樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)研究*

肖祖飛，邢夢(mèng)雪，魏 希，張北紅，王顏波，李 鳳，金志農(nóng)

(南昌工程學(xué)院，江西省樟樹繁育與開發(fā)利用工程研究中心，江西南昌 330099)

香樟(Cinnamomumcamphora)隸屬樟科樟屬，樹冠優(yōu)美，枝葉茂密，深受人們喜愛，常被用于行道樹、庭蔭樹、防護(hù)林和風(fēng)景林[1]。樟木防蟲耐腐，是制作家具、雕刻的良材[2，3]。香樟根、莖、葉中含有精油，可用于醫(yī)藥、日用化工、香精香料等[4-6]。檸檬醛是香料產(chǎn)業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)迫切需要的原料。天然檸檬醛主要從山蒼子種子中提取得到，產(chǎn)量低、生產(chǎn)成本高，遠(yuǎn)滿足不了市場(chǎng)需求。近年來，從香樟中發(fā)現(xiàn)富含檸檬醛的優(yōu)良單株，為天然檸檬醛的生產(chǎn)找到新來源，因此，優(yōu)良檸檬醛型香樟種苗的繁殖是當(dāng)前亟需解決的問題。目前，香樟的無性繁殖方式主要是扦插[7]和組織培養(yǎng)[8]。莖段組織培養(yǎng)能夠保持母本優(yōu)良性狀，是香樟無性繁殖的重要方式。影響香樟組織培養(yǎng)的因素主要有培養(yǎng)基、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、樟樹化學(xué)型等。葉潤(rùn)燕等[9]研究表明，采用Murashige和Skoog (MS)基礎(chǔ)培養(yǎng)基并添加不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，對(duì)香樟莖段腋芽誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根效果較好：樟樹腋芽誘導(dǎo)率達(dá)到90%，樟樹叢生芽增殖系數(shù)高達(dá)13.1，組培苗生根率達(dá)到90%。周麗華等[10]研究表明，采用改良DCR培養(yǎng)基并添加合適濃度的6-芐氨基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)，培養(yǎng)不同家系的香樟，有利于芽的萌發(fā)和增殖；生根培養(yǎng)基采用1/2 MS培養(yǎng)基加以合適濃度的吲哚丁酸(IBA)、吲哚乙酸(IAA)、6-BA和NAA，組培苗生根率達(dá)到96.3%。生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及濃度在植物組織培養(yǎng)過程中發(fā)揮重要作用。與激動(dòng)素(KT)相比，相同濃度下6-BA對(duì)香樟不定芽的誘導(dǎo)效果好于KT，芽的長(zhǎng)度和葉的數(shù)量顯著高于KT[11]。香樟涌金莖段萌芽在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.02 mg/L IBA誘導(dǎo)培養(yǎng)基中萌發(fā)率達(dá)100.0%，在MS+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IAA培養(yǎng)基中腋芽能正常生長(zhǎng)并增殖[12]。

根據(jù)枝葉精油主成分，樟樹可劃分為不同的化學(xué)型，樟樹組織培養(yǎng)研究較多的是芳樟醇型、腦樟型和龍腦樟型香樟[13-15]。檸檬醛型香樟采用矮林栽培，一年采伐1次或兩年采伐3次枝葉，可極大地提高檸檬醛的產(chǎn)量，滿足市場(chǎng)需求。目前，以生產(chǎn)精油為目的的香樟矮林在江西、廣西、云南等地勃然興起，優(yōu)良檸檬醛型香樟苗木需求量大、供不應(yīng)求，但關(guān)于檸檬醛型香樟組織培養(yǎng)研究未見報(bào)道。本研究以樟樹贛檸1號(hào)四年生扦插苗枝條為材料，研究外植體的采集月份、消毒時(shí)間、枝條木質(zhì)化程度、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響，并對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培生根苗的煉苗和移栽技術(shù)進(jìn)行探索，為樟樹贛檸1號(hào)的無性繁殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為樟樹贛檸1號(hào)(C.camphora‘Ganning 1’，良種編號(hào)：贛S-SC-CC-004-2020)四年生扦插苗枝條，葉片鮮重出油率1.09%，檸檬醛含量56.50%。將枝條剪切成帶1-2個(gè)芽的莖段(1.5-3 cm)，用自來水沖洗2 h，置于超凈工作臺(tái)，用質(zhì)量濃度為75%的酒精(山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司)浸泡30 s，無菌水清洗3-5次，待用。

