• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    青藏高原東部22株栽培與野生羊肚菌的分子進(jìn)化分析

    2022-05-09 02:37:18杜軍華姜東伯張津京余建平宋長(zhǎng)新劉甜陳輝陳群吳曉明
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年7期
    關(guān)鍵詞:羊肚菌遺傳多樣性青藏高原

    杜軍華 姜東伯 張津京 余建平 宋長(zhǎng)新 劉甜 陳輝 陳群 吳曉明

    摘要:為了更好地區(qū)分不同羊肚菌菌株,確定其生物多樣性,對(duì)10個(gè)栽培羊肚菌和12個(gè)野生羊肚菌進(jìn)行分析。通過對(duì)5個(gè)基因區(qū)域進(jìn)行DNA測(cè)序,借助數(shù)據(jù)庫檢索、多序列比對(duì)和分子進(jìn)化等方法進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)10種栽培樣本屬于3種已知物種:六妹羊肚菌( Morchella sextelata )、梯棱羊肚菌( M. importuna )、七妹羊肚菌( M. septimelata )。同GenBank核苷酸序列數(shù)據(jù)庫中已測(cè)序樣本相比,這些樣本都含有一定程度的序列差異,體現(xiàn)在栽培的樣本也具有遺傳多樣性。12個(gè)野生型樣本同六妹羊肚菌、小海綿羊肚菌( M. spongiola )、 Morchella prava 物種更接近,并顯示出較大的序列差異,其中1株同所有已知羊肚菌品種均有較大的遺傳差異??紤]到這些野生羊肚菌的生長(zhǎng)地域同其他羊肚菌生長(zhǎng)地域的差異,推斷由于獨(dú)特的地理環(huán)境,使野生羊肚菌演化出了特有的基因序列。本研究獲得了青海一些地區(qū)羊肚菌的分類、分子演化和多樣性特征,有助于鑒定、選育適合栽培的羊肚菌菌株。

    關(guān)鍵詞:子囊菌類;羊肚菌;分子進(jìn)化;多序列比對(duì);青藏高原;遺傳多樣性

    中圖分類號(hào): S646.702? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(2022)07-0028-07

    收稿日期:2021-06-15

    基金項(xiàng)目:青海省應(yīng)用基礎(chǔ)研究(編號(hào):2018-ZG-790)。

    作者簡(jiǎn)介:杜軍華(1965—),男,河北故城人,副教授,主要從事生物技術(shù)及應(yīng)用研究。E-mail:djh319@126.com。

    通信作者:杜軍華,副教授,主要從事生物技術(shù)及應(yīng)用研究,E-mail:djh319@126.com;吳曉明,博士,副教授,主要從事生物信息研究,E-mail:wxm@mail.xjtu.edu.cn。

    羊肚菌是公認(rèn)的最重要的野生食用、藥用真菌之一,分布于世界各地,特別是在北溫帶地區(qū)[1-2]。其口感脆嫩,風(fēng)味獨(dú)特,富含維生素、人體必需氨基酸和特殊的多糖成分,具有極高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值[3-5]。目前我國已報(bào)道的羊肚菌種類較多,其中常見的有圓錐羊肚菌( Morchella conica)、小頂羊肚菌(M. angusticeps)、羊肚菌(M. esculenta)、褐色羊肚菌(M. umbrina ) 等[6]。近年來,人們對(duì)其營養(yǎng)價(jià)值、生物學(xué)特性和物種多樣性研究取得了重大進(jìn)展,一些羊肚菌品種也已被廣泛栽培,顯示出良好的經(jīng)濟(jì)效益[7]。

    目前,僅有13種羊肚菌品系完成全基因組測(cè)序(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/assembly/organism/5193/),而已知羊肚菌屬(NCBI數(shù)據(jù)庫taxid編號(hào):5193)包含多達(dá)30個(gè)物種,每個(gè)物種都有不同的菌株。目前Index Fungorum數(shù)據(jù)庫(http://www.indexfungorum.org/Names/Names.asp) 也收錄了多達(dá)353種羊肚菌(截至2021年12月)。許多菌株在形態(tài)上相似,難以區(qū)分,利用基因序列準(zhǔn)確鑒定羊肚菌的種類和菌株尤為重要。

    羊肚菌屬的分類研究已有多年,其子囊體的外觀常隨環(huán)境、氣候等外界條件的變化而變化,在形狀和大小上具有高度的多態(tài)性。雖然子實(shí)體的微觀結(jié)構(gòu)相對(duì)保守,但從屬類群的定義非常困難,菌株之間的定義也不明確,影響了該類群資源的合理利用和開發(fā)[8-9]。對(duì)于分類學(xué)家和野外真菌學(xué)家來說,羊肚菌屬于一個(gè)非常復(fù)雜的屬。由于形態(tài)差異不明顯,同一種類的羊肚菌由于生存環(huán)境和營養(yǎng)條件的差異往往表現(xiàn)出形態(tài)多樣性,根據(jù)外觀和形態(tài)對(duì)羊肚菌進(jìn)行分類往往存在一定偏差。

