2.2 菌株初篩

取 1 mL 自然降解的牛皮廢料浸出液，用無菌水稀釋后，在明膠培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線分離，將劃好線的培養(yǎng)基置于 37 ℃下培養(yǎng) 48 h。觀察菌落生長(zhǎng)情況，挑選出培養(yǎng)基上具有明顯透明圈的單菌落，并做好編號(hào)。將有編號(hào)的單菌落置于液體種子培養(yǎng)基中活化 12 h，然后取種子液在固體種子培養(yǎng)基上劃線并培養(yǎng) 24 h 以獲取單菌落。將獲取的單菌落通過點(diǎn)種接種到明膠培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 36 h 后，在菌落周圍滴加酸性汞試劑，觀察并記錄水解圈的大小。

2.2.3 菌株復(fù)篩及發(fā)酵培養(yǎng)基的確定

將基礎(chǔ)培養(yǎng)基和 LB 培養(yǎng)基分別作為初篩菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基，并往發(fā)酵培養(yǎng)基中添加一定量的脫鉻皮屑（脫鉻皮屑質(zhì)量與發(fā)酵培養(yǎng)基體積比為 1∶20），脫鉻皮屑與發(fā)酵培養(yǎng)基混勻后，置于滅菌鍋中于121 ℃滅菌 20 min，放置備用。將初篩獲取的菌株于液體種子培養(yǎng)基中培養(yǎng) 24 h 后，以 1%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵開始后每隔 6 h 取一次樣，測(cè)定樣品中游離氨基含量。根據(jù)發(fā)酵液中游離氨基的含量，篩選出能夠快速降解脫鉻皮屑的菌株，并對(duì)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基和 LB 培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基的效果進(jìn)行比較，以獲取較優(yōu)的發(fā)酵培養(yǎng)基?？瞻讓?duì)照組不加脫鉻皮屑，其它操作相同。

2.2.4 菌株鑒定

將復(fù)篩獲取的最優(yōu)菌株送往北京擎科偉業(yè)生物技術(shù)有限公司進(jìn)行 16S rDNA測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果對(duì)菌株進(jìn)行初步鑒定。引物選擇細(xì)菌通用引物 27F、1492R。PCR 反應(yīng)體系（20 μL）：10 μL 2×Pre Mix，0.8 μL 引物 27F（10 mmol/L），0.8 μL 引物 1492R（10 mmol/L），1 μL DNA 模板，7.4 μL ddH2O。PCR 反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性 3 min；95 ℃變性 15 s，55 ℃退火15 s，72 ℃延伸 15 s，運(yùn)行 30 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸 5 min。

2.2.5 游離氨基的測(cè)定

游離氨基的測(cè)定方法參照羅艷華等[18]對(duì)蛋白水解物中游離氨基的測(cè)定，并對(duì)該方法中乙酸—乙酸鈉緩沖液的配制進(jìn)行了改進(jìn)。原方法中乙酸—乙酸鈉緩沖液的配制較為繁瑣，因此采用應(yīng)賢強(qiáng)等[19]的乙酸—乙酸鈉緩沖液配制方法，來替換原方法中緩沖液的配制方法。

2.2.5.1 測(cè)試用溶液的配制

（1）茚三酮溶液

準(zhǔn)確稱取 0.5 g 茚三酮，用無水乙醇溶解并定容于 100 mL 棕色容量瓶中。

（2）乙酸—乙酸鈉緩沖液

稱取 120.0 g 乙酸鈉，加入 4.0 mL 的無水乙酸或冰醋酸，加水定容于 1000 mL 的容量瓶中。

（3）碘酸鉀溶液

準(zhǔn)確稱取 0.3 g 碘酸鉀，加入 90 mL 蒸餾水溶解后，再加入 60 mL 的無水乙醇，使其混合均勻。

（4）標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取 0.1 g 甘氨酸，加水定容于 100 mL 棕色容量瓶中，再分別取 0、1、2、3、4、5 mL 該甘氨酸溶液于 6 個(gè) 100 mL 容量瓶中定容，并按濃度從小到大的順序依次做好編號(hào)。