1.2 方法

1.2.1 枝條木質(zhì)化程度對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

采集樟樹贛檸1號(hào)四年生扦插苗一年生、二年生和三年生枝條，采用1.1節(jié)方法處理外植體，用質(zhì)量濃度為0.1%的HgCl2(河北省邢臺(tái)興教化工廠)消毒6 min，之后接種在添加1.2 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IBA的MS培養(yǎng)基上。每種處理接種30-35瓶，每瓶1個(gè)莖段，視為1次試驗(yàn)，重復(fù)3次。接種30 d后統(tǒng)計(jì)污染率、褐化率和萌芽率。

1.2.2 消毒時(shí)間對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

采集1.2.1節(jié)篩選所得到的最適枝條，采用1.1節(jié)方法處理外植體，用質(zhì)量濃度為0.1%的HgCl2消毒，消毒時(shí)間分別為3 min、5 min、7 min和9 min，之后接種在添加1.2 mg/L 6-BA 和0.1 mg/L IBA的MS培養(yǎng)基上。每種處理接種30-35瓶，每瓶1個(gè)莖段，視為1次試驗(yàn)，重復(fù)3次。接種30 d后統(tǒng)計(jì)污染率、褐化率和萌芽率。

1.2.3 外植體的采集月份對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

分別在2020年5月、7月和9月采集1.2.1節(jié)篩選所得到的最適枝條，采用1.1節(jié)方法處理外植體，用質(zhì)量濃度為0.1%的HgCl2消毒，消毒時(shí)間為1.2.2節(jié)篩選出的最適消毒時(shí)間，之后接種在添加1.2 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IBA的MS培養(yǎng)基上。每種處理30-35瓶，每瓶1個(gè)莖段，視為1次試驗(yàn)，重復(fù)3次。接種30 d后統(tǒng)計(jì)污染率、褐化率和萌芽率。

1.2.4 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段萌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

于1.2.3節(jié)篩選出的最適外植體采集月份采集1.2.1節(jié)篩選所得到的最適枝條，采用1.1節(jié)方法處理外植體，用質(zhì)量濃度為0.1%的HgCl2消毒，消毒時(shí)間為1.2.2節(jié)篩選所得到的最適時(shí)間，之后接種在添加6-BA (0.15 mg/L、0.3 mg/L、0.6 mg/L、1.2 mg/L)和IBA (0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.8 mg/L)的MS培養(yǎng)基上。每種處理接種30-35瓶，每瓶1個(gè)莖段。接種30 d后統(tǒng)計(jì)萌芽率。

1.2.5 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖培養(yǎng)的影響

挑選1.2.4節(jié)中株高3-5 cm的無菌苗，修剪成1.5 cm長(zhǎng)莖段，莖段至少帶有一葉一芽，接種到添加6-BA (0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0 mg/L)和IBA (0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L)的MS培養(yǎng)基上。每個(gè)處理接種20瓶，每瓶6個(gè)莖段，視為1次試驗(yàn)，重復(fù)3次。增殖培養(yǎng)30 d，統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)、株高和莖粗。

1.2.6 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)生根培養(yǎng)的影響

挑選1.2.5節(jié)中株高3-5 cm的增殖苗接種于1/2 MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基分別添加IBA (0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0 mg/L)、NAA (0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0 mg/L)。每種處理接種20瓶，每瓶7-10株，視為1次試驗(yàn)，重復(fù)3次。生根培養(yǎng)25 d，統(tǒng)計(jì)生根率、根數(shù)、根長(zhǎng)和根粗。

