BC-6000PLUS血液分析儀體液模式檢出限分析

龍一飛， 孟少偉， 劉健平， 張宏遠(yuǎn)， 林冬玲

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510006）

腦脊液、漿膜腔積液、關(guān)節(jié)腔積液等是臨床較常見的體液標(biāo)本，這些標(biāo)本的常規(guī)檢測，尤其是白細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，有非常重要的臨床價(jià)值。目前，很多全自動(dòng)血液分析儀已實(shí)現(xiàn)搭載體液標(biāo)本的細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類檢測模式，不但提高了檢測速度和準(zhǔn)確度、精密度，而且易于標(biāo)準(zhǔn)化，臨床應(yīng)用越來越廣泛。

深圳邁瑞公司BC-6000PLUS全自動(dòng)血液分析儀（簡稱BC-6000PLUS）帶有體液檢測模式，但廠商未提供體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測下限，無法確保低值體液標(biāo)本（尤其是腦脊液）檢測結(jié)果的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確性。我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 662—2020《臨床體液檢驗(yàn)技術(shù)》[1]（簡稱WS/T 662—2020）附錄A中明確要求每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立所用體液模式檢測系統(tǒng)的有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測下限。據(jù)此，本研究以我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 514—2017《臨床檢驗(yàn)方法檢出能力的確立與驗(yàn)證》[2]（簡稱WS/T 514—2017）文件內(nèi)容為指導(dǎo)，建立并評(píng)價(jià)BC-6000PLUS體液模式WBC-BF和RBC-BF細(xì)胞計(jì)數(shù)的空白限（limit of blank，LoB）和檢出限（limit of detection，LoD）[3]，以更好地指導(dǎo)臨床檢測工作。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本制備

1.1.1 空白樣本 以BC-6000PLUS配套稀釋液（DC稀釋液）為空白樣本。

1.1.2 系列低濃度樣本 根據(jù)WBC-BF與RBCBF的LoB值，各配制6個(gè)WBC-BF與RBC-BF低濃度水平樣本（根據(jù)WS/T 514—2017要求，系列低濃度樣本配制濃度最好為LoB～4倍LoB）。本研究系列低濃度樣本配制采用臨床新鮮腦脊液標(biāo)本，其WBC-BF與RBC-BF檢測濃度分別約0.01×109/L和0.01×1012/L，用0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行梯度稀釋，配制成10%、20%、40%、60%、80%、100%濃度比例稀釋樣本，稀釋后WBCBF系列理論濃度分別為0.001×109/L、0.002×109/L、0.004×109/L、0.006×109/L、0.008×109/L、0.010×109/L；RBC-BF系列理論濃度分別為0.001×1012/L、0.002×1012/L、0.004×1012/L、0.006×1012/L、0.008×1012/L、0.010×1012/L。

1.2 方法

參考WS/T 514—2017要求，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法建立WBC-BF與RBC-BF LoB值和LoD值。所有實(shí)驗(yàn)操作程序均嚴(yán)格按照儀器說明書和科室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件要求進(jìn)行。

1.2.1 LoB值 采用BC-6000PLUS配套DC稀釋液作為空白樣本，每天在BC-6000PLUS體液模式下重復(fù)檢測10次，連續(xù)6 d，得到60個(gè)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

1.2.2 LoD值 根據(jù)LoB值濃度范圍，人工配制一系列低濃度水平體液樣本。鑒于體液樣本穩(wěn)定性較差，不易保存，配制的6個(gè)WBC-BF與RBC-BF低濃度水平樣本在1 d內(nèi)的不同時(shí)間段重復(fù)檢測10次，WBC-BF與RBC-BF項(xiàng)目各得到60個(gè)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。若數(shù)據(jù)呈方差齊性，則采用參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算；若實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)呈非方差齊性，則采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 LoB值

BC-6000PLUS體液模式WBC-BF和RBCBF所有空白檢測值均為0。檢測結(jié)果符合正態(tài)分布，按公式LoB=μB+1.645σB計(jì)算LoB值，式中μB和σB為空白檢測結(jié)果均值和標(biāo)準(zhǔn)差。BC-6000PLUS體液模式WBC-BF LoB值為0×109/L，RBC-BF LoB值為0×1012/L。

2.2 LoD值

數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用非參數(shù)分析方法建立WBC-BF和RBC-BF LoD值，按公式LoD=LoB+Dsβ計(jì)算LoD值，式中Dsβ為檢測結(jié)果中位數(shù)（M）與第5百分位數(shù)間距，結(jié)果見表1、表2。