2.2.5.2 游離氨基的測(cè)定

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確吸取 1 mL 上述 6 組標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于 6支比色管中，再依次加入 1 mL 緩沖液、1 mL 茚三酮溶液，封好搖勻后于沸水浴中加熱 15 min，然后取出放到冷水中冷卻 15 min。冷卻結(jié)束后，向每支比色管中分別加入 5 mL 碘酸鉀溶液，并用蒸餾水定容至 10 mL。將紫外可見分光光度計(jì)波長(zhǎng)調(diào)至 568 nm，將 0 號(hào)比色管中的空白樣吸光度調(diào)為 0，然后依次測(cè)出其他 5 組樣品的吸光度。以游離氨基含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到線性回歸方程。

（2）發(fā)酵液中游離氨基的測(cè)定

將發(fā)酵液進(jìn)行一定的稀釋后，準(zhǔn)確吸取 1 mL置于比色管中，再依次加入 1 mL 緩沖液、1 mL 茚三酮溶液，封好搖勻后于沸水浴中加熱 15 min 后取出，放到冷水中冷卻 15 min，再加入 5 mL 碘酸鉀溶液，并用蒸餾水定容至 10 mL。用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng) 568 nm 處，測(cè)定樣品的吸光值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線中游離氨基含量與吸光度的對(duì)應(yīng)關(guān)系，得到發(fā)酵液中游離氨基的含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 菌株初篩結(jié)果

初篩主要以富含明膠的培養(yǎng)基作為篩選培養(yǎng)基，因?yàn)槊髂z是膠原蛋白的部分降解產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)和成分都與膠原蛋白相似，理論上能夠降解明膠的微生物，在很大程度上也能降解膠原蛋白。

將水解圈大的單菌落通過點(diǎn)種接種到明膠培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 36 h 后，各菌株水解圈的大小如圖 1所示。

通過初篩，共獲取 6 株具有水解圈的菌株，其編號(hào)分別為 P-1、P-2、P-3、P-4、P-5 和 P-6。由圖 1直觀觀察可以看出：獲取的 6 株菌株在明膠培養(yǎng)基上具有大小不一的水解圈，其中，P-6 的水解圈和菌落大小都是最大的，P-4 的水解圈大小次之，P-2、P-3 和 P-5 的水解圈較小，P-1 的水解圈最小，說明P-6 和 P-4 的菌株都能夠快速降解明膠。

圖1 菌落水解圈圖Fig.1 Pictures of colony hydrolysis cycles

對(duì)各菌株的水解圈和菌落大小進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定的結(jié)果如表 1 所示。

由表 1 可知，在明膠培養(yǎng)基上培養(yǎng) 36 h 后，P-4菌的水解圈直徑與菌落直徑的比值最大，達(dá)到了4.57，P-2 和 P-6 菌的水解圈直徑與菌落直徑的比值也都達(dá)到 4 及以上，分別為 4.00 和 4.13，其它菌的水解圈直徑與菌落直徑的比值也皆大于等于3.20，可見該 6 株菌對(duì)明膠皆有一定的降解作用?？紤]到明膠和皮蛋白在分子大小和結(jié)構(gòu)上有差異，將進(jìn)行復(fù)篩，以獲取對(duì)脫鉻皮屑具有最強(qiáng)降解 作用的菌株。

表1 初篩菌的菌落和水解圈大小Tab.1 Diameters of the colony of the screened strains and hydrolysis circles

