AIDS患者抗病毒治療中IP-10水平的變化及臨床意義

范偉光， 蘇苗苗， 孟 娟， 石鵬輝， 張 珍

（1.保定市人民醫(yī)院檢驗科，河北 保定 071000；2.保定市人民醫(yī)院感染科，河北 保定 071000）

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是導(dǎo)致人類免疫功能缺陷的主要病毒，可主動整合入宿主細(xì)胞的DNA，難以徹底清除[1]。HIV感染可導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫功能抑制和缺陷，進(jìn)而導(dǎo)致多種機(jī)會性感染、惡性腫瘤等并發(fā)癥，最終導(dǎo)致死亡[2]。近年來，隨著高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（highly active antiroviral therapy，HAART）的廣泛應(yīng)用，由HIV感染導(dǎo)致的獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的傳染率及病死率明顯下降。但AIDS患者體內(nèi)的HIV仍可以以潛伏形式，即前病毒DNA的形式持續(xù)存在，持續(xù)存在的HIV儲存庫是無法根治HIV感染的根本原因[3]。干擾素誘生蛋白10（interferon-inducible protein-10，IP-10）屬于趨化因子CXC亞家族，由白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和角化細(xì)胞等細(xì)胞分泌[4]。IP-10可通過與CXC趨化因子受體3（CXC chemokine receptor 3，CXCR3）結(jié)合，發(fā)揮趨化作用，募集多種CXCR3+細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位[5]，介導(dǎo)輔助性T細(xì)胞（T helper cell，Th）1型炎癥反應(yīng)。IP-10與病毒性感染中的炎癥反應(yīng)也有密切關(guān)系，在機(jī)體抗病毒感染的免疫應(yīng)答過程中，通過與其受體CXCR3的相互作用參與機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)[6]。目前，關(guān)于AIDS患者治療前后IP-10的變化及IP-10與HAART療效的關(guān)系的研究較少。為此，本研究擬探討IP-10在HIV感染中的臨床價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年1月—2019年6月保定市人民醫(yī)院接受HAART的AIDS患者200例（AIDS組），其中男155例、女45例，年齡（34.57±7.62）歲。以HAART后血漿HIV-1 RNA＜50 拷貝/mL定義為病毒抑制，根據(jù)治療后的HIV-1 RNA水平將AIDS患者分為HIV-1抑制組和HIV-1未抑制組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫印跡法均確認(rèn)HIV-1抗體陽性；（2）初次確診為HIV感染，處于感染無癥狀期，未接受過HAART；（3）最近1個月內(nèi)未出現(xiàn)外傷、急慢性感染或炎癥性疾病；（4）最近1個月內(nèi)未服用過抗菌藥物、免疫調(diào)節(jié)藥物等；（5）無免疫系統(tǒng)疾病史；（6）無嚴(yán)重心、腦、血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾病；（7）符合HIV-1抗病毒治療條件；（8）患者治療依從性和隨訪依從性良好，且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）并發(fā)乙型肝炎、丙型肝炎、全身感染等其他感染性疾??；（2）并發(fā)惡性腫瘤及嚴(yán)重的心、腦、血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾??；（3）處于妊娠期及哺乳期；（4）有吸毒史；（5）治療依從性差，不能完成治療及配合隨訪。另選取保定市人民醫(yī)院健康體檢者100名作為正常對照組，其中男75名、女25名，年齡（35.49±8.15）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫印跡法確認(rèn)為HIV-1抗體陰性；（2）體格檢查正常，各項實驗室檢測指標(biāo)均處于參考區(qū)間內(nèi)，或超出參考區(qū)間但判斷無臨床意義；（3）無嚴(yán)重心、腦、血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾病史或住院史；（4）無手術(shù)、外傷、輸血和藥物過敏史；（5）簽署知情同意書。AIDS組與正常對照組性別、年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)保定市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 治療方法

HIV-1感染患者確診后立即接受HAART，采用我國一線免費抗病毒治療方案[7]：富馬酸替諾福韋二吡呋酯片，0.3 g/次，每天1次；拉米夫定0.3 g/次，每天1次；依非韋倫0.6 g/次，每天1次。所有患者均持續(xù)治療18個月。