表1 系列低濃度WBC-BF樣本檢測結(jié)果 ×109/L

表2 系列低濃度RBC-BF樣本檢測結(jié)果 ×1012/L

2.2.1 WBC-BF LoD值 在60個(gè)低濃度水平樣本數(shù)據(jù)分布中，中位數(shù)（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩號(hào)數(shù)值=0.005×109/L，第5百分位數(shù)=60×0.05+0.5=第3.5秩號(hào)數(shù)值=0.001×109/L，Dsβ=0.005×109/L-0.001×109/L=0.004×109/L。WBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×109/L+0.004×109/L=0.004×109/L。

2.2.2 RBC-BF LoD值 在60個(gè)低濃度水平樣本數(shù)據(jù)分布中，中位數(shù)（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩號(hào)數(shù)值=0.006×1012/L，第5百分位數(shù)=60×0.05+0.5=第3.5秩號(hào)數(shù)值=0.002×1012/L，Dsβ=0.006×1012/L-0.002×1012/L=0.004×1012/L。RBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×1012/L+0.004×1012/L=0.004×1012/L。

3 討論

目前，傳統(tǒng)人工鏡檢方法已不能滿足臨床需要，腦脊液、漿膜腔積液、關(guān)節(jié)腔積液等體液標(biāo)本自動(dòng)化檢測將日益普及[4-5]?！禖NAS-CL02醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[7]，即ISO15189：2012要求醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室需對所選檢驗(yàn)程序進(jìn)行性能驗(yàn)證或確認(rèn)，證實(shí)其達(dá)到制造商判定標(biāo)準(zhǔn)，才可用于患者標(biāo)本檢測。因此，全自動(dòng)血液分析儀體液檢測模式性能驗(yàn)證非常重要，包括細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢出下限。

2020年10月1日，由國家衛(wèi)生健康委員會(huì)頒布的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 662—2020已正式實(shí)施。該標(biāo)準(zhǔn)附錄A明確規(guī)定每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立所用檢測系統(tǒng)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測下限，且檢測下限不能低于儀器最低檢出限（LoD）。因?yàn)楫?dāng)?shù)椭刁w液標(biāo)本細(xì)胞數(shù)量低于檢測下限值時(shí)，儀器檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性無法得到保證，此時(shí)仍需人工鏡檢計(jì)數(shù)復(fù)核確認(rèn)，尤其是腦脊液標(biāo)本。所以體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢出下限是最為關(guān)鍵的性能驗(yàn)證參數(shù)之一，儀器制造商如提供儀器的有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測下限，此時(shí)實(shí)驗(yàn)室僅需按計(jì)劃實(shí)施檢測下限值的驗(yàn)證，驗(yàn)證通過則可直接采用儀器制造商聲明的檢測下限值，但制造商并未提供BC-6000PLUS體液模式計(jì)數(shù)LoB值和LoD值性能說明，因此，本實(shí)驗(yàn)室需依據(jù)相關(guān)指南或標(biāo)準(zhǔn)文件要求[1-2，6-7]自建。

根據(jù)定義，LoB是空白樣品能被觀察到的最大測量值；LoD是樣品中檢出最低分析物濃度[8]。本研究結(jié)果表明，BC-6000PLUS WBC-BF、RBCBF的LoB值分別為0×109/L、0×1012/L，LoD值分別為0.004×109/L、0.004×1012/L。當(dāng)標(biāo)本白細(xì)胞計(jì)數(shù)為0.004×109/L或紅細(xì)胞計(jì)數(shù)為0.004×1012/L時(shí)，95%概率能與空白樣本進(jìn)行區(qū)分。根據(jù)WS/T 662—2020關(guān)于“檢測下限不能低于儀器的最低檢出限”的要求，本實(shí)驗(yàn)室設(shè)定BC-6000 PLUS的WBC-BF檢測下限值為0.004×109/L；RBC-BF檢測下限值為0.004×1012/L。當(dāng)WBC-BF與RBC-BF檢測結(jié)果低于檢測下限時(shí)，表明儀器無法保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確，需用人工鏡檢計(jì)數(shù)“金標(biāo)準(zhǔn)”方法來復(fù)檢。

綜上所述，本研究依據(jù)WS/T 514—2017標(biāo)準(zhǔn)要求，建立并評(píng)價(jià)了BC-6000PLUS體液模式的LoB和LoD。因WBC-BF與RBC-BF細(xì)胞計(jì)數(shù)檢出下限值較低，能滿足腦脊液等臨床體液標(biāo)本自動(dòng)化檢測的需求。