3.2 菌株復(fù)篩及發(fā)酵培養(yǎng)基的確定

3.2.1 菌株復(fù)篩

復(fù)篩以膠原蛋白為微生物的主要營(yíng)養(yǎng)源，通過測(cè)定蛋白質(zhì)的水解度來評(píng)估菌株對(duì)膠原蛋白降解能力的大小。比較直觀、可靠，實(shí)際中應(yīng)用較多的是游離氨基含量測(cè)定法。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的水解是靠肽鍵的斷裂來實(shí)現(xiàn)的，蛋白質(zhì)每斷開一個(gè)肽鍵，就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)游離氨基，游離氨基越多就說明蛋白質(zhì)的水解越充分，菌株對(duì)蛋白質(zhì)的水解作用就越強(qiáng)。

3.2.1.1 發(fā)酵培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基，以 1%的接種量接種。發(fā)酵開始后每隔一定時(shí)間取一次樣，并測(cè)定相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)下發(fā)酵液中游離氨基的含量。實(shí)驗(yàn)測(cè)定的不同時(shí)間點(diǎn)下、不同菌株的游離氨基含量如表 2所示。

由表 2 可知，菌株發(fā)酵液中的游離氨基含量均隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。其中 P-1、P-2、P-3 和 P-5 菌發(fā)酵液中 的 游 離 氨基含量隨發(fā) 酵 時(shí)間的延長(zhǎng)增加緩慢，而 P-4 和 P-6 菌發(fā)酵液中的游離氨基含量隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)增加較快，且從 6 h開始，這兩株菌產(chǎn)生的游離氨基含量皆明顯高于其它 4 株菌，說明 P-4 和 P-6 菌對(duì)脫鉻皮屑具有更強(qiáng)的水解作用。這與初篩得到結(jié)果相一致，說明以明膠作為底物的初篩方式是比較可行的。

表2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)發(fā)酵液中的游離氨基濃度Tab.2 Free amino content of the fermentation broth in basic medium

P-4 菌和 P-6 菌相比，P-4 菌發(fā)酵液中游離氨基含量隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)增加更快，在發(fā)酵 24 h 后發(fā)酵液中的總游離氨基濃度更高，達(dá)到了 5.56×10-5mol/mL， 比 P-6 菌 的 總 游 離 氨 基 含 量 高 了13.93%。因此，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，P-4菌株對(duì)脫鉻皮屑的水解作用最強(qiáng)。

3.2.1.2 發(fā)酵培養(yǎng)基為 LB 培養(yǎng)基

以 LB 培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，每隔一定時(shí)間取樣測(cè)定發(fā)酵液中游離氨基的含量。菌株發(fā)酵培養(yǎng)不同時(shí)間，其發(fā)酵液中的游離氨基含量如表 3 所示。

表3 LB 培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)發(fā)酵液中游離氨基的濃度Tab.3 Free amino content of the fermentation broth in LB medium

以 LB 培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基，與表 2 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，不同菌株發(fā)酵液中游離氨基濃度隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)都呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，如表 3 所示。而且在不同發(fā)酵時(shí)間段發(fā)酵液中游離氨基濃度均比表 2中顯示的相同時(shí)間段內(nèi)的要高，這是由于 LB 培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)更豐富，其自身就含有較多的氨基酸、多肽等具有游離氨基的化合物。

發(fā)酵 24 h，實(shí)驗(yàn)菌株發(fā)酵液中游離氨基濃度皆在 4.5×10-5～5.5×10-5mol/mL 之間，游離氨基濃度相差不大，而 P-4 菌株發(fā)酵液中的游離氨基濃度還是明顯高于其它 5 株菌，達(dá)到了 7.77×10-5mol/mL，比 P-6 菌 株 發(fā) 酵 液 中 的 游 離 氨 基 濃 度 還 高 了46.88%。因此，以 LB 培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，P-4菌株也表現(xiàn)出了對(duì)脫鉻皮屑較強(qiáng)的水解作用。

以兩種不同的培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不論是以基礎(chǔ)培養(yǎng)基還是以 LB 培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基，P-4 菌株的發(fā)酵液中游離氨基濃度都是最高的，說明 P-4 菌株對(duì)脫鉻皮屑的水解作用最強(qiáng)。因此選 P-4 菌株作為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)用菌株。