1.2.7 樟樹贛檸1號(hào)生根苗煉苗和移栽技術(shù)研究

1.2.6節(jié)中組培苗生根培養(yǎng)15 d，將瓶苗移至透光率25%-30%、溫度25-30℃的大棚內(nèi)煉苗10 d，將組培苗移出瓶外，洗凈根部培養(yǎng)基，待移栽。以紅壤土和草木灰(V∶V=5∶1)為基質(zhì)，移栽前將生根苗用質(zhì)量濃度為0.5%的多菌靈消毒10-15 min，之后移入裝滿基質(zhì)的無紡布袋中央，移栽后20 d內(nèi)保持空氣濕度90%以上，基質(zhì)保持濕潤(rùn)，見干即澆，每次要澆透，移栽兩個(gè)月后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

1.2.8 培養(yǎng)條件

1.2.1節(jié)至1.2.7節(jié)所用培養(yǎng)基均添加30 g/L蔗糖(西隴科學(xué)股份有限公司)、7.0 g/L瓊脂粉(北京索萊寶科技有限公司)，生根培養(yǎng)基另外再添加2 g/L活性炭(東莞市光華活性炭有限公司)，培養(yǎng)基pH值為5.8。培養(yǎng)條件為白質(zhì)光、光強(qiáng)3 000-5 000 lx、光照時(shí)間12 h/d、溫度(25±2)℃。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與方法

采用Excel 2019軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入、整理和方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 枝條木質(zhì)化程度對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

由表1可知，莖段的污染率和褐化率隨枝條木質(zhì)化程度的增加而顯著升高。一年生半木質(zhì)化枝的莖段的污染率和褐化率最低，分別為15.82%和10.33%，顯著低于二年生木質(zhì)化枝和三年生木質(zhì)化枝莖段。莖段的萌芽率隨枝條木質(zhì)化程度的增加而顯著降低：一年生半木質(zhì)化枝莖段的萌芽率最高，為63.06%，顯著高于二年生木質(zhì)化枝莖段(10.57%)和三年生木質(zhì)化枝莖段(5.62%)；二年生和三年生木質(zhì)化枝莖段的萌芽率差異不顯著。因此，樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)應(yīng)采集一年生半木質(zhì)化枝，莖段的萌芽率高，污染率和褐化率低。

表1 莖段木質(zhì)化程度對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段培養(yǎng)的影響

2.2 消毒時(shí)間對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

由表2可知，隨消毒時(shí)間的增加，莖段的污染率逐漸降低，褐化率逐漸升高，萌芽率先增后降。與消毒3 min比較，消毒5 min、7 min和9 min的莖段污染率分別降低73.42%、74.06%、85.62%，褐化率分別提高29.76%、118.67%、469.64%。消毒5 min，莖段的污染率和褐化率分別為16.53%、10.77%，萌芽率達(dá)到最高，為55.26%。因此，樟樹贛檸1號(hào)莖段用質(zhì)量濃度為0.1%的HgCl2消毒5 min，誘導(dǎo)莖段的萌芽率最好。

表2 消毒時(shí)間對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗莖段培養(yǎng)的影響

2.3 外植體采集月份對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

由表3可知，外植體的污染率和褐化率隨采集月份的推后而顯著升高，萌芽率則顯著降低。與5月采集外植體比較，7月和9月采集外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，外植體的污染率分別升高52.70%、173.14%，褐化率分別升高62.88%、135.33%，萌芽率則分別降低24.93%、66.80%。因此，5月份采集樟樹贛檸1號(hào)一年生半木質(zhì)化枝條進(jìn)行莖段組織培養(yǎng)效果較好。

表3 外植體采集月份對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段培養(yǎng)的影響

2.4 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段萌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

由表4可知，MS+1.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA培養(yǎng)基有利于莖段的萌芽，萌芽率為66.67%；MS+1.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA培養(yǎng)基所培養(yǎng)的莖段萌芽率次之；莖段的萌芽率最低的是MS+0.15 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA培養(yǎng)基，萌芽率僅為16.67%。因此，樟樹贛檸1號(hào)莖段萌芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+1.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA。