    基于多基因位點(diǎn)進(jìn)行分析已經(jīng)成為推斷羊肚菌物種的新方法。使用ITS-RPB1-RPB2-EF1-α組合數(shù)據(jù)集進(jìn)行基因分析,人們已經(jīng)將羊肚菌分為黑羊肚菌分支( Elata clade )、黃羊肚菌分支( Esculenta clade )、變紅羊肚菌分支( Rufobrunnea clade )[10-11]。拉丁二項(xiàng)命名法也已用于羊肚菌命名,即用 Mes(E. clade)或Mel(E. clade) 跟上一個(gè)阿拉伯?dāng)?shù)字表示,自2012年以來也被廣泛使用。迄今為止,已經(jīng)利用系統(tǒng)發(fā)生分析的方法,確定了68個(gè)羊肚菌品種的關(guān)系,包括38個(gè)屬于黑羊肚菌、28個(gè)屬于黃羊肚菌、2個(gè)變紅羊肚菌[3,12-13]?;谶@些已知物種的命名,有助于準(zhǔn)確地進(jìn)行其他羊肚菌品種的鑒定。

    在青海地區(qū)高緯度和寒冷的氣候條件下,動(dòng)植物已經(jīng)進(jìn)化出了獨(dú)特的生長(zhǎng)模式。該地區(qū)的土壤特性和生態(tài)系統(tǒng),也成為野生羊肚菌的良好生長(zhǎng)環(huán)境。作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物,適合栽培的羊肚菌新品種也需要不斷被篩選出來,以促進(jìn)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。為了更好地了解青海地區(qū)羊肚菌的菌株類型、分布特點(diǎn)、分子標(biāo)記和進(jìn)化特征,筆者對(duì)22個(gè)樣本進(jìn)行分類相關(guān)基因的測(cè)序,通過序列比較的方法,以確定菌株特點(diǎn)及其遺傳特征。

    1 材料與方法

    1.1 樣品收集

    本研究于2020年5月,在大巴山東部地區(qū)北山農(nóng)場(chǎng)共收集了107個(gè)樣本。經(jīng)過基于形態(tài)的初步篩選,選取其中有代表性的12個(gè)野生菌株,繼續(xù)對(duì)其進(jìn)行分子水平的分析和鑒定。同時(shí),筆者也從青海省西寧市周圍的羊肚菌栽培基地,選取了10個(gè)栽培品種,進(jìn)行菌株的亞種鑒定。樣本信息見表1、表2。

    1.2 DNA測(cè)序區(qū)域的選擇

    為對(duì)10個(gè)栽培品種和12個(gè)野生品種進(jìn)行進(jìn)化分析和分子鑒定,本研究對(duì)5個(gè)突變率較高的基因區(qū)域設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行了測(cè)序。這些區(qū)域是rDNA內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)its1~its4 (ITS)、編碼RNA聚合酶Ⅱ的最大亞基(RPB1)、編碼RNA聚合酶Ⅱ的第二大亞基(RPB2)、翻譯延伸因子 (EF1-α)、核糖體大亞基(LSU)。對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行DNA提取分離后,將凝膠中的DNA樣品切割純化,回收目的片段,用相應(yīng)的引物和合適的條件進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增(表3、表4),擴(kuò)增程序根據(jù)引物退火與片段大小做適當(dāng)調(diào)整,擴(kuò)增后的分子進(jìn)行測(cè)序,最終共獲得122條序列。

    1.3 生物信息學(xué)分析

    為了獲取樣本測(cè)序序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中的相似序列,本研究利用基于局部比對(duì)算法的搜索工具(BLAST)進(jìn)行同源序列檢索,利用MUSCLE多序列比對(duì)程序確定各條序列的位點(diǎn)對(duì)應(yīng)關(guān)系,利用MEGA等軟件分析樣品序列的親緣關(guān)系。

    1.3.1 數(shù)據(jù)庫同源序列獲取

    為了檢測(cè)已測(cè)序片段與已知序列的相似性,并確定其同源序列,使用序列相似性搜索程序BLASTN[14],設(shè)置查詢參數(shù),從GenBank數(shù)據(jù)庫中提取同源序列。對(duì)搜索結(jié)果中同一樣本的不同片段進(jìn)行合并以剔除重復(fù)結(jié)果,只保留物種屬于羊肚菌屬的序列進(jìn)行進(jìn)化分析。對(duì)于 ITS 基因,從SD樣本和DM樣本共檢索到422個(gè)不同物種的序列。另外3個(gè)基因RPB1、RPB2、EF1-α檢索到的同源序列分別為142、156、127條。

    1.3.2 基于索引號(hào)的羊肚菌測(cè)序序列獲取

    一些研究人員從事羊肚菌相關(guān)研究,其樣本的測(cè)序序列也已被上傳到GenBank數(shù)據(jù)庫[4,15-18],總共獲得162個(gè)序列ID。筆者使用shell腳本編程,并借助查詢工具E-utilities (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/home/tools/)下載相關(guān)的序列,過濾后,共得到110個(gè)樣本,包含所有4個(gè)基因序列。

    1.3.3 多序列比對(duì)