3.2.2 發(fā)酵培養(yǎng)基的確定

由 3.2.1 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：以基礎(chǔ)培養(yǎng)基和 LB培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基，P-4 菌株發(fā)酵液中游離氨基濃度都是最高的，但 P-4 在這兩種培養(yǎng)基中產(chǎn)生的游離氨基的濃度卻不相同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 4。

表4 發(fā)酵液中游離氨基的濃度Tab.4 Free amino content of fermentation broth

由表 4 可以看出：相同發(fā)酵時(shí)間內(nèi)，發(fā)酵培養(yǎng)基為 LB 培養(yǎng)基的發(fā)酵液中總游離氨基含量都比基礎(chǔ)培養(yǎng)基的高，而游離氨基濃度的增加值（與空白組未加脫鉻皮屑相比） 卻都比基礎(chǔ)培養(yǎng)基的要低。造成這一現(xiàn)象的原因可能是 LB 培養(yǎng)基本身就含有大量的游離氨基酸、多肽類等營(yíng)養(yǎng)物，此類營(yíng)養(yǎng)物的分子皆比脫鉻皮屑的分子要小得多，更容易為P-4 菌株所利用，脫鉻皮屑被分解利用的量相對(duì)較少，因此發(fā)酵液中游離氨基的 增加自然較少；而以基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基，其營(yíng)養(yǎng)成分相對(duì)匱乏，P-4 菌株只能以脫鉻皮屑為營(yíng)養(yǎng)源，因此發(fā)酵液中游離氨基的增值均比 LB 培養(yǎng)基高。對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基和 LB 培養(yǎng)基的游離氨基含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得基礎(chǔ)培養(yǎng)基游離氨基濃度為 2.80×10-6mol/mL，LB 培養(yǎng)基游離氨基濃度為 2.77×10-5mol/mL。LB 培養(yǎng)基的游離氨基含量遠(yuǎn)高于基礎(chǔ)培養(yǎng)基。由此可見以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基更有 利于脫鉻皮屑的微生物降解。

3.3 菌株鑒定

將 P-4 菌的 16S rDNA 序列 （GenBank 登錄號(hào)為 OL347900） 提 交 到 https://www.ezbiocloud.net/identify[20]，通過 identify 進(jìn)行檢索和同源性比較，用MEGA7.0 軟件，以 Neighbor-joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果如圖 2 所示。

圖2 P-4 菌的系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)構(gòu)圖Fig.2 Phylogenetic tree of P-4 strain

篩 選 出 的 P-4 菌 株 與 Bacillus licheniformis ATCC 14580T（AE017333）的 16S rDNA 的相似水平達(dá)到了 99%以上，可基本確定篩選出的 P-4 菌為地衣芽孢桿菌。

由菌株鑒定結(jié)果顯示，P-4 菌為地衣芽孢桿菌。由農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn) 《微生物肥料生物安全通用技術(shù)規(guī)范》（NY/ T1109—2017）可知地衣芽孢桿菌為農(nóng)用較高安全級(jí)別的菌株，具有促生以及分解磷鉀化合 物的作用，所以篩選得到的 P-4 菌株為能夠發(fā)酵降解脫鉻皮屑的農(nóng)用有益菌。

4 結(jié)論

（1）通過明膠培養(yǎng)基初篩，共 獲 得 6 株具有水解圈的菌株。

（2）通過發(fā)酵培養(yǎng)基復(fù)篩，優(yōu)選出 P-4 菌株作為脫鉻皮屑發(fā)酵水解菌株。

（3） 通過基礎(chǔ)培養(yǎng)基和 LB 培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較，確定基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為脫鉻皮屑的微生物發(fā)酵降解培養(yǎng)基。

（4）P-4 菌株經(jīng)過 16S rDNA 法鑒定，初步確定為地衣芽孢桿菌，因此滿足了菌株篩選既要能夠有效發(fā)酵水解脫鉻皮屑，又要為農(nóng)業(yè)益生菌的要求。