蘭尼堿受體2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義

摘 要 目的：探討蘭尼堿受體2（ryanodine receptor 2， RyR2）在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義。方法：使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、蛋白質(zhì)印跡、免疫組織化學(xué)染色等方法檢測(cè)RyR2在浸潤(rùn)性乳腺癌患者乳腺癌、乳腺癌旁和正常乳腺組織樣本中的表達(dá)水平，并分析其與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和超聲檢查特征間的關(guān)系。結(jié)果和結(jié)論：RyR2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)水平顯著低于乳腺癌旁和正常乳腺組織（均P<0.01），且其在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的低表達(dá)與乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)高、雌激素受體陰性、存在微鈣化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（均P<0.05）。結(jié)合超聲檢查和RyR2檢測(cè)結(jié)果能為浸潤(rùn)性乳腺癌的診斷提供更準(zhǔn)確的判讀結(jié)果。

關(guān)鍵詞 蘭尼堿受體2 浸潤(rùn)性乳腺癌 超聲檢查

中圖分類號(hào)：R737.9； R446 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2022）07-0062-04

引用本文 李臘梅. 蘭尼堿受體2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[J]. 上海醫(yī)藥， 2022， 43（7）： 62-65.

Expression of ryanodine receptor 2 in invasive breast cancer tissues and its clinicopathological significance

LI Lamei

（Department of Pathology， the Seventh People’s Hospital of Zhengzhou， Zhengzhou 450016， China）

ABSTRACT Objective： To investigate the expression of ryanodine receptor 2 （RyR2） in invasive breast cancer tissues and its clinicopathological significance. Methods： RyR2 expression levels in breast， adjacent and normal breast tissue samples from patients with invasive breast cancer were determined using polymerase chain reaction， Western blotting， and immunohistochemical staining and their relationship with breast cancer histological grade， lymph node metastasis and ultrasonographic features was analyzed. Results & Conclusion： The expression level of RyR2 in invasive breast cancer tissues was significantly lower than that in adjacent breast cancer tissues and normal breast tissues （all P<0.01）， and its low expression in invasive breast cancer tissues was associated with high histological grade of breast cancer， estrogen receptor negativity， microcalcification and lymph node metastasis （all P<0.05）. Combination of ultrasonography with RyR2 detection results can provide more accurate interpretation results for the diagnosis of invasive breast cancer.

KEy wORDS ryanodine receptor 2； invasive breast cancer； ultrasonography

乳腺癌是婦科常見腫瘤，嚴(yán)重威脅女性的健康和生命[1]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)乳腺癌是多因素相互作用的結(jié)果，眾多分子標(biāo)志物均有助于乳腺癌的診斷[2-3]。超聲檢查目前已普遍用于乳腺癌的早期篩查及診斷[4]，且通過(guò)觀察乳腺癌的超聲征象并結(jié)合腫瘤相關(guān)蛋白表達(dá)狀態(tài)可以預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后[5-6]。蘭尼堿受體2（ryanodine receptor 2， RyR2）與肺癌、肝癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[7-8]，但其在乳腺癌組織中的表達(dá)和臨床意義還未見有研究報(bào)告。本研究擬通過(guò)分析RyR2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)及與患者腫瘤超聲征象、雌激素受體（estrogen receptor， ER）狀態(tài)等之間的相關(guān)性，為浸潤(rùn)性乳腺癌的診斷提供新的更加精準(zhǔn)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2016年1月—2020年12月來(lái)我院就診并接受手術(shù)治療的浸潤(rùn)性乳腺癌患者的腫瘤組織樣本為研究對(duì)象，共收集到147例患者的浸潤(rùn)性乳腺癌組織樣本、41例患者的浸潤(rùn)性乳腺癌旁組織樣本，同時(shí)收集到21例乳腺癌患者的腫瘤遠(yuǎn)端正常乳腺組織樣本。所有患者均經(jīng)術(shù)前檢查（包括超聲檢查）和術(shù)后免疫組織化學(xué)檢查確診為乳腺癌。所有患者均是首次接受手術(shù)治療。

本研究的目的和方法已事先告知患者本人及家屬，患者本人或其家屬簽署了知情同意書。本研究方案獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 超聲檢查

對(duì)患者乳腺腫塊，使用西門子S3000和日立圖騰彩色多普勒超聲診斷系統(tǒng)進(jìn)行超聲檢查，探頭頻率8 ～ 12 MHz。記錄患者乳腺腫塊的大小、縱橫比、邊界、形態(tài)、微鈣化、彩色血流、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和后方回聲等數(shù)據(jù)。

1.3 免疫組織化學(xué)染色檢查

將以常規(guī)石蠟包埋的組織樣本切片，梯度洗脫，RyR2和ER抗體孵育，后續(xù)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。根據(jù)染色反應(yīng)的陽(yáng)性強(qiáng)度判斷結(jié)果：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6% ～ 25%為1分，26% ～ 50%為2分，51% ～ 75%為3分，≥76%為4分。評(píng)分≥1分為RyR2陽(yáng)性。

1.4 蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)