    使用MUSCLE[19]來進(jìn)行多序列比對(duì);使用BioEdit 7.2.6進(jìn)行序列編輯操作;使用Gblock(http://phylogeny.lirmm.fr/phylo_cgi/)進(jìn)行位點(diǎn)選擇[3]。

    1.3.4 序列替代模型選擇

    用IQ-tree中的ModelFinder[20]來找到最佳核苷酸替換模型。該模型基于Bayesian信息準(zhǔn)則(BIC)進(jìn)行模型參數(shù)的篩選。ITS-rpb1-rpb2-ef1α的最佳DNA替換模型為K2P+G4,表示堿基的轉(zhuǎn)換、顛換有不同的頻率。進(jìn)化樹的構(gòu)建和可視化采用MEGA軟件[21]。

    1.3.5 系統(tǒng)發(fā)生樹的構(gòu)建

    采用基于Tamura-Nei模型[22]的最大似然方法進(jìn)行分子系統(tǒng)發(fā)育分析。算法根據(jù)一個(gè)初始樹進(jìn)行啟發(fā)式搜索,保留似然性較好的系統(tǒng)發(fā)生樹作為最終結(jié)果。根據(jù)每個(gè)位置的替換次數(shù)得到樹中的分支長(zhǎng)度,并用1 000次bootstrap重復(fù)估計(jì)系統(tǒng)發(fā)生樹中每個(gè)節(jié)點(diǎn)的一致性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 基于RPB1基因的羊肚菌親緣關(guān)系

    對(duì)22個(gè)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增和DNA測(cè)序,成功獲得ITS、RPB1、RPB2、EF1-α、LSU序列。對(duì)低質(zhì)量測(cè)序結(jié)果過濾后,共得到122個(gè)片段,總長(zhǎng)度為76 kb。

    RPB1基因在每個(gè)樣品中都被成功測(cè)序,用它查詢NCBI數(shù)據(jù)庫,得到多個(gè)羊肚菌屬的同源序列。經(jīng)過篩選,并對(duì)于每個(gè)羊肚菌品系保留1~2條序列,然后用MUSCLE程序構(gòu)建多序列比對(duì)。利用MEGA和最大似然法進(jìn)行進(jìn)化分析,最終得到了1棵包含22個(gè)樣本和111個(gè)已知物種或菌株同源序列的羊肚菌系統(tǒng)發(fā)生樹。初步確定了樣品與已知羊肚菌品種之間的進(jìn)化關(guān)系,并使用FigTree 1.4.4 (http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree/)來顯示進(jìn)化樹,體現(xiàn)品種之間的類別關(guān)系(圖1)。

    如圖1所示,在區(qū)域1中可以發(fā)現(xiàn)樣本DMBJD039、DMBXY044和DMBXY049具有非常高的同源性關(guān)系,與sp._Mel-29和sp._Mel-28非常接近。從形態(tài)上,這3個(gè)品種區(qū)分為尖頂羊肚菌和小羊肚菌。

    在區(qū)域2中,含有DMBBY003、DMBHH076、DMBHM034的分支被鑒定為六妹羊肚菌。栽培株SDQYXZ001(圖2)、SDQYNS006、SDQYMK009、SDQYDB005和SDQYBS010也存在于該分支。這些栽培株來自西藏林芝、湖北恩施、青海班瑪、甘肅迭部、青?;ブ鹊?,表明此品種羊肚菌具有較高的適應(yīng)性。

    在區(qū)域3中,栽培菌株SDQYSC004和SDQYTL008分別來自四川金堂和青海西寧。它在進(jìn)化上與同七妹羊肚菌相似,具有較高的同源性。

    在區(qū)域4中,3個(gè)栽培株SDQYLM007、SDQYTS003、SDQYZX002和2個(gè)野生菌株DMBHH052、DMBHM088與梯棱羊肚菌具有較高的同源性。SDQYLM007、SDQYTS003、SDQYZX002分別來自青海西寧、甘肅天水、甘肅卓尼。這表明梯棱羊肚菌也適宜在2 000 m的高海拔地區(qū)栽培。

    區(qū)域5中,DMBBY014、DMBMM064、DMBCB101和DMBMM005與sp._Mes-5和sp._Mes-6最接近,但分支較長(zhǎng),表現(xiàn)出種間的差異。從形態(tài)上,4個(gè)品種有所區(qū)別,被認(rèn)為是半圓羊肚菌、羊肚菌、粗柄羊肚菌等,因此,有必要進(jìn)一步確定其種類信息。

    由于RPB1基因在多數(shù)樣本中具有較高同源性,一些樣本不能很好地區(qū)分,需借助更多基因序列進(jìn)行鑒定。

    2.2 基于多基因序列組合的樣本親緣關(guān)系分析

    本研究對(duì)SD樣本(表1)和DM樣本(表2)均進(jìn)行多基因測(cè)序,以此進(jìn)行多基因綜合分析。對(duì)所有樣本先進(jìn)行多序列比對(duì)(multiple sequence alignment,簡(jiǎn)稱MSA),再將單個(gè)基因MSA結(jié)果合并成多基因MSA結(jié)果,以確定樣本之間的關(guān)系。