1.3 方法

分別于治療前及治療2周、1個月、2個月、3個月、6個月、12個月和18個月時采集AIDS患者空腹肘靜脈血8～10 mL。樣本采集后采集正常對照者體檢當(dāng)日空腹肘靜脈血8～10 mL，分別置于普通真空采血管和乙二胺四乙酸二鈉抗凝采血管中，混勻，分離血清或血漿。

在抗凝血樣本中加入單克隆熒光抗體標(biāo)記，采用BD FACSCalibur 流式細(xì)胞儀（美國BD公司）及配套試劑檢測CD4+和CD8+T細(xì)胞水平。采用cobas TaqMan全自動病毒載量分析系統(tǒng)（瑞士羅氏公司）檢測血漿HIV-1 RNA，檢測下限和定量下限均為20 拷貝/mL。采用Quantikine酶聯(lián)免疫試劑盒（美國R&D Systems公司）測定血清IP-10水平，嚴(yán)格按試劑說明書操作，試劑盒最低檢測限為1.67 pg/mL，線性范圍1.67～5 000 pg/mL，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為3.6%、6.7%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以x±s表示，2個組之間比較采用獨立樣本t檢驗，治療前后比較采用配對t檢驗。計數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Spearman相關(guān)分析評估IP-10與其他指標(biāo)之間的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AIDS組HIV-1 RNA水平

AIDS組中同性傳播149例（74.50%），異性傳播51例（25.50%），HIV-1 RNA為（4.62±0.73）lg拷貝/mL。

2.2 AIDS組與正常對照組各項指標(biāo)比較

AIDS組CD4+T細(xì)胞百分比顯著低于正常對照組（P＜0.01），IP-10水平和CD8+T細(xì)胞百分比顯著高于正常對照組（P＜0.01）。見表1。

表1 AIDS組與正常對照組各項指標(biāo)比較

2.3 AIDS患者治療前、后各項指標(biāo)比較

與治療前比較，AIDS患者隨著治療時間的延長，CD4+T細(xì)胞百分比逐漸升高（P＜0.01），CD8+T細(xì)胞百分比及IP-10、HIV-1 RNA水平逐漸降低（P＜0.01），HIV-1復(fù)制受抑制的患者比例逐漸升高（P＜0.01）；治療18個月時HIV-1抑制的患者所占比例達(dá)到95.50%。見表2。

表2 AIDS患者治療前及治療后各時間點各項指標(biāo)的比較

2.4 治療后各時間點HIV-1抑制患者與HIV-1未抑制患者各項指標(biāo)的比較

治療3、6、12和18個月時，HIV-1抑制組CD4+T細(xì)胞百分比顯著高于HIV-1未抑制組（P＜0.01），CD8+T細(xì)胞百分比和IP-10水平均低于HIV-1未抑制組（P＜0.01）。見表3。

表3 治療后各時間點HIV-1抑制組與HIV-1未抑制組各項指標(biāo)的比較

2.5 AIDS患者治療前IP-10水平與CD4+T細(xì)胞百分比、CD8+T細(xì)胞百分比、HIV-1 RNA水平的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，治療前AIDS患者IP-10水平與CD4+T細(xì)胞百分比呈負(fù)相關(guān)（r=-0.763，P＜0.05），與CD8+T細(xì)胞百分比和HIV-1 RNA水平呈正相關(guān)（r值分別為0.801、0.823，P＜0.05）。