表4 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段萌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

2.5 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖培養(yǎng)的影響

由表5可知，IBA濃度不變時(shí)，樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖系數(shù)隨6-BA濃度的增加而增大。MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA處理組的增殖系數(shù)達(dá)到4.06，與MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA、MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA處理組差異不顯著，但顯著高于MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA處理組。6-BA濃度不變時(shí)，樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖系數(shù)隨IBA濃度的增加而先增加后減少，IBA濃度為0.1 mg/L時(shí)，樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖系數(shù)最大，為3.63。IBA濃度對(duì)組培苗的株高有顯著促進(jìn)作用，MS+1.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L IBA處理組的組培苗株高最高，為3.89 cm，高于其他處理組。各處理間組培苗的莖粗差異不顯著。由此可知，樟樹贛檸1號(hào)組培苗最適增殖培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA (圖1)。

表5 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖培養(yǎng)的影響

續(xù)表

圖1 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA誘導(dǎo)樟樹贛檸1號(hào)組培苗增殖

2.6 樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根情況

2.6.1 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根的影響

由表6可知，不同IBA濃度處理下的組培苗生根率均達(dá)到93%以上。其中1/2 MS+2.0 mg/L IBA處理組的組培苗生根率達(dá)到100%，根數(shù)也最多，為3.60，顯著高于其余3組。根長(zhǎng)最長(zhǎng)的是1/2 MS+1.5 mg/L IBA處理組，為9.91 cm，顯著高于其他處理組。根粗隨IBA濃度的增加而逐漸變小，1/2 MS+0.5 mg/L、1/2 MS+1.0 mg/L和1/2 MS+1.5 mg/L IBA處理組的根粗較大，三者之間差異不顯著，但顯著大于1/2 MS+2.0 mg/L IBA處理組。

表6 IBA對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根的影響

由表7可知，1/2 MS+2.0 mg/L NAA處理組的組培苗生根率也達(dá)到100.0%，1/2 MS+0.5 mg/L、1/2 MS+1.0 mg/L和1/2 MS+1.5 mg/L NAA處理組的生根率均高達(dá)93%以上。1/2 MS+0.5 mg/L NAA處理組的根數(shù)最多，為3.02；其次是1/2 MS+1.5 mg/L和1/2 MS+2.0 mg/L NAA處理組;1/2 MS+1.0 mg/L NAA處理組的根數(shù)較少。1/2 MS+1.0 mg/L和1/2 MS+2.0 mg/L NAA處理組的根長(zhǎng)較長(zhǎng)，分別為7.76 cm和7.52 cm，二者差異不顯著，但是顯著大于1/2 MS+0.5 mg/L和1/2 MS+1.5 mg/L NAA處理組。根粗隨NAA濃度的增加而逐漸增大，1/2 MS+1.0 mg/L、1/2 MS+1.5 mg/L和1/2 MS+2.0 mg/L NAA處理組的根粗較大，三者之間差異不顯著，但是顯著大于1/2 MS+0.5 mg/L NAA處理組。

表7 NAA對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根的影響

綜上所述，IBA和NAA濃度對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根有顯著影響。綜合生根率、根數(shù)、根長(zhǎng)和根粗指標(biāo)，IBA對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗的生根效果略優(yōu)于NAA，樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根適宜培養(yǎng)基為1/2 MS+2.0 mg/L IBA。

2.6.2 樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根過程基部形態(tài)變化

樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根培養(yǎng)1-3 d，基部形態(tài)變化不明顯；生根培養(yǎng)5 d時(shí)，組培苗基部切口開始愈合、膨大；生根培養(yǎng)7 d時(shí)，大部分組培苗基部切口愈合、膨大，表皮有凸起點(diǎn)；生根培養(yǎng)9 d時(shí)，組培苗不定根出現(xiàn)；培養(yǎng)11-14 d時(shí)，組培苗不定根繼續(xù)生長(zhǎng)，不定根明顯增長(zhǎng)、增多(圖2)。