    10個(gè)SD樣本擴(kuò)增出RPB1和 EF1-α 基因,并獲得了測(cè)序結(jié)果。因此,筆者構(gòu)建了包含這2個(gè)基因的MSA,并選擇Tamura-Nei模型作為DNA替代模型構(gòu)建進(jìn)化樹,結(jié)果如圖3所示。

    單基因分析提供的分辨率不高,很難區(qū)分物種之間的詳細(xì)差異,而通過雙基因進(jìn)化分析,可以清楚地看到樣本之間存在差異。在圖3中,這棵樹可以分為3個(gè)分支,分別屬于3個(gè)不同的物種。各分枝間樣品間也存在一定的進(jìn)化距離,說明在青海成功培植的羊肚菌種也有種間差異。

    對(duì)于野生型DM樣本,所有樣本中成功測(cè)序的基因有3個(gè),分別是RPB1、RPB2、LSU。利用這些基因的MSA構(gòu)建進(jìn)化樹,如圖4所示。

    12個(gè)DM樣品在形態(tài)上有很大差異,說明它們屬于不同的物種。從進(jìn)化樹中可以看到4個(gè)分支,每個(gè)分支與其他分支之間的距離都很大,所以筆者認(rèn)為其中有超過4個(gè)不同的物種。特別是,樣本DMBMM064有一個(gè)更長(zhǎng)的分支,這意味著該樣本與其他樣本差異更大。

    2.3 基于多基因數(shù)據(jù)庫搜索的樣本品系推測(cè)

    通過在數(shù)據(jù)庫中搜索單個(gè)基因序列來識(shí)別物種,將會(huì)由于序列相似性而檢索出多個(gè)不同結(jié)果,這給確定樣本的種類帶來了巨大困難。因此,本研究結(jié)合了各樣本中多個(gè)基因的序列相似性搜索結(jié)果以及形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行了樣本推斷。使用BLAST來進(jìn)行同源序列搜索,在查詢參數(shù)中,設(shè)置物種限定為羊肚菌屬( Morchella ),然后提取每個(gè)查詢結(jié)果的物種信息,并根據(jù)每個(gè)樣本的多基因搜索結(jié)果確定羊肚菌品種,獲得最接近的物種(表5、表6)。

    2.4 同已文獻(xiàn)報(bào)道羊肚菌品系的關(guān)系

    為了研究青海羊肚菌與其它報(bào)道品種之間的關(guān)系,從文獻(xiàn)檢索到序列的索引號(hào),并從GenBank提取了162個(gè)樣本的基因序列。在本研究的樣本中,有20個(gè)包含同文獻(xiàn)匹配的4個(gè)基因序列區(qū)域。經(jīng)過序列比對(duì)和分子進(jìn)化分析,得到進(jìn)化樹(圖5)。

    可以看出,本研究的樣品與報(bào)道的羊肚菌的遺傳距離較大。這也說明青海互助縣北山野生羊肚菌具有相對(duì)獨(dú)立的進(jìn)化系統(tǒng),且存在種群隔離的趨勢(shì)。DM樣品是野外采集的野生樣品,可以看出DM樣品之間的差異大于SD樣品。

    2.5 典型的序列差異

    為了識(shí)別樣本序列和現(xiàn)有已知羊肚菌品種的序列差異,筆者進(jìn)行了序列比較。對(duì)于RPB1基因,合并了133個(gè)羊肚菌同源序列,它們是SD樣本、DM樣本和從數(shù)據(jù)庫檢索得到的同源序列。MSA比較結(jié)果發(fā)現(xiàn),DMBMM064與其他序列有相對(duì)較大的遺傳差異。將此序列與最接近的樣本序列JQ322139.1進(jìn)行了比較,獲得點(diǎn)陣圖分析結(jié)果如圖6所示,紅圈中的線是不連續(xù)的,這意味2個(gè)樣本中的RPB1基因序列不同,表明2個(gè)樣本有很大的進(jìn)化距離。

    如圖7所示,該樣本序列同數(shù)據(jù)庫序列的比對(duì)結(jié)果,是匹配度最高的結(jié)果,尚且存在一些差異,顯示出本樣本獨(dú)特,其功能和特征還需進(jìn)一步的探索。

    3.6 形態(tài)和地理分布

    本研究發(fā)現(xiàn),青海野生羊肚菌有較高的序列多樣性,與其他已知的羊肚菌品種相比,包含DMBBY014、DMBMM064和DMBMM005的分支,有更高的序列差異和較長(zhǎng)的進(jìn)化距離,可能包含新的品系和菌株,較高的品系多樣性,為羊肚菌的栽培和推廣提供較好的遺傳資源。

    3 討論與結(jié)論

    在本研究收集了22個(gè)羊肚菌樣本,并為每個(gè)樣本進(jìn)行了5個(gè)基因區(qū)域的測(cè)序。根據(jù)樣本的測(cè)序結(jié)果,結(jié)合從GenBank數(shù)據(jù)庫下載的同源序列,并進(jìn)行進(jìn)化分析,探索它們之間的差異。結(jié)果表明,栽培樣本包括3個(gè)主要品種,分別是六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯棱羊肚菌,這些品種均屬于黑色羊肚菌支系,是我國食用菌栽培行業(yè)發(fā)展迅速的一類真菌,具有重要的經(jīng)濟(jì)和科研價(jià)值[23]。栽培樣本的DNA序列同數(shù)據(jù)庫已有條目相比,存在一定程度的序列變異,表明具有一定序列變異的品種,已能夠很好地適應(yīng)當(dāng)?shù)胤N植環(huán)境,某些位點(diǎn)的變化不會(huì)影響羊肚菌生長(zhǎng)的適應(yīng)性。

