HIV感染患者CXCR5、HCY、RANTES的表達(dá)及相關(guān)性分析

陳秀芬 潘崇南 金輝

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是引發(fā)艾滋?。╝cquired immuno deficiency syndrome，AIDS）的主要原因[1,2]。臨床資料顯示，當(dāng)HIV 病毒侵入機(jī)體后，對機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)起攻擊，造成人體細(xì)胞免疫、體液免疫受損，從而導(dǎo)致機(jī)體免疫能力下降，繼而引發(fā)一系列的免疫缺陷疾病，嚴(yán)重者甚至發(fā)展為機(jī)體全身衰竭而亡，嚴(yán)重威脅人類健康及生活質(zhì)量[3,4]。尋求有效、準(zhǔn)確的AIDS生物檢測標(biāo)志物對改善死亡率和機(jī)會性感染疾病發(fā)病率具有重要意義[5]。隨研究深入發(fā)現(xiàn)，多種免疫細(xì)胞及其釋放的細(xì)胞因子與HIV/AIDS 的發(fā)病機(jī)制存有一定關(guān)聯(lián)，在抗HIV 病毒免疫應(yīng)答過程中均有參與，有望成為抗HIV 病毒的新的輔助途徑[6,7]。本次研究通過觀察HIV 感染者趨化因子CXCR 受體5（CXCR5）、同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）、調(diào)節(jié)活化正常T 細(xì)胞表達(dá)與分泌的趨化因子（regulation upon activation normal T-cell expressed and secreted，RANTES）水平變化，了解HIV 感染情況，并分析上述指標(biāo)與HIV感染的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年10 月至2020 年10 月期間在臺州市第一人民醫(yī)院就診的HIV 感染患者73 例為HIV 感染組，其中男性44 例、女性29 例；年齡19～65 歲，平均年齡（42.00±19.55）歲，感染時間3～7 年，平均感染時間（5.00±1.70）年；根據(jù)HIV 感染分類系統(tǒng)及ADIS 診斷標(biāo)準(zhǔn)將HIV 感染組分為無癥狀者32 例，有癥狀者41 例。同期選取70 名體檢者為對照組，其中男性40 例、女性30 例；年齡20～65 歲，平均年齡（42.50±19.12）歲。兩組患者基線資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。

1.2 納排標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)為：①符合《中國艾滋病診療指南（2018 年版）》中HIV 感染相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；②免疫印跡法確認(rèn)HIV-1 型抗體陽性；③體檢者近1 年內(nèi)未服用降脂藥物，身體健康無任何疾病；④近1 個月內(nèi)無尿道感染癥狀或未被診斷為梅毒、淋病、尿道感染；⑤無免疫系統(tǒng)疾病史；⑥自愿參與本次研究，簽署知情同意書。本次研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①存在心肺等嚴(yán)重器質(zhì)性疾??；②合并結(jié)核感染、乙型肝炎、丙型肝炎等病毒感染及其他感染性疾病；③合并糖尿病、高血壓等內(nèi)分泌疾病、免疫性疾??；④合并造血系統(tǒng)原發(fā)性疾病。

1.3 方法 清晨采集所有研究對象空腹靜脈血6 ml，置于EDTA 抗凝管中以3 000 r/min 離心處理20 min，靜置分離血清、血漿，于-70 ℃環(huán)境下保存待檢。用含1%牛血清蛋白的聚丁二酸丁二醇酯溶液將血清樣本按照1∶500 稀釋，在96 孔板中加入100 μl/孔，覆蓋潔凈粘條，4 ℃孵育過夜。去除孔內(nèi)抗體，以洗滌緩沖液重復(fù)洗滌3 次，加入200 μl 1%BAS的PBS溶液封閉反應(yīng)2 h，再次洗滌后拍干備用。將96 孔板中多余板條移除，在第一列中加入100 μl制備好的標(biāo)準(zhǔn)品，剩余的孔板中加入100 μl樣品，覆蓋潔凈粘條，常溫下孵育2 h。洗板3 次，以干凈紙巾拍打以除去多余沖洗緩沖劑，每孔內(nèi)加入CXCR5、HCY、RANTES 二抗，覆蓋粘條，常溫下孵育2 h。沖洗反應(yīng)板，加入100 μl底物溶液，粘條覆蓋，常溫孵育40 min，加入50 μl顯色液/孔，孵育45 min，加入50 μl終止液。于酶標(biāo)檢測儀450 nm處讀取吸光度值，以2-△△ct計算CXCR5、HCY、RANTES濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，影響因素分析采用logistic回歸分析。設(shè)P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清CXCR5、HCY、RANTES表達(dá)見表1

表1 兩組血清CXCR5、HCY、RANTES表達(dá)

由表1 可見，HIV 感染組患者血清CXCR5 水平低于對照組，血清HCY、RANTES 表達(dá)高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t分別=27.88、-26.48、-66.23，P均＜0.05）。