圖2 1/2 MS+2.0 mg/L IBA處理誘導(dǎo)樟樹贛檸1號(hào)組培苗生根過程

2.7 樟樹贛檸1號(hào)組培生根苗的煉苗和移栽情況

生根瓶苗放入大棚煉苗10 d，之后將生根苗移栽到瓶外，在塑料薄膜小拱棚緩苗20 d，樟樹贛檸1號(hào)組培生根苗移栽成活率可達(dá)90.06%(圖3)。待苗木長(zhǎng)到20-30 cm，莖木質(zhì)化后可將其移入大田定植。

圖3 樟樹贛檸1號(hào)組培移栽苗

3 討論

3.1 外植體的采集月份和消毒時(shí)間對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

外植體的采集月份不同，其生理狀況和發(fā)育狀態(tài)也不同，直接影響外植體的萌芽率和成活率。研究表明，5月采集南方紅豆杉嫩枝進(jìn)行組織培養(yǎng)，外植體愈傷組織誘導(dǎo)率最高，其次是11月，8月最差[16]。5月中旬采集毛葉木姜子當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條剪取莖段，用0.2% HgCl2消毒12 min，消毒效果最佳，是毛葉木姜子無菌體系建立的最佳消毒方式[17]。本研究結(jié)果表明，5月是樟樹贛檸1號(hào)莖段組織采集外植體的最適時(shí)間，這與前人研究結(jié)果基本一致，其原因可能是5月份枝條新陳代謝旺盛、生命力強(qiáng)，內(nèi)源激素、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等含量高，組織幼嫩、容易分化。消毒劑及消毒時(shí)間影響外植體的成活率，而HgCl2是植物組織培養(yǎng)常用消毒劑，一般使用濃度0.1%-0.2%、消毒5-10 min，外植體的成活率高、污染率和褐化率低[18,19]。本研究表明，5月采集一年生半木質(zhì)化莖段，用0.1% HgCl2消毒5 min，莖段的污染率和褐化率低、萌芽率高。新長(zhǎng)出來的枝條與外界環(huán)境接觸時(shí)間短，受灰塵、細(xì)菌、真菌等污染少，容易消毒。此外，5月枝條內(nèi)所含的酚類物質(zhì)可能較少，降低了莖段的褐化率。

3.2 枝條木質(zhì)化程度對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

采用扦插、組織培養(yǎng)等無性繁殖時(shí)，很多植物會(huì)受到成熟效應(yīng)的影響。本研究表明，莖段的萌芽率隨枝條木質(zhì)化程度的增加而顯著降低，一年生半木質(zhì)化枝莖段萌芽率最高，為63.06%，顯著高于二年生木質(zhì)化枝莖段(10.57%)和三年生木質(zhì)化枝莖段(5.62%)；污染率和褐化率隨木質(zhì)化程度的增加而升高。這一結(jié)果與劉均利等[20]研究毛葉木姜子組織培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果基本一致，采集半木質(zhì)化枝條進(jìn)行莖段初代組織培養(yǎng)，莖段的萌芽率達(dá)到57.9%，顯著高于木質(zhì)化枝條(40%)和嫩枝(38.5%)。究其原因可能是二年生木質(zhì)化枝和三年生木質(zhì)化枝莖段枝齡大、木質(zhì)化程度高、組織老，分裂能力弱，較難誘導(dǎo)萌芽，容易污染和褐化；一年生木質(zhì)化枝的腋芽比二年生木質(zhì)化枝、三年生木質(zhì)化枝的腋芽飽滿，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，二年生木質(zhì)化枝和三年生木質(zhì)化枝的腋芽處于休眠狀態(tài)，不易誘導(dǎo)萌芽。因此，樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)應(yīng)該采集一年生半木質(zhì)化枝，莖段的萌芽率高，污染率和褐化率低。

3.3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)樟樹贛檸1號(hào)莖段組織培養(yǎng)的影響