    對(duì)于野生羊肚菌樣本,它們同已知的物種有更高的序列位點(diǎn)差異,在野生品種之間也有較大的遺傳距離,這表明它可能含有新的羊肚菌菌株或新的羊肚菌品種。與此同時(shí),這些野生樣本收集自較小范圍的特定地理區(qū)域,該區(qū)域同其他羊肚菌的生長(zhǎng)區(qū)域相隔很遠(yuǎn),這也體現(xiàn)出特定的環(huán)境有助于進(jìn)化出這些新的羊肚菌菌株。

    序列比較也發(fā)現(xiàn)了樣本序列和數(shù)據(jù)庫條目之間的一些差異。例如,DMBMM064與所有已知物種的遺傳距離相對(duì)較大,這表明它經(jīng)歷了較長(zhǎng)的分化時(shí)期,可能是新的羊肚菌品種。多方面的全面分析將非常有必要。全基因組測(cè)序和基因功能研究將有助于發(fā)現(xiàn)新品種及其功能特征,這對(duì)培養(yǎng)野生的新菌株也非常重要。

    本研究初步鑒定了22個(gè)適合在中國北方生長(zhǎng)的羊肚菌樣本,擴(kuò)大了筆者對(duì)羊肚菌屬的多樣性和分布特點(diǎn)的了解,這對(duì)于選育和栽培羊肚菌新品種,獲得經(jīng)濟(jì)效益,更深入、全面的分子水平分析將非常有幫助。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Du X H,Zhao Q,O Donnell K,et al. Multigene molecular phylogenetics reveals true morels ( Morchella ) are especially species-rich in China[J]. Fungal Genetics and Biology,2012,49(6):455-469.

    [2]劉 偉,張倩倩,舒 芳,等. 梯棱羊肚菌全基因組SNP/Indel分析及基于Indel標(biāo)記的遺傳連鎖圖譜構(gòu)建[J]. 菌物學(xué)報(bào),2019,38(12):2195-2204. .

    [3]Chai H M,Chen W M,Zhang X L,et al. Structural variation and phylogenetic analysis of the mating-type locus in the genus ?Morchella [J]. Mycologia,2019,111(4):551-562.

    [4]Cai Z N,Li W,Mehmood S,et al. Structural characterization, in vitro ?and ?in vivo ?antioxidant activities of a heteropolysaccharide from the fruiting bodies of ?Morchella esculenta [J]. Carbohydr Polym,2018,195:29-38.

    [5]王 龍,周慶平,劉建明. 基于rDNA-ITS序列的甘肅甘南野生羊肚菌遺傳多樣性分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2020,48(17):81-84.

    [6]Zhu D. Research progress on artificial cultivation of ?Morchella [J]. Edible Fungi of China,2008,27(4):3-5.

    [7]劉春麗,劉紹雄,李建英,等. 羊肚菌新品種“中菌羊肚菌1號(hào)”選育[J]. 中國食用菌,2020,39(10):22-26,36.

    [8]Kuo M,Dewsbury D R,O Donnell K,et al. Taxonomic revision of true morels ( Morchella ) in Canada and the United States[J]. Mycologia,2012,104(5):1159-1177.

    [9]Clowez P,Les Morilles. Une nouvelle approche mondiale du genre ?Morchella [J]. Bulletin de la Société Mycologique de France,2012,126:199-376.

    [10]O Donnell K,Rooney A P,Mills G L,et al. Phylogeny and historical biogeography of true morels ( Morchella ) reveals an Early Cretaceous origin and high continental endemism and provincialism in the Holarctic[J]. Fungal Genetics and Biology,2011,48(3):252-265.

    [11]Du X H,Zhao Q,Yang Z L,et al. How well do ITS rDNA sequences differentiate species of true morels ( Morchella )?[J]. Mycologia,2012,104(6):1351-1368.

    [12]Baroni T J,Beug M W,Cantrell S A,et al. Four new species of ?Morchella ?from the Americas[J]. Mycologia,2018,110(6):1205-1221.

    [13]Voitk A,Beug M W,O Donnell K,et al. Two new species of true morels from Newfoundland and Labrador:cosmopolitan ?Morchella eohespera ?and parochial ?M. laurentiana [J]. Mycologia,2016,108(1):31-37.

    [14]Altschul S F,Madden T L,Schffer A A,et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST:a new generation of protein database search programs[J]. Nucleic Acids Research,1997,25(17):3389-3402.

    [15]Pildain M B,Visnovsky S B,Barroetavea C. Phylogenetic diversity of true morels ( Morchella ),the main edible non-timber product from native Patagonian forests of ?Argentina [J]. Fungal Biology,2014,118(9/10):755-763.