2.2 HIV 感染發(fā)生影響因素的多元logistic回歸分析 將HIV 感染發(fā)生作為因變量，將臨床特征及CXCR5、HCY、RANTES 作為自變量，納入二分類多因素logistic回歸模型分析，結(jié)果見表2。

表2 HIV感染發(fā)生影響因素的多元logistic回歸分析

由表2可見，TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CXCR5、HCY、RANTES 均為HIV 感染發(fā)生的影響因素。

2.3 HIV 感染組中CXCR5、HCY、RANTES 的相關(guān)性分析 CXCR5 與HCY、RANTES 呈負(fù)相關(guān)（r分別=-0.10、-0.87，P均＜0.05），HCY 與RANTES 呈正相關(guān)（r=0.33，P＜0.05）。

3 討論

臨床資料證實(shí)，HIV 病毒感染后，淋巴細(xì)胞數(shù)量減少、細(xì)胞功能受損，機(jī)體免疫功能紊亂，繼而引發(fā)機(jī)體免疫功能缺陷及異常免疫激活[9]。研究指出，抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療作為目前AIDS治療的有效手段，通過抑制病毒復(fù)制，增加CD4+T 淋巴細(xì)胞術(shù)量，降低感染發(fā)生率，可有效預(yù)防及降低疾病發(fā)生率[10]。另有研究證實(shí)，HIV 抗病毒治療雖可恢復(fù)部分機(jī)體免疫能力，但其恢復(fù)速度極慢。故對分子標(biāo)志物與HIV感染相關(guān)性進(jìn)行研究具有重要意義[11]。

CXCR5 在淋巴等組織中表達(dá)豐富，是重要的B淋巴細(xì)胞組織因子[12]。有研究指出，CXCR5 在糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等患者外周血中存在異常高表達(dá)，并在部分自身免疫性疾病中可作為疾病發(fā)展階段的指征[13,14]。CXCR5 CD8+淋巴細(xì)胞頻率、功能與HIV 感染進(jìn)展存在緊密關(guān)聯(lián)[15]。趙爽等[16]研究指出，不同血液CD4+T 淋巴細(xì)胞計數(shù)患者CXCR5 水平與健康人相比存在差異性，但治療后CXCR5 水平均出現(xiàn)不同水平上升，證實(shí)CXCR5 總量較健康人群增高，與前期研究結(jié)果相符。本次研究結(jié)果顯示，HIV感染患者CXCR5 水平相比健康者降低，且隨疾病分期的升高而降低。同時CXCR5 是HIV 感染發(fā)生的影響因素，由此認(rèn)定，CXCR5 可影響、促進(jìn)HIV 感染病情進(jìn)展。提示CXCRE5水平變化可對病情程度變化作出準(zhǔn)確反映，有望成為HIV 感染新的檢測生物標(biāo)志物。

HCY 本身不參與蛋白制合成，在體內(nèi)以氧化形式與蛋白質(zhì)結(jié)合。隨臨床深入研究發(fā)現(xiàn)，HCY 是導(dǎo)致心腦血管疾病發(fā)病的獨(dú)立危險因素[17]?？笻IV 感染治療在延長患者生存期同時會引發(fā)系列并發(fā)癥，其中以心血管疾病最為嚴(yán)重。而HIV 本身就為心血管疾病的獨(dú)立危險因素[18]。故在HIV 感染患者治療過程中，篩查、預(yù)防心血管疾病具有重要意義[19,20]。本次研究結(jié)果顯示HCY 異常高表達(dá)于HIV感染患者血清內(nèi)，且是HIV 感染發(fā)生的影響因素，與Guarale[21]等研究結(jié)果相符。提示HIV 本身對HCY代謝過程產(chǎn)生一定影響，可通過檢測HCY水平變化相應(yīng)調(diào)整治療方案，對心血管病預(yù)防具有重要意義。

RANTES 作為趨化因子家族成員，是CXCR5 天然配體[22]。RANTES 具有多種不同生物學(xué)功能，在對多種細(xì)胞產(chǎn)生趨化作用同時強(qiáng)烈激活淋巴細(xì)胞，參與炎癥反應(yīng)發(fā)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化及HIV 感染[23]。鄺建玉等[24]研究指出，RANTES在HIV感染易感性和AIDS 病程中的作用為非特異性的，受體、同類配體、病毒本身變異等多種因素影響。本次研究結(jié)果顯示，血清RANTES 水平的升高與HIV 感染的發(fā)展存在一定關(guān)聯(lián)，提示其可能成為新的抗HIV 治療靶點(diǎn)。且本次研究發(fā)現(xiàn)CXCR5 與HCY、RANTES呈負(fù)相關(guān)，HCY 與RANTES 呈正相關(guān)。因此測定CXCR5、HCY、RANTES 表達(dá)對診斷HIV 感染疾病的發(fā)展情況具有重要意義。

綜上所述，CXCR5、HCY、RANTES 水平表達(dá)與HIV 感染存在密切聯(lián)系，且存在一定相關(guān)性。CXCR5、HCY、RANTES 水平變化可作為疾病預(yù)判及發(fā)展的生物檢測指標(biāo)，為抗HIV 治療的療效評估，HIV感染的免疫治療提供新的方向。