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在組培苗的生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。樟樹心形胚時(shí)期的合子胚接入添加4.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA的改良MS培養(yǎng)基進(jìn)行初培養(yǎng)，再接入添加1.0 mg/L 6-BA、0.2 mg/L 2,4-D的改良MS培養(yǎng)基培養(yǎng)，胚性愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到77.78%[21]。另外，有研究發(fā)現(xiàn)樟樹幼胚的萌發(fā)率隨6-BA濃度的增加而升高，6-BA是影響樟樹幼胚早期萌發(fā)的主要影響因子[22]。本研究表明，6-BA、IBA、6-BA/IBA在樟樹贛檸1號(hào)莖段的萌芽、組培苗的增殖和生根過程中起重要作用。在IBA濃度不變的情況下，莖段的萌芽率隨6-BA濃度的增加而升高；在6-BA濃度不變的情況下，莖段的萌芽率隨IBA濃度的增加而降低。此外，莖段的萌芽率隨6-BA/IBA比值的升高而升高。6-BA/IBA為1.5時(shí)，莖段的萌芽率最低；6-BA/IBA為12時(shí)，莖段的萌芽率達(dá)到最高，為66.67%。6-BA、IBA、6-BA/IBA對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗的增殖也有顯著影響。IBA濃度不變時(shí)，增殖系數(shù)隨6-BA濃度、6-BA/IBA比值升高而增大，6-BA濃度為2.0 mg/L、6-BA/IBA為20時(shí)，增殖系數(shù)最大，為4.06。IBA和NAA對(duì)樟樹贛檸1號(hào)組培苗的生根有顯著促進(jìn)作用，且IBA對(duì)組培苗的生根效果優(yōu)于NAA，1/2 MS+2.0 mg/L IBA處理組生根率達(dá)到100%。辜夕容等[23]研究表明，高濃度的6-BA有利于香樟莖段上隱芽的萌動(dòng)與生長(zhǎng)，而低濃度的6-BA有利于愈傷組織的生長(zhǎng)；6-BA/NAA的比值對(duì)香樟莖段隱芽的萌動(dòng)與生長(zhǎng)、愈傷組織的生長(zhǎng)有較大影響，6-BA/NAA為40時(shí)，莖段的萌芽生長(zhǎng)最好，6-BA/NAA為5時(shí)有利于愈傷組織的形成。

3.4 樟樹贛檸1號(hào)組培生根苗煉苗和移栽研究

組培苗移栽成活率的高低決定組培技術(shù)成功與否。瓶?jī)?nèi)組培苗比較脆弱，需在有條件設(shè)施的地方煉苗一段時(shí)間才能移栽、造林[24]。有研究表明，黃樟組培苗在常規(guī)環(huán)境中煉苗3-5 d，可進(jìn)行移栽。移栽前用百菌清可濕性粉劑800-1 000倍液浸沾后瀝干，以泥炭土和珍珠巖混合基質(zhì)為栽培基質(zhì)，移栽后適當(dāng)遮光、覆膜，可使黃樟組培苗成活率和新葉率達(dá)85%以上[25]。本研究表明，樟樹贛檸1號(hào)組培生根苗在透光率25%-30%、溫度25-30℃的大棚內(nèi)煉苗7-10 d，可移出瓶外，適當(dāng)遮光、用塑料薄膜拱棚保持空氣濕度90%以上，移栽成活率可達(dá)90%以上。

4 結(jié)論

樟樹贛檸1號(hào)適宜在5月份采集一年生半木質(zhì)化枝條進(jìn)行莖段組織培養(yǎng)，莖段用質(zhì)量濃度0.1%的HgCl2消毒，消毒最適時(shí)間為5 min。6-BA和IBA在莖段萌芽、增殖和生根培養(yǎng)過程中起重要作用。莖段萌芽最適培養(yǎng)基為MS+1.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA，萌芽率達(dá)到66.67%；最適增殖培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA，增殖系數(shù)為4.06；生根適宜培養(yǎng)基為1/2 MS+2.0 mg/L IBA，生根率達(dá)到100%。