    [16]Phanpadith P,Yu Z D,Li T. High diversity of ?Morchella ?and a novel lineage of the Esculenta clade from the north Qinling Mountains revealed by GCPSR-based study[J]. Scientific Reports,2019,9:19856.

    [17]Richard F,Bellanger J M,Clowez P,et al. True morels ( Morchella ,Pezizales) of Europe and North America:evolutionary relationships inferred from multilocus data and a unified taxonomy[J]. Mycologia,2015,107(2):359-382.

    [18]Du X H,Wu D M,He G Q,et al. Six new species and two new records of ?Morchella ?in China using phylogenetic and morphological analyses[J]. Mycologia,2019,111(5):857-870.

    [19]Edgar R C. MUSCLE:multiple sequence alignment with high accuracy and high throughput[J]. Nucleic Acids Research,2004,32(5):1792-1797.

    [20]Minh B Q,Schmidt H,Chernomor O,et al. IQ-TREE 2:new models and efficient methods for phylogenetic inference in the genomic era[J]. Molecular Biology & Evolution,2020,37(5):1530-1534.

    [21]Kumar S,Stecher G,Li M,et al. MEGA X:molecular evolutionary genetics analysis across computing platforms[J]. Molecular Biology & Evolution,2018,35(6):1547-1549.

    [22]Tamura K,Nei M.Estimation of the number of nucleotide substitutions in the control region of mitochondrial DNA in humans and chimpanzees[J]. Molecular Biology & Evolution,1993,10(3):512-526.

    [23]杜習(xí)慧. 黑色羊肚菌支系的物種資源、生殖模式和遺傳多樣性研究進(jìn)展[J]. 菌物研究,2019,17(4):240-251.