對(duì)患者組織樣本，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書提取組織蛋白，然后置冰上裂解30 min，低溫離心處理30 min，吸取上清液，得總蛋白。緊接著蛋白定量，加入上樣緩沖液，沸水煮5 min。進(jìn)行蛋白電泳、轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用脫脂牛奶封閉，孵育一抗，冰箱4 ℃下過(guò)夜。次日清洗，孵育二抗，最后使用灰度掃描儀檢測(cè)有無(wú)RyR2表達(dá)。有表達(dá)為RyR2陽(yáng)性。

1.5 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcriptionpolymerase chain reaction， RT-PCR）

對(duì)患者組織樣本，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行組織RNA提取、定量、反轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。引物序列：RyR2，前序列ATTTTTCTGDCGACACCCGAT，反向序列TCCCAGGTGTAGACCAA；甘油醛-3-磷酸脫氫酶，前序列ATTTTTGTACCACAATGC，反向序列TGACCGGTGTCCCTGACGAT。有表達(dá)為RyR2陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)研究數(shù)據(jù)，使用SPSS 15.0軟件進(jìn)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Fisher最小顯著差異檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RyR2在不同乳腺組織中的表達(dá)

分別使用RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色檢查和蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)檢測(cè)了RyR2在不同乳腺組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示RyR2陽(yáng)性率在147例患者的浸潤(rùn)性乳腺癌組織樣本（腫瘤組）中為27.89%（41/147），在41例患者的浸潤(rùn)性乳腺癌旁組織樣本（癌旁組）中為75.61%（31/41），在21例患者的正常乳腺組織樣本（對(duì)照組）中為76.19%（16/21），即RyR2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)水平顯著低于浸潤(rùn)性乳腺癌旁組織和正常乳腺組織（圖1，均P<0.001）。

2.2 RyR2表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌組織臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

RyR2陽(yáng)性率在浸潤(rùn)性乳腺癌患者腫瘤組織樣本中為27.89%（41/147），其中在ER陽(yáng)性患者中為35.19%（38/108），在ER陰性患者中為7.69%（3/39），差異顯著（χ2=10.769，P=0.001）；在組織學(xué)分級(jí)Ⅰ ～ Ⅱ級(jí)患者中為32.20%（38/118），在組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)患者中為10.34%（3/29），差異顯著（χ2=5.530，P=0.019）；在腫瘤TNM分期Ⅰ期患者中為11.76%（4/34），在腫瘤TNM分期Ⅱ～ Ⅲ期患者中為32.74%（37/113），差異顯著（χ2=5.719，P=0.017）。

2.3 RyR2表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌組織超聲征象的關(guān)系

分析RyR2表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌組織超聲征象的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織的大小、形態(tài)、邊界、縱橫比、后方回聲衰減和彩色血流信號(hào)與RyR2表達(dá)均沒有相關(guān)性（均P>0.05），但在超聲檢查提示存在微鈣化或腋窩淋巴結(jié)增大的腫瘤組織中，RyR2低表達(dá)（表1，均P<0.05）。

3 討論

浸潤(rùn)性乳腺癌是婦科常見腫瘤。目前，乳腺癌的發(fā)病率越來(lái)越高，且發(fā)病年齡呈年輕化趨勢(shì)，成為嚴(yán)重威脅女性生命健康的主要疾病之一。乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制十分復(fù)雜，現(xiàn)尚不完全清楚，但隨著分子生物學(xué)和生物技術(shù)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的乳腺癌相關(guān)分子標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)，并被用于乳腺癌的診斷和治療中。

作為蘭尼堿受體家族成員，RyR2參與多種腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移，在這些腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用[7-9]。本研究通過(guò)RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色檢查和蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)檢測(cè)了RyR2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織、癌旁組織和正常乳腺組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)RyR2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于浸潤(rùn)性乳腺癌旁組織和正常乳腺組織（陽(yáng)性率分別為27.89%、75.61%和76.19%），提示RyR2可能具有抑制乳腺癌發(fā)生發(fā)展和維持正常乳腺組織的作用，有用作浸潤(rùn)性乳腺癌分子標(biāo)志物的潛力。

本研究還分析了RyR2表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌組織超聲征象的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織的大小、形態(tài)、邊界、縱橫比、后方回聲衰減和彩色血流信號(hào)與RyR2表達(dá)均沒有相關(guān)性，但在超聲檢查提示存在微鈣化或腋窩淋巴結(jié)增大的腫瘤組織中，RyR2低表達(dá)。鑒于本研究免疫組織化學(xué)染色檢查結(jié)果顯示，在RyR2高表達(dá)樣本中，ER也幾乎高表達(dá)，故術(shù)前超聲檢查提示存在微鈣化且RyR2低表達(dá)可能提示浸潤(rùn)性乳腺癌ER低表達(dá)。此外，RyR2在超聲檢查提示腋窩淋巴結(jié)增大的浸潤(rùn)性乳腺癌組織中低表達(dá)，這與免疫組織化學(xué)染色檢查顯示RyR2在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的浸潤(rùn)性乳腺癌組織中低表達(dá)的結(jié)果一致。結(jié)合RyR2表達(dá)情況和超聲檢查結(jié)果，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)浸潤(rùn)性乳腺癌的惡性程度和患者預(yù)后。

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