3 討論

HIV感染人體后主要攻擊輔助性T淋巴細(xì)胞，侵入細(xì)胞后會通過同源重組機(jī)制將自身的病毒基因整合入宿主T淋巴細(xì)胞，使其終生難以消除。IP-10是一種重要的CXC家族趨化因子，主要誘導(dǎo)因子是γ干擾素（interferon-gamma，IFN-γ），IP-10可通過與其受體的作用來趨化并激活Th至病灶位置，從而激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，抵抗感染，并抑制病毒復(fù)制過程[8]。在生理狀態(tài)下，IP-10的表達(dá)量較低；在病理條件下，各種抗原刺激可誘導(dǎo)外周血單個核細(xì)胞產(chǎn)生大量IP-10[9]。有Meta分析結(jié)果顯示，IP-10可作為診斷肺結(jié)核的生物標(biāo)志物，具有較高的敏感性和特異性[10]。有研究結(jié)果顯示，IP-10是感染HIV后水平最早上升的細(xì)胞因子之一[11]。IP-10可作為篩查急性期發(fā)熱的血清HIV抗體陰性者是否感染HIV的關(guān)鍵指標(biāo)，當(dāng)血漿IP-10水平為161.6 pg/mL時，其診斷HIV急性感染的敏感性、特異性分別為95.5%、76.5%[12]。本研究結(jié)果顯示，AIDS組IP-10水平顯著高于正常對照組（P＜0.01）。HIV-1感染可分別通過Toll樣受體（Toll-like receptor，TLR）7/9信號通路或黑色素瘤分化相關(guān)基因5（melanoma differentiationassociated gene 5，MDA5）/視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ（retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ）信號通路依賴性誘導(dǎo)IP-10表達(dá)上調(diào)[13]。在HIV急性感染期，聚集的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞可通過產(chǎn)生干擾素誘導(dǎo)包括單核細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞在內(nèi)的多種白細(xì)胞表達(dá)IP-10[14]。在HIV慢性感染期，HIV感染持續(xù)誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-γ也可直接誘導(dǎo)IP-10表達(dá)上調(diào)[15]。此外，本研究結(jié)果還顯示，AIDS組CD4+T細(xì)胞百分比顯著低于正常對照組（P＜0.01），CD8+T細(xì)胞百分比顯著高于正常對照組（P＜0.01）。這與HIV感染人體后主要攻擊Th細(xì)胞有關(guān)。

ROE等[16]的研究結(jié)果顯示，丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）與HIV合并感染患者血清IP-10水平顯著高于HIV單獨感染患者（P=0.012）；在HCV單獨感染患者中，肝纖維化與血清IP-10水平呈正相關(guān)（r=0.605，P=0.013）。本研究結(jié)果顯示，AIDS患者接受HAART后，CD4+T細(xì)胞百分比升高，HIV-1 RNA水平、CD8+T細(xì)胞百分比和IP-10水平降低；治療3、6、12和18個月，HIV-1抑制患者CD4+T細(xì)胞百分比顯著高于HIV-1未抑制患者（P＜0.01），CD8+T細(xì)胞百分比和IP-10水平均低于HIV-1未抑制患者（P＜0.01）；Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，AIDS患者IP-10水平與CD4+T細(xì)胞百分比呈負(fù)相關(guān)（r=-0.984，P＜0.05），與CD8+T細(xì)胞百分比和HIV-1 RNA水平呈正相關(guān)（r值分別為0.958、0.991，P＜0.05）。LIOVAT等[17]研究發(fā)現(xiàn)，在原發(fā)HIV感染的初期，血漿IP-10≥869 pg/mL預(yù)示HIV感染進(jìn)展迅速，IP-10水平升高預(yù)示著CD4+T細(xì)胞的迅速減少，同時能預(yù)測急性感染6個月后CD4+T細(xì)胞計數(shù)的變化。NOEL等[18]的研究結(jié)果顯示，HIV精英控制者入組時IP-10水平與12個月后的CD4+T細(xì)胞計數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.41，P=0.000 9）。RAMIREZ等[19]的研究結(jié)果表明，IP-10相關(guān)的T細(xì)胞功能下降可能是鈣信號傳導(dǎo)途徑異常的結(jié)果，同時也是p38磷酸化蛋白表達(dá)下降的結(jié)果。IP-10水平不僅與CD4+T細(xì)胞快速減少有關(guān)[20]，同時還可影響CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的功能[21]。因此，IP-10可作為判斷HIV感染嚴(yán)重程度的關(guān)鍵指標(biāo)，還可作為判斷HAART臨床療效的指標(biāo)。

總之，AIDS患者IP-10水平變化明顯，且與CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及HIV-1 RNA水平有關(guān)，是潛在的AIDS病情和療效評估的指標(biāo)。