    猜你喜歡
    羊肚菌遺傳多樣性青藏高原
    青藏高原上的“含羞花”
    為了讓青藏高原的天更藍(lán)、水更綠、草原更美
    貢山高山峽谷氣候下人工種植羊肚菌的技術(shù)與管理
    長(zhǎng)白山區(qū)野生羊肚菌與其土壤成分的相關(guān)性分析
    茄子種質(zhì)資源農(nóng)藝性狀遺傳多樣性分析
    淺析田間水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與完善
    西藏野核桃的表型特征及其保育措施
    長(zhǎng)白山區(qū)野生羊肚菌結(jié)構(gòu)與生長(zhǎng)分析
    葡萄園套種“羊肚菌” 增收增效又環(huán)保
    水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與遺傳多樣性研究
    青春草视频在线免费观看| 最新在线观看一区二区三区 | 高清视频免费观看一区二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 中文字幕精品免费在线观看视频| 岛国毛片在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 赤兔流量卡办理| 男女高潮啪啪啪动态图| h视频一区二区三区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 免费少妇av软件| 男女边吃奶边做爰视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲精品自拍成人| 青春草国产在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 97精品久久久久久久久久精品| 国产黄色免费在线视频| 午夜福利视频精品| 成人免费观看视频高清| 午夜91福利影院| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品久久久久成人av| 成人亚洲欧美一区二区av| 美国免费a级毛片| 男女之事视频高清在线观看 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产亚洲一区二区精品| 69精品国产乱码久久久| 18禁观看日本| 亚洲av福利一区| 综合色丁香网| 99热网站在线观看| 国产黄色免费在线视频| 欧美黑人欧美精品刺激| videos熟女内射| 天堂8中文在线网| 亚洲人成77777在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 一区二区av电影网| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 熟女av电影| 一级a爱视频在线免费观看| av在线app专区| 亚洲第一青青草原| 亚洲第一区二区三区不卡| 街头女战士在线观看网站| 中文字幕色久视频| 天美传媒精品一区二区| 欧美人与性动交α欧美软件| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲成人国产一区在线观看 | 色精品久久人妻99蜜桃| 一本色道久久久久久精品综合| 成人漫画全彩无遮挡| 午夜91福利影院| 最近的中文字幕免费完整| 免费黄网站久久成人精品| 久热这里只有精品99| 热99久久久久精品小说推荐| 国产成人一区二区在线| 久久免费观看电影| 99热网站在线观看| 91精品国产国语对白视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久久久久人妻| 99re6热这里在线精品视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费在线观看黄色视频的| 国产成人啪精品午夜网站| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产精品国产三级国产专区5o| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩av不卡免费在线播放| 国产成人欧美在线观看 | 色精品久久人妻99蜜桃| 看非洲黑人一级黄片| 夫妻午夜视频| 国产精品熟女久久久久浪| 自线自在国产av| 亚洲国产精品999| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| av国产精品久久久久影院| 免费黄色在线免费观看| 赤兔流量卡办理| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产成人欧美在线观看 | 一级毛片电影观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 丝袜在线中文字幕| 欧美黑人精品巨大| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产国语露脸激情在线看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 两个人看的免费小视频| 久久 成人 亚洲| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲欧美一区二区三区久久| 日韩欧美精品免费久久| 蜜桃国产av成人99| 韩国精品一区二区三区| 免费少妇av软件| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产成人精品无人区| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲人成电影观看| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲欧洲日产国产| 曰老女人黄片| 国产在线一区二区三区精| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲,欧美,日韩| 日韩大码丰满熟妇| 免费av中文字幕在线| 亚洲情色 制服丝袜| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲图色成人| 啦啦啦 在线观看视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 免费av中文字幕在线| 欧美日韩av久久| 秋霞伦理黄片| 欧美精品一区二区大全| 七月丁香在线播放| 激情五月婷婷亚洲| 久久精品久久精品一区二区三区| 美女国产高潮福利片在线看| 久久精品国产a三级三级三级| 国产日韩欧美在线精品| 国产高清不卡午夜福利| 18在线观看网站| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲国产欧美网| 欧美 日韩 精品 国产| 人妻 亚洲 视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 精品国产一区二区久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产片特级美女逼逼视频| 国产野战对白在线观看| 国产在线免费精品| 日本av免费视频播放| 久久久久精品国产欧美久久久 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 男女之事视频高清在线观看 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 一边亲一边摸免费视频| 麻豆乱淫一区二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 成人国产av品久久久| 高清在线视频一区二区三区| 国产在线免费精品| 亚洲国产av新网站| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 天天影视国产精品| 免费在线观看黄色视频的| 日本欧美国产在线视频| 91精品三级在线观看| 七月丁香在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| 老司机影院毛片| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品免费视频内射| 国产精品av久久久久免费| 丰满乱子伦码专区| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲天堂av无毛| av电影中文网址| 考比视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一级a爱视频在线免费观看| 黄色一级大片看看| av天堂久久9| 亚洲av在线观看美女高潮| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜免费鲁丝| 精品人妻在线不人妻| av福利片在线| 秋霞在线观看毛片| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美国产精品一级二级三级| 在线观看人妻少妇| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品久久久精品久久久| 日本黄色日本黄色录像| 欧美国产精品一级二级三级| 无遮挡黄片免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久av网站| av片东京热男人的天堂| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 桃花免费在线播放| 国产日韩欧美视频二区| 国产免费福利视频在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 一区福利在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 超碰97精品在线观看| 香蕉丝袜av| 中国国产av一级| 久久久国产欧美日韩av| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 精品福利永久在线观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产又色又爽无遮挡免| xxx大片免费视频| 国产一级毛片在线| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品二区激情视频| 丰满乱子伦码专区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 制服诱惑二区| 免费黄色在线免费观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 美国免费a级毛片| 亚洲,欧美精品.| 十分钟在线观看高清视频www| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 香蕉丝袜av| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美97在线视频| 成人国产麻豆网| 欧美成人午夜精品| 成人毛片60女人毛片免费| 91精品国产国语对白视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 高清av免费在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲成人av在线免费| 青青草视频在线视频观看| 亚洲第一av免费看| 日韩大片免费观看网站| 国产xxxxx性猛交| 中文欧美无线码| 日本欧美国产在线视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜免费鲁丝| 久久亚洲国产成人精品v| 大码成人一级视频| 涩涩av久久男人的天堂| 久久性视频一级片| 日韩免费高清中文字幕av| 丝袜喷水一区| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产精品免费视频内射| 久久久久精品人妻al黑| 久久久精品94久久精品| 成年动漫av网址| 日本wwww免费看| 韩国高清视频一区二区三区| 男的添女的下面高潮视频| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲第一青青草原| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲av男天堂| 乱人伦中国视频| 成人黄色视频免费在线看| 黄色视频在线播放观看不卡| 成人亚洲欧美一区二区av| 校园人妻丝袜中文字幕| 两个人免费观看高清视频| 七月丁香在线播放| 韩国精品一区二区三区| 人人妻人人澡人人看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产成人精品久久久久久| 国产1区2区3区精品| 宅男免费午夜| 男女国产视频网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品午夜福利在线看| av线在线观看网站| 人人妻人人澡人人看| 老汉色∧v一级毛片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 欧美在线黄色| 99热网站在线观看| av线在线观看网站| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产成人欧美| 国产精品无大码| 秋霞在线观看毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 9热在线视频观看99| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久久精品人妻al黑| 看免费av毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 热re99久久精品国产66热6| 色精品久久人妻99蜜桃| 少妇 在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 五月天丁香电影| 丝袜美腿诱惑在线| 午夜福利影视在线免费观看| 99国产综合亚洲精品| 在线观看免费高清a一片| 亚洲久久久国产精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 尾随美女入室| 91老司机精品| 欧美人与善性xxx| 国产片内射在线| 精品视频人人做人人爽| 久久久国产一区二区| 丝袜喷水一区| 精品午夜福利在线看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩精品有码人妻一区| 韩国精品一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 自线自在国产av| av福利片在线| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲专区中文字幕在线 | tube8黄色片| 亚洲av男天堂| 91成人精品电影| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 欧美97在线视频| 精品久久蜜臀av无| 男女无遮挡免费网站观看| 国产男人的电影天堂91| 男人添女人高潮全过程视频| 高清av免费在线| 日本欧美视频一区| 在线观看三级黄色| 日韩一区二区视频免费看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一个人免费看片子| 亚洲国产欧美在线一区| 久久狼人影院| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久婷婷青草| 国产高清国产精品国产三级| 欧美人与善性xxx| 黄片播放在线免费| 在线天堂中文资源库| av国产精品久久久久影院| 91精品三级在线观看| 天美传媒精品一区二区| 日本黄色日本黄色录像| 中文字幕高清在线视频| 国产av码专区亚洲av| 日韩免费高清中文字幕av| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美激情高清一区二区三区 | 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲精品国产区一区二| 婷婷色综合大香蕉| 久久精品国产a三级三级三级| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产精品一区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 青青草视频在线视频观看| 91精品三级在线观看| av国产精品久久久久影院| 国产欧美亚洲国产| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美激情高清一区二区三区 | 青草久久国产| 如何舔出高潮| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美97在线视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 两个人免费观看高清视频| 伦理电影免费视频| 国产毛片在线视频| 久久青草综合色| 在线天堂中文资源库| 久久韩国三级中文字幕| 中文字幕人妻丝袜制服| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 老鸭窝网址在线观看| 久久人人爽人人片av| av在线观看视频网站免费| 蜜桃国产av成人99| 国产国语露脸激情在线看| 乱人伦中国视频| 中国三级夫妇交换| 亚洲国产看品久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲国产精品999| xxxhd国产人妻xxx| 大陆偷拍与自拍| 一本大道久久a久久精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 九色亚洲精品在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲av男天堂| h视频一区二区三区| 久久久久精品国产欧美久久久 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 视频区图区小说| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美中文综合在线视频| 99re6热这里在线精品视频| 国产免费视频播放在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 国产老妇伦熟女老妇高清| 电影成人av| 韩国av在线不卡| 国产精品一国产av| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 女人精品久久久久毛片| 成年动漫av网址| 久久影院123| 亚洲国产日韩一区二区| 一本久久精品| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 黄片无遮挡物在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 国产97色在线日韩免费| 国产av一区二区精品久久| 天堂8中文在线网| 尾随美女入室| 男男h啪啪无遮挡| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 五月天丁香电影| 亚洲av国产av综合av卡| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产成人欧美在线观看 | 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品久久久久久久久免| 成人国产av品久久久| www.精华液| 国产毛片在线视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 美女大奶头黄色视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产国语露脸激情在线看| 午夜影院在线不卡| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 看十八女毛片水多多多| 日本欧美国产在线视频| 国产黄频视频在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 最新在线观看一区二区三区 | av有码第一页| 在线 av 中文字幕| 91国产中文字幕| 亚洲图色成人| 日韩av免费高清视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 好男人视频免费观看在线| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 蜜桃国产av成人99| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品国产av在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美日韩综合久久久久久| 曰老女人黄片| 中文字幕人妻熟女乱码| 午夜影院在线不卡| 天堂8中文在线网| 欧美日韩综合久久久久久| 九色亚洲精品在线播放| 99热国产这里只有精品6| 免费黄频网站在线观看国产| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲成人av在线免费| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品国产乱码久久久久久小说| 免费少妇av软件| 人人澡人人妻人| 亚洲av电影在线进入| 久久久久精品性色| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲国产精品国产精品| 激情五月婷婷亚洲| 色94色欧美一区二区| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品亚洲成国产av| 搡老乐熟女国产| 午夜福利免费观看在线| 下体分泌物呈黄色| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日韩视频在线欧美| 校园人妻丝袜中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 超碰97精品在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 人妻人人澡人人爽人人| 在线观看免费日韩欧美大片| 无遮挡黄片免费观看| 9色porny在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲成人免费av在线播放| 久久ye,这里只有精品| 午夜福利免费观看在线| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲国产av新网站| 蜜桃在线观看..| 精品国产国语对白av| 久久久亚洲精品成人影院| 久久人人爽人人片av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产精品免费视频内射| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲成人国产一区在线观看 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品酒店卫生间| 婷婷色综合www| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成人国产麻豆网| videos熟女内射| 中文字幕色久视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美人与善性xxx| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久女婷五月综合色啪小说| 婷婷色综合www| 精品福利永久在线观看| 老司机在亚洲福利影院| av在线观看视频网站免费| 18禁动态无遮挡网站| 性少妇av在线| 一级爰片在线观看| 在线观看三级黄色| 国产又色又爽无遮挡免| 午夜免费鲁丝| 免费高清在线观看日韩| 老司机影院成人| 日韩一本色道免费dvd| 欧美成人午夜精品| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲国产精品国产精品| 国产男人的电影天堂91| 成年动漫av网址| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 成年人免费黄色播放视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产黄色视频一区二区在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 18禁观看日本| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 天堂8中文在线网| 欧美最新免费一区二区三区| 在现免费观看毛片| 久久99精品国语久久久| 亚洲国产成人一精品久久久| e午夜精品久久久久久久| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片电影观看| 看十八女毛片水多多多| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲综合色网址| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 韩国av在线不卡| 亚洲av福利一区| 国产免费现黄频在线看| 亚洲精品在线美女| 午夜久久久在线观看| 亚洲成人av在线免费| 国产一级毛片在线| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男女国产视频网站| 黄频高清免费视频| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲国产精品一区三区| 成人毛片60女人毛片免费| 十八禁高潮呻吟视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲欧美色中文字